ГОСТ 9.085-78

Группа Т99

    
    
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ


Единая система защиты от коррозии и старения

ЖИДКОСТИ СМАЗОЧНО-ОХЛАЖДАЮЩИЕ

Методы испытаний на биостойкость

Single corrosion and ageing protection system.
Cooling lubricant. Bioresistance test methods

    
    
МКС 19.040
        75.100     
ОКСТУ 0009

Дата введения 1979-07-01

    Постановлением Государственного комитета стандартов Совета Министров СССР от 27 июня 1978 г. N 1699 дата введения установлена с 01.07.79
    
    Ограничение срока действия снято по протоколу N 3-93 Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации (ИУС 5-6-93)
    
    ИЗДАНИЕ с Изменением N 1, утвержденным в октябре 1988 г. (ИУС 1-89)
    
    
    Настоящий стандарт распространяется на водосмешиваемые смазочно-охлаждающие жидкости (далее СОЖ) и устанавливает методы лабораторных испытаний на стойкость к воздействию бактерий и плесневых грибов.
    
    (Измененная редакция, Изм. N 1).
    
    

1. МЕТОД ИСПЫТАНИЙ НА СТОЙКОСТЬ К ВОЗДЕЙСТВИЮ АЭРОБНЫХ БАКТЕРИЙ

    
    1.1. Сущность метода
    
    Сущность метода заключается в выдерживании СОЖ, зараженных культурами бактерий в условиях, оптимальных для их развития, с последующей оценкой биостойкости.
    
    1.2. Отбор проб
    
    1.2.1. Пробы СОЖ отбирают по ГОСТ 2517-85 массой 50 г.
    
    1.2.2. Пробами являются СОЖ в состоянии поставки без специальной очистки и стерилизации.
    
    1.2.3. Проб должно быть не менее трех.
    
    1.2.4. Виды бактерий
    
    1.2.4.1. Для испытаний применяют смесь чистых культур следующих видов бактерий:
    
    Escherichia coli (Migyla) Castellani and Chalmers;
    
    Mycobacterium phlei Lehman and Neum;
    
    Pseudomonas aeruginosa Migyla;
    
    Pseudomonas oleovorans Lee and Chandler;
    
    Staphylococcus aureus Rosenbach.
    
    Кроме чистых культур допускается применять смесь накопительных культур, выделенных из испытуемых СОЖ.
    
    1.2.4.2. Чистые культуры бактерий получают в Институте биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР, поддерживают периодическим пересевом и выращивают непосредственно перед испытаниями. Культуры бактерий обновляют один раз в год-два.
    
    1.2.4.1, 1.2.4.2. (Измененная редакция, Изм. N 1).
    
    1.2.4.3. Пересев, выращивание и хранение культур бактерий производят, как указано в ГОСТ 9.082-77.
    
    1.3. Аппаратура, материалы и реактивы - по ГОСТ 9.048-89 со следующим дополнением:
    
    термостат, обеспечивающий поддержание постоянной температуры (30±2) °С*;
    
    электроплитка с закрытой спиралью*;
    
    потенциометр по ГОСТ 9245-79;
    
    горелки газовые*;
    
    цилиндры металлические, полые изготовленные из коррозионно-стойкой стали по ГОСТ 5949-75, внутренним диаметром 7 мм, высотой 10 мм;
    
    чашки биологические (Петри) по ГОСТ 25336-82 с крышками, низкие, типа ЧБН;
    
    груша резиновая*;
    
    доска для сушки посуды;
    
    аппарат для встряхивания колб и пробирок;
    
    стандарты мутности;
    
    рН-метр лабораторный типа ЛПУ-01, рН-340 или другого типа с погрешностью не более 0,05 рН;
    
    ножницы, пинцеты, скальпели*;
    

    штативы лабораторные*;
    
    бульон мясо-пептонный (МПБ) по ГОСТ 9.082-77;
    
    агар мясо-пептонный (МПА) по ГОСТ 9.082-77;
    
    спирт этиловый ректификованный технический по ГОСТ 18300-87, высшего сорта;
    
    кислота соляная по ГОСТ 3118-77;
    
    кислота серная по ГОСТ 4204-77;
    
    калий двухромовокислый по ГОСТ 4220-75;
    
    натрий углекислый по ГОСТ 83-79, безводный;
    
    (Измененная редакция, Изм. N 1).
__________________
    * По документации, утвержденной в установленном порядке.
    
    1.4. Подготовка к испытаниям
    
    1.4.1. Посуда и материалы - по ГОСТ 9.048-89.
    
    1.4.2. Среды для выращивания и хранения чистых культур бактерий и для испытаний готовят по ГОСТ 9.082-77.
    
    1.4.3. Рецептура сред приведена в табл.1.
    
    

Таблица 1

    
    
    1.4.4. Чистые культуры бактерий пересевают и выращивают, как указано в ГОСТ 9.082-77.
    
    1.4.5. Для приготовления бактериальных суспензий культуры, выращенные в течение суток, с помощью бактериологической петли переносят в отдельные пробирки, содержащие 10 см водопроводной воды.
    
    1.4.6. Количество бактериальных клеток определяют с помощью стандартов мутности.
    
    Концентрация бактериальных клеток в суспензии должна быть не менее 2 млн/см.
    
    1.4.7. Приготовленные суспензии взбалтывают и сливают в равных объемах (1-2 см) в стерильную пробирку.
    
    1.4.8. Срок хранения суспензии не более 3 ч.
    
    1.5. Проведение испытаний
    
    1.5.1. Круглую или коническую колбу вместимостью 500 см, содержащую 200-300 см среды 1, помещают в водяную баню и выдерживают при температуре (100±2) °С до тех пор, пока среда полностью не расплавится.
    
    Расплавленную питательную среду охлаждают до температуры 40-50 °С и заражают суспензией смеси бактериальных культур, внося последнюю с помощью градуированной пипетки 2 см на 100 см среды.
    
    (Измененная редакция, Изм. N 1).
    
    1.5.2. Среду после заражения разливают по 15 см в чашки Петри.
    
    1.5.3. На застывшую, строго горизонтальную поверхность среды ставят с помощью пинцета 3 стерильных полых металлических цилиндрика, в каждый из которых вносят по 0,1 см испытуемой СОЖ.
    
    1.5.4. Чашки Петри с цилиндриками закрывают крышками и помещают в термостат при (30±2) °С.
    
    1.5.5. Пробы выдерживают в термостате 24 ч.
    
    1.5.6. Испытания повторяют 3-4 раза.
    
    1.5.7. По окончании испытаний чашки Петри извлекают из термостата и осматривают.
    
    1.6. Оценку бактериостойкости СОЖ проводят по трехбалльной шкале, приведенной в табл.2.
    
    

Таблица 2

    
    
    1.7. Требования безопасности - по ГОСТ 9.023-74 со следующим дополнением: необходимо осуществлять систематический контроль загрязнения микроорганизмами воздуха в производственных помещениях.
    
    Количество микроорганизмов не должно превышать 5000-7000 кл/мвоздуха.
    
    

2. МЕТОД ИСПЫТАНИЙ НА СТОЙКОСТЬ К ВОЗДЕЙСТВИЮ АНАЭРОБНЫХ [СУЛЬФАТРЕДУЦИРУЮЩИХ] БАКТЕРИЙ

    
    2.1. Сущность метода
    
    Сущность метода заключается в способности анаэробных бактерий восстанавливать соединения серы с образованием сероводорода и сульфидов металлов.
    
    Микроорганизмы образуют черные зоны сульфида железа, которые учитываются при оценке бактериостойкости СОЖ.
    
    2.2. Отбор проб - по пп.1.2.1-1.2.3.
    
    2.2.1. Виды бактерий - культуры представителей рода Desulfovibrio.
    
    Допускается использование ассоциативных культур этих бактерий с представителями других родов - Pseudomonas, Achromobacter и др.
    
    2.3. Аппаратура, материалы и реактивы по п.1.3 со следующим дополнением:
    
    аммоний хлористый по ГОСТ 3773-72;
    
    натрий сернокислый кристаллический по ГОСТ 4171-76;
    
    железо лимоннокислое, кристаллическое, ч.д.а.*;
    
    пептон бактериологический*.
__________________
    * По документации, утвержденной в установленном порядке.
         
    2.4. Подготовка к испытаниям - по пп.1.4.1-1.4.4.
    
    2.4.1. Для приготовления бактериальной суспензии используют накопительные культуры сульфатредуцирующих бактерий, выделенные в производственных условиях из пораженных СОЖ.
    
    Для выращивания культуры используют среду 3.
    
    2.4.2. Выращенную культуру в количестве 0,1-0,2 см переносят пипеткой в отдельные пробирки, содержащие 10 см водопроводной воды.
    
    2.4.3. Количество бактериальных клеток определяют с помощью камеры Горяева.
    
    Концентрация бактериальных клеток в суспензии должна быть не менее 2 млн/см.
    
    2.4.4. Срок хранения суспензии-не более 1 ч.
    
    2.5. Проведение испытаний
    
    2.5.1. Испытуемые СОЖ разливают мерной пипеткой по 8-9 см в стеклянные пробирки, добавляют по 0,5-1 см суспензии, тщательно перемешивают и закрывают притертыми пробками.
    
    2.5.2. Пробирки помещают в термостат и выдерживают при температуре (30±2) °С в течение 20-24 ч.
    
    2.5.3. По истечении указанного срока проводят заражение среды 2 испытуемой СОЖ. Для этого 1 см зараженной СОЖ вносят в стерильную пробирку и заливают 10 см предварительно расплавленной и охлажденной до 40 °С - 45  °С средой 2.
    
    2.5.4. Для контроля жизнеспособности бактерий в стерильные пробирки вносят 1 см бактериальной суспензии и 10 см среды 2.
    
    2.5.5. Пробирки с зараженными пробами и контрольные пробирки закрывают притертыми пробками, перемешивают содержимое и помещают в термостат с температурой (30±2)  °С.
    
    2.5.6. Пробирки выдерживают в термостате 4 сут.
    
    2.5.7. По окончании испытаний пробирки извлекают из термостата и осматривают.
    
    2.5.8. Если среда 2 в контрольной пробирке остается бесцветной, культуры бактерий считают нежизнеспособными. Испытания прекращают и повторяют их на новых пробах с вновь приготовленной суспензией бактерий из новой партии бактерий.
    
    2.6. Оценку бактериостойкости СОЖ проводят по трехбалльной шкале, приведенной в табл.3.
    
    

Таблица 3

    
    
    2.5.8, 2.6. (Измененная редакция, Изм. N 1).
    
    2.7. Требования безопасности - по п.1.7.
    
    

3. МЕТОД ИСПЫТАНИЙ НА СТОЙКОСТЬ К ВОЗДЕЙСТВИЮ ПЛЕСНЕВЫХ ГРИБОВ

    
    3.1. Сущность метода
    
    Сущность метода заключается в выдерживании СОЖ, зараженных культурами грибов в условиях, оптимальных для их развития, с последующей оценкой грибостойкости.
    
    3.2. Отбор проб - по пп.1.2.1-1.2.3.
    
    3.2.1. Виды грибов
    
    Aspergillus niger van Thieghem;
    
    Chaetomium globosum Kunze;
    
    Cladosporium gossi picola Pidopl ct Deniak;
    
    Cladosporium resinae Albida;
    
    Penicillium chrysogenum Thom;
    
    Penicillium ochro-cloron Biorge;
    
    Trichoderma koningii Oudemans;
    
    Trichoderma viride Pers. ex. Fr;
    
    Torula convoluta Harz;
    
    Cephalosporium acremonium Corda.
    
    3.2.2. Культуры грибов получают в Институте биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР, поддерживают периодическим пересевом и выращивают непосредственно перед испытаниями.
    
    3.2.1, 3.2.2. (Измененная редакция, Изм. N 1).
    
    3.2.3. Пересев, выращивание и хранение грибов - по ГОСТ 9.048-89.
    
    3.3. Аппаратура, материалы и реактивы - по ГОСТ 9.048-89.
    
    3.4. Подготовка к испытаниям
    
    3.4.1. Посуда и материалы - по ГОСТ 9.048-89.
    
    3.4.2. Среды для выращивания и хранения чистых культур грибов и для испытаний готовят по ГОСТ 9.048-89.
    
    3.4.3. Рецептура сред приведена в табл.1.
    
    3.4.4. Чистые культуры грибов пересевают и выращивают по ГОСТ 9.048-89, используя грибы, приведенные в п.3.2.1.
    
    3.4.5. Приготовление суспензии спор грибов и контроль жизнеспособности спор грибов проводят по ГОСТ 9.048-89.
    
    3.5. Проведение испытаний
    
    3.5.1. Коническую колбу вместимостью 500 см, содержащую среду 5 в количестве 300 г, выдерживают при температуре (100±2) °С на водяной бане до полного расплавления среды.
    
    3.5.2. Расплавленную питательную среду охлаждают до температуры 40-45 °С и заражают водной суспензией спор грибов, внося последнюю с помощью градуированной пипетки - 2 см на 100 см среды.
    
    3.5.3. На застывшую строго горизонтальную поверхность среды ставят с помощью пинцета 3 полых металлических цилиндра, в каждый из которых вносят по 0,1 см испытательной СОЖ.
    
    3.5.2, 3.5.3. (Измененная редакция, Изм. N 1).
    
    3.5.4, 3.5.5. (Исключены, Изм. N 1).
    
    3.5.6. Чашки Петри помещают в эксикатор, на дно которого налита дистиллированная вода. Эксикатор устанавливают в термостат с температурой (28±2) °С.
    
    3.5.7. Пробы выдерживают в термостате 28 сут. Через каждые 7 сут крышку эксикатора приоткрывают на 3 мин для притока воздуха.
    
    3.5.8. По окончании испытаний чашки Петри извлекают из эксикатора и осматривают.
    
    3.6. Оценку грибостойкости СОЖ проводят по трехбалльной шкале, приведенной в табл.4.
    
    

Таблица 4

    
    
    3.7. Требования безопасности - по ГОСТ 9.048-89.
    
    
    
Текст документа сверен по:
официальное издание
Смазочные материалы, индустриальные
масла и родственные продукты.
Методы анализа: Сб. стандартов. -
М.: Стандартинформ, 2006