МУК 4.1.1399-03  

     
     
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств тиаклоприда в воде, почве и яблоках
методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

     
     
Дата введения: 2003-06-30

     
     
     УТВЕРЖДЕНЫ Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации Г.Г. Онищенко 24 июня 2003 г.
     
     

1. Вводная часть

     
     Фирма-производитель: Байер КропСайенс (Германия).
     
     Торговое название: КАЛИПСО.
     
     Действующее вещество: тиаклоприд (YRC 2894).
     
     N-[3-(6-хлорпиридин-3-илметил)-тиазолидин-2-илиден]-цианамид (ИЮПАК).
     
     [3-[(6-хлор-3-пиридинил)метил]-2-тиазолидинилиден]-цианамид (С.А.).

     Эмпирическая формула: CHClNS.
     
     Молекулярная масса: 252,8.
     
     Кристаллическое вещество желтоватого цвета без запаха.
     
     Температура плавления: 136 °С.
     
     Давление паров при 20 °С: 3х10 мПа.
     
     Коэффициент распределения н-октанол/вода: 1,25.
     
     Растворимость (г/л) при 20 °С: вода - 0,185, гептан - менее 0,1, дихлорметан - 160, ацетон - 64, ацетонитрил - 52, 2-пропанол - 3,0, ксилол-0,3.
     
     Вещество устойчиво к гидролизу и относительно стабильно на свету ( более 100 дней).
     
     Тиаклоприд относительно слабо передвигается по почвенному профилю и очень быстро разрушается в почве в аэробных условиях (0,4-2,7 дня).
     
     В растениях соединение метаболизируется с очень низкой скоростью.
     
     Тиаклоприд практически нетоксичен для пчел, птиц, дождевых червей, водорослей.
     
     Гигиенические нормативы
     
     ОДК в почве - 0,07 мг/кг; ПДК в воде водоемов - 0,004 мг/дм; ВМДУ в яблоках - 0,02 мг/кг.
     
     Область применения препарата
     
     Тиаклоприд - инсектицид нервно-паралитического действия, эффективно уничтожает тлю, цветоеда, минеров, трипсов, плодожорку, колорадского жука на хлопчатнике, табаке, картофеле, рисе, овощных культурах, цитрусовых, косточковых и семечковых плодовых в течение вегетационного периода.
     
     

2. Методика определения остаточных количеств тиаклоприда в воде, почве
и яблоках методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

     
     Метод основан на определении тиаклоприда методом обращеннофазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором после извлечения препарата из воды дихлорметаном, из почвы и яблок водным ацетоном, очистки экстрактов перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и на колонке с силикагелем.
     
     Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.
     

2.1.2. Избирательность метода

     
     В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых при возделывании яблоневых садов.
     

2.1.3. Метрологическая характеристика метода

     
     
Таблица 1

     
Метрологические параметры метода

     
     
Таблица 2

     
Полнота определения тиаклоприда в модельных матрицах (5)

2.2. Реактивы, растворы, материалы

2.3. Приборы, аппаратура, посуда

2.4. Отбор проб

     
     Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79).
     
     Отобранные пробы почвы и яблок хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике не более трех дней. Для длительного хранения пробы почвы доводят до воздушно-сухого состояния и хранят в холодильнике; пробы яблок хранят до анализа в морозильной камере при температуре -18 °С. Пробы воды хранят при температуре не выше 4 °С в течение 3 дней, при температуре -18 °С в течение месяца.
     
     Перед анализом сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм, а яблоки измельчают.
     

2.5. Подготовка к определению

     
2.5.1. Подготовка и очистка реактивов и растворителей

     
     Органические растворители перед началом работы очищают, сушат и перегоняют в соответствии с типовыми методиками. Гексан встряхивают с небольшими порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока свежая порция кислоты не перестанет окрашиваться. Затем гексан последовательно промывают водой, 2%-ным раствором гидроксида натрия и снова водой, после чего его сушат над гидроксидом натрия и перегоняют.
     
     Ацетонитрил сушат над пентоксидом фосфора и перегоняют; отогнанный растворитель повторно перегоняют над углекислым калием. Этилацетат промывают равным объемом 5%-ного раствора двууглекислого натрия, сушат над хлористым кальцием и перегоняют.
     

2.5.2. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ

     
     Отмеряют 325 мл ацетонитрила, переносят в колбу на 1000 мл, добавляют 675 мл бидистиллированной воды, перемешивают, фильтруют, дегазируют.
     

2.5.3. Кондиционирование колонки

     
     Промыть колонку для ВЭЖХ смесью ацетонитрил-вода (32,5:67,5, по объему) в течение 30 мин при скорости подачи растворителя 1 мл/мин. Включить детектор и подождать стабилизации базовой линии (5-15 мин).
     

2.5.4. Приготовление стандартных растворов

     
     Основной стандартный раствор тиаклоприда с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 0,010 г препарата, содержащего 99,5% д.в., в ацетонитриле - в мерной колбе на 100 мл. Раствор хранят в холодильнике при температуре -12 °С не более месяца.
     
     Рабочие стандартные растворы с концентрациями 0,04; 0,08; 0,20 и 0,40 мкг/мл готовят из основного стандартного раствора тиаклоприда соответствующим последовательным разбавлением подвижной фазой для ВЭЖХ (п.2.5.2). Рабочие растворы хранят в холодильнике не более одного дня.
     
     При изучении полноты открывания тиаклоприда в модельных матрицах используются ацетонитрильные растворы вещества.
     

2.5.5. Построение калибровочного графика

     
     Для построения калибровочного графика в инжектор хроматографа вводят по 50 мкл рабочего стандартного раствора тиаклоприда с концентрацией 0,04; 0,08; 0,20 и 0,40 мкг/мл. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений и находят среднее значение высоты хроматографического пика для каждой концентрации. Строят калибровочный график зависимости высоты хроматографического пика в мм от концентрации тиаклоприда в растворе в мкг/мл.
     

2.5.6. Подготовка колонки с силикагелем для очистки экстракта

     
     В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 1,8 см вставляют тампон из стекловаты, закрывают кран и вносят суспензию 5 г силикагеля в 20 мл смеси гексан-этилацетат (2:8, по объему). Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку последовательно промывают 50 мл смеси гексан-этилацетат (2:8, по объему) и 30 мл смеси гексан-этилацетат (5:5, по объему) со скоростью 1-2 капли в секунду, после чего она готова к работе.

2.6. Описание определения

2.6.1. Экстракция тиаклоприда

     
     2.6.1.1. Вода. 100 мл предварительно отфильтрованной воды помещают в делительную воронку емкостью 250 мл и обрабатывают 10 мл гексана при встряхивании в течение 1 мин. Гексановый слой отбрасывают и водную фазу экстрагируют дихлорметаном трижды (30+30+20 мл). Объединенную органическую фазу пропускают через слой безводного сульфата натрия и упаривают на роторном вакуумном испарителе досуха при температуре 30 °С. Дальнейшую очистку экстракта проводят по п.2.6.3.
     
     2.6.1.2. Почва. Навеску (20 г) воздушно-сухой почвы помещают в коническую колбу емкостью 250 мл, приливают 100 мл смеси ацетон-вода (3:1, по объему) и суспензию перемешивают в течение 30 мин на аппарате для встряхивания. Добавляют 2 г целита и фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Осадок на фильтре промывают 50 мл смеси ацетон-вода (3:1, по объему). Из объединенного экстракта отбирают четвертую часть объема (около 35 мл) раствора, эквивалентную 5 г почвы. Дальнейшую очистку проводят по п.п.2.6.2 и 2.6.3.
     
     2.6.1.3. Яблоки. К навеске (25 г) измельченного материала добавляют 125 мл смеси ацетон-вода (3:1, по объему) и гомогенизируют 3 мин при 10000 об./мин. К суспензии добавляют 2 г целита и фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу на 250 мл. Остаток на фильтре промывают 50 мл указанного выше водного ацетона. Из объединенного экстракта отбирают пятую часть объема раствора (около 35 мл), эквивалентную 5 г растительной ткани. Дальнейшую очистку проводят по п.п.2.6.2 и 2.6.3.
     

2.6.2. Очистка экстракта

     
     Отобранные аликвоты растительного (из п.2.6.1.3) и почвенного (из п.2.6.1.2) экстрактов упаривают до объема 5-7 мл на роторном испарителе при температуре 30 °С. Водный остаток переносят в делительную воронку вместимостью 100 мл, приливают 20 мл бидистиллированной воды, 5 мл гексана и смесь встряхивают в течение 1 мин. Органический слой отбрасывают. Водную фазу трижды обрабатывают дихлорметаном (30+30+20 мл) при встряхивании. Объединенный дихлорметановый экстракт пропускают через слой безводного сульфата натрия и упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30 °С.
     

2.6.3. Очистка на колонке с силикагелем

     
     Остаток в колбе, полученный при упаривании экстракта воды (п.2.6.1.1) или очищенных по п.2.6.2 экстрактов яблок и почвы, количественно переносят тремя 1-мл порциями смеси гексан-этилацетат (5:5, по объему) в подготовленную хроматографическую колонку (п.2.5.6). Колонку промывают 30 мл смеси гексан-этилацетат (4:6, по объему), которые отбрасывают. Тиаклоприд элюируют 50 мл смеси гексан-этилацетат (2:8, по объему) и собирают элюат в грушевидную колбу емкостью 100 мл. Раствор упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30 °С. Сухой остаток экстракта воды растворяют в 1 мл, а остаток экстрактов яблок и почвы в 2,5 мл подвижной фазы для ВЭЖХ (п.2.5.2) и анализируют на содержание тиаклоприда по п.2.7.
     
     Примечание. При использовании новой партии сорбента или растворителей проводится проверка хроматографического поведения тиаклоприда на колонке с силикагелем.
     
     

2.7. Условия хроматографирования

     
     Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором Altex (США).
     
     Колонка стальная длиной 15 см, внутренним диаметром 4 мм, содержащая Диасорб 130-С10 CN, зернением 5 мкм.
     
     Температура колонки: комнатная.
     
     Подвижная фаза: ацетонитрил-вода (32,5:67,5, по объему).
     
     Скорость потока элюента: 0,7 мл/мин.
     
     Рабочая длина волны: 242 нм.
     
     Чувствительность: 0,02 ед. абсорбции на шкалу.
     
     Объем вводимой пробы: 50 мкл.
     
     Время выхода тиаклоприда: около 6 мин.
     
     Линейный диапазон детектирования: 2-20 нг.
     
     Образцы, дающие пики большие чем стандартный раствор с концентрацией 0,4 мкг/мл, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ.
     
     Альтернативная неподвижная фаза: Диасорб 130-С8 Т.
     
     Подвижная фаза: ацетонитрил-вода (25:75, по объему).
     
     Время выхода: 5,4 мин.
     

2.8. Обработка результатов анализа

     
     Содержание тиаклоприда рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:
     

,

где  - содержание тиаклоприда в пробе, мг/кг или мг/дм;

      - высота пика образца, мм;
     
      - высота пика стандарта, мм;
     
      - концентрация стандартного раствора тиаклоприда, мкг/мл;
     
      - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл;
     
      - масса или объем анализируемой части образца, г или мл (для воды - 100 мл; для почвы и яблок - 5 г).
     
     

3. Требования техники безопасности

     
     Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами.
     
     

4. Контроль погрешности измерений

     
     Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости результатов измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95 "ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа".
          
     

5. Разработчики

     
     Дубовая Л.В., Талалакина Т.Н., Макеев А.М.
     
     ВНИИ фитопатологии, 143050 Московская обл., Большие Вяземы, тел. 592-92-20.
     
     
     
Текст документа сверен по:
официальное издание
Определение остаточных количеств пестицидов
в пищевых продуктах, сельскохозяйственном сырье
и объектах окружающей среды: Сб. методических указаний.
Выпуск 3. Часть 4. МУК 4.1.1399-4.1.1403-03. -
М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии
Роспотребнадзора, 2006