МУК 4.1.1148-02

     
     
Методические указания


4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств Флудиоксонила в воде, почве, зеленой массе
растений, клубнях картофеля, зерне и соломе хлебных злаков, зерне кукурузы,
семенах и масле подсолнечника методом высокоэффективной
жидкостной хроматографии

     
     
Дата введения 2003-01-01

     
     
     УТВЕРЖДЕНЫ Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации Г.Г.Онищенко
     
     

1. Вводная часть

     
     Фирма производитель: Сингента (Швейцария).
     
     Торговое название: МАКСИМ, ЦЕЛЕСТ.
     
     Действующее вещество: флудиоксонил.
     
     4-(2,2-дифтор-1,3-бензодиоксил-4-ил)-1Н-пиролл-3-карбонитрил.
          

     Бесцветное кристаллическое вещество без запаха.
     
     Температура плавления: 199,8 °С.
     
     Хорошо растворим в ацетоне, этаноле, метаноле, н-октаноле, плохо растворим в гексане; растворимость в воде: 1,5-1,8 мг/л.
     
     Краткая токсикологическая характеристика
     
     Острая пероральная токсичность (ЛД ) мыши, крысы - более 5000 мг/кг; острая дермальная токсичность (ЛД ) крысы - более 2000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (ЛК ) крысы - более 2600 мг/м.
     
     Гигиенические нормативы
     
     ПДК в воде водоемов - 0,1 мг/дм (органолепт.)
     
     ОДК в почве - 0,2 мг/кг
     
     МДУ в зерне хлебных злаков и кукурузы - 0,02 мг/кг
     
     ВМДУ в картофеле - 0,02 мг/кг (целест)
     
     МДУ в картофеле - 0,05 мг/кг (максим)
     
     ВМДУ в семенах и масле подсолнечника - 0,05 мг/кг (максим)
     
     Область применения препарата
     
     Флудиоксонил - контактный фунгицид широкого спектра действия с продолжительной активностью, рекомендуемый для предпосевной обработки семян озимой и яровой пшеницы, озимой ржи, кукурузы, подсолнечника и гороха против болезней всходов, а также клубней картофеля против комплекса болезней при хранении. В качестве протравителя семян выпускается в виде 2,5%-ного концентрата суспензии.
     
     

2. Методика определения остаточных количеств Флудиоксонила в воде, почве,
зеленой массе растений, клубнях картофеля, зерне и соломе хлебных злаков,
зерне кукурузы, семенах и масле подсолнечника методом высокоэффективной
жидкостной хроматографии

     
2.1. Основные положения

     
2.1.1. Принцип метода

     
     Метод основан на определении флудиоксонила с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором после экстракции из воды - дихлорметаном, из увлажненной почвы - метиловым спиртом, из картофеля - смесью метилового спирта с ацетоном (4:1), из зерна, соломы и зеленой массы - водным ацетоном, из семян и масла подсолнечника - ацетонитрилом, очистки экстракта перераспределением в системе растворителей и на колонке с нейтральным оксидом алюминия при анализе проб почвы, подсолнечника и картофеля, а также силикагелем или флорисилом при анализе проб зерна, соломы и зеленой массы хлебных злаков или кукурузы.
     
     Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.
     

2.1.2. Избирательность метода

     
     В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых в интенсивной технологии выращивания зерновых культур, подсолнечника и картофеля (хлор- и фосфорорганические пестициды, симм-триазины, фенилмочевины, тио- и дитиокарбаматы).
     

2.1.3. Метрологическая характеристика метода

     
     
Таблица 1

Метрологические параметры метода*

     
     
2.2. Реактивы, растворы и материалы

2.4. Отбор проб

     
     Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79).
     
     Отобранные пробы воды, почвы и картофеля хранят в стеклянной таре в сухом и защищенном от света месте не более 2 суток. Если пробы хранятся в холодильнике, то при подготовке к анализу следует выдержать их не менее часа при комнатной температуре.
     
     Образцы зерна и соломы хлебных злаков, а также зерна и зеленой массы кукурузы и семян подсолнечника можно хранить в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре не выше 4 °С в течение месяца. Пробы зеленой массы подсолнечника хранят при температуре 0-4 °С в течение суток. Для более длительного хранения зеленую массу кукурузы и подсолнечника замораживают (лучше жидким азотом) и хранят в морозильной камере при температуре -18 °С в течение 3 месяцев.
     
     Перед анализом зерно и семена измельчают на мельнице, солому и зеленую массу кукурузы и подсолнечника режут ножом или ножницами на кусочки не более 0,5 см, картофель натирают на крупной терке, воду (при наличии взвеси) фильтруют через неплотный бумажный фильтр, сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 0,5-1 мм.
     

2.5. Подготовка к определению

     
2.5.1. Подготовка и очистка реактивов и растворителей

     
     Органические растворители перед началом работы очищают, сушат и перегоняют в соответствии с типовыми методиками. Гексан встряхивают с небольшими порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока свежая порция кислоты не перестанет окрашиваться. Затем гексан последовательно промывают водой, 2%-ным раствором гидроксида натрия и снова водой, после чего сушат над гидроксидом натрия и перегоняют.
     
     Этилацетат промывают равным объемом 5%-ного раствора углекислого натрия, сушат над хлористым кальцием и перегоняют.
     
     Диэтиловый эфир (1 л) предварительно встряхивают с 20 мл свежеприготовленного раствора железного купороса (30 г сульфата железа в 55 мл воды с добавлением 1,54 г концентрированной серной кислоты), затем эфир последовательно промывают 0,5%-ным раствором перманганата калия, 5%-ным раствором гидроксида натрия и водой, сушат над хлористым кальцием и перегоняют.
     
     Ацетонитрил сушат над пентоксидом фосфора и перегоняют; отогнанный растворитель повторно перегоняют над углекислым калием.
     
     Оксид алюминия V степени активности по Брокману получают добавлением 12% воды к навеске оксида алюминия II степени активности.
     

2.5.2. Подготовка подвижной фазы N 1 для ВЭЖХ (для анализа по п.п.2.7.1 и 2.7.4)

     
     Отмеряют 500 мл ацетонитрила, прозрачного при 260-280 нм, переносят в колбу на 1000 мл, добавляют 500 мл бидистиллированной воды, фильтруют, дегазируют.
     

2.5.3. Кондиционирование колонки Hipersil ODS и Кромасил 100А-С18

     
     Промыть колонку для ВЭЖХ подвижной фазой N 1 в течение 30 мин при скорости подачи растворителя 1 мл/мин. Включить детектор и подождать стабилизацию базовой линии (5-15 мин).
     

2.5.4. Подготовка подвижной фазы N 2 для ВЭЖХ (для анализа по п.2.7.2)

     
     В мерную колбу на 100 мл наливают 50-70 мл хлороформа, вносят 0,5 мл метанола и доводят хлороформом до метки, фильтруют.
     

2.5.5. Кондиционирование колонки Силасорб 600

     
     Промыть колонку для ВЭЖХ подвижной фазой N 2 при скорости подачи растворителя 200 мкл/мин до получения стабильной базовой линии.
     

2.5.6. Подготовка подвижной фазы N 3 для ВЭЖХ (для анализа по п.2.7.3)

     
     В мерную колбу на 100 мл наливают по 4 мл изопропанола и метанола, доводят объем раствора в колбе до метки гексаном, фильтруют.
     

2.5.7. Кондиционирование колонки Сепарон CGN-CN

     
     Промыть колонку для ВЭЖХ подвижной фазой N 3 при скорости подачи растворителя 200 мкл/мин до получения стабильной базовой линии.
     

2.5.8. Приготовление стандартных растворов

     
     2.5.8.1. Серия N 1 (для измерения согласно пп.2.7.1 и 2.7.4). Стандартный раствор флудиоксонила с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 0,01 г вещества в ацетонитриле в мерной колбе на 100 мл. Раствор хранится в холодильнике в течение 30 дней.
     
     Рабочие стандартные растворы с концентрацией 0,025; 0,05; 0,1; 0,25 и 0,5 мкг/мл готовят из раствора, содержащего 100 мкг/мл флудиоксонила, соответствующим последовательным разбавлением подвижной фазой N 1 для ВЭЖХ (п.2.5.1). Растворы хранятся в холодильнике в течение 3 дней.
     
     2.5.8.2. Серия N 2 (для измерения согласно п.2.7.2). Стандартный раствор флудиоксонила с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 0,01 г вещества в подвижной фазе N 2 для ВЭЖХ (п.2.5.3) в мерной колбе на 100 мл. Раствор хранится в холодильнике в течение 30 дней.
     
     Рабочие стандартные растворы с концентрацией 0,5; 1,0; 2,0; 5,0 и 10 мкг/мл готовят из раствора, содержащего 100 мкг/мл соответствующим последовательным разбавлением подвижной фазой N 2 для ВЭЖХ. Растворы хранятся в холодильнике в течение 10 дней.
     
     2.5.8.3. Серия N 3 (для измерения согласно п.2.7.3). Стандартный раствор флудиоксонила с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 0,01 г вещества в 96%-ном этиловом спирте в мерной колбе на 100 мл. Раствор можно хранить в холодильнике 3 месяца.
     
     Рабочие стандартные растворы с концентрацией 0,5; 1,0; 2,0; 5,0; и 10 мкг/мл готовят из раствора, содержащего 100 мкг/мл соответствующим последовательным разбавлением 96%-ным этиловым спиртом. Рабочие растворы можно хранить в холодильнике 1 месяц.
     

2.5.9. Построение градуировочного графика

     
     2.5.9.1. Градуировочный график N 1 (измерение по п.2.7.1). Для построения градуировочного графика N 1 в инжектор хроматографа вводят по 20 мкл рабочего стандартного раствора флудиоксонила с концентрацией 0,025; 0,05; 0,1; 0,25 мкг/мл.
     
     2.5.9.2. Градуировочный график N 2 и 3 (измерение по п.2.7.2 и п.2.7.3). В инжектор хроматографа вводят по 10 мкл рабочего стандартного раствора флудиоксонила с концентрацией 0,5; 1,0; 2,0; 5,0 и 10 мкг/мл (серия N 2 или N 3).
     
     2.5.9.3. Градуированный график N 4 (измерение по п.2.7.4). В инжектор хроматографа вводят по 50 мкл рабочего стандартного раствора флудиоксонила с концентрацией 0,05; 0,1; 0,25 и 0,5 мкг/мл.
     
     Осуществляют не менее 5 параллельных измерений. Находят среднее значение высоты хроматографического пика для каждой концентрации.
     
     Строят градуировочный (N 1, N 2, N 3 или N 4) график зависимости высоты хроматографического пика в мм от концентрации флудиоксонила в растворе в мкг/мл.
     

2.5.10. Подготовка колонок с оксидом алюминия, силикагелем и флорисилом для очистки экстракта

     
     2.5.10.1. Заполнение колонки А оксидом алюминия. При анализе клубней картофеля используют стеклянную колонку высотой 5 см, внутренним диаметром 10 мм, с пористым фильтром, которую заполняют слоем оксида алюминия II степени активности по Брокману, нейтральным, высотой 2 см и промывают метиловым спиртом (5 мл).
     
     При анализе зеленой массы, семян и масла подсолнечника используют стеклянную колонку длиной 25 см и внутренним диаметром 10 мм. В нижнюю часть этой колонки вставляют тампон из стекловаты и медленно выливают в нее (при открытом кране) суспензию 10 г оксида алюминия V степени активности по Брокману в гексане. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку промывают 20 мл смеси гексан-этилацетат (90:10, по объему) со скоростью 1-2 кап./с, после чего она готова для работы.
     
     2.5.10.2. Заполнение колонки Б силикагелем. Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см, внутренним диаметром 8-10 мм уплотняют тампоном из стекловаты, медленно выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 2 г силикагеля в 20-25 мл гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 0,5 см. Колонку промывают 20 мл элюента N 1 состава (по объему) гексан-ацетон, 95:5, затем 20 мл гексана со скоростью 1-2 кап./с. После этого колонка готова к работе.
     
     2.5.10.3. Заполнение колонки В флорисилом. Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см, внутренним диаметром 8-10 мм уплотняют тампоном из стекловаты, насыпают в нее 5 г флорисила, промывают 30 мл ацетона, сушат сорбент потоком воздуха, используя разряжение, создаваемое водоструйным насосом. Затем колонку смачивают, пропуская через нее 30 мл гексана со скоростью 1-2 кап./с (для удаления пузырьков воздуха постукивают о стенки колонки стеклянной палочкой). Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента. После этого колонка готова к работе.
     

2.5.11. Проверка хроматографического поведения флудиоксонила на колонке с оксидом алюминия

     
     В круглодонную колбу емкостью 10 мл отбирают 0,1 мл стандартного раствора флудиоксонила с концентрацией 100 мкг/мл, отдувают растворитель током теплого воздуха, остаток растворяют в 3 мл элюента N 3 и наносят на подготовленную колонку А. Промывают колонку 70 мл элюента N 3 со скоростью 1-2 кап./с. Отбирают фракции по 5 мл каждая, упаривают досуха, остаток растворяют в 5 мл подвижной фазы N 1 для ВЭЖХ и анализируют на содержание флудиоксонила по п.2.7.4.
     
     Фракции, содержащие флудиоксонил, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 20 мл подвижной фазы N 1 и вновь анализируют по п.2.7.4. Рассчитывают содержание вещества в элюате, определяют полноту смывания с колонки и необходимый для очистки объем элюента.
     

2.5.12. Проверка хроматографического поведения флудиоксонила на колонках с силикагелем и флорисилом

     
     В круглодонную колбу на 10 мл отбирают 0,1 мл стандартного раствора флудиоксонила серии N 2 с концентрацией 100 мкг/мл (колонка Б) или 10 мкг/мл (колонка В), отдувают растворитель потоком теплого воздуха; остаток растворяют в 2-3 мл элюента N 1 (колонка Б) или N 2 (колонка В) и наносят на колонку. Промывают колонку 70 мл элюента N 1 (колонка Б) или N 2 (колонка В) со скоростью 1-2 кап./с. Отбирают фракции по 5 мл каждая, упаривают, остаток растворяют в 10 мл подвижной фазы N 1 или 1 мл подвижной фазы N 2 и анализируют на содержание флудиоксонила соответственно по п.2.7.1 или п.2.7.2.
     
     Фракции, содержащие флудиоксонил, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 10 или 1 мл подвижной фазы N 1 или N 2 и анализируют соответственно по п.2.7.1 или п.2.7.2. Рассчитывают содержание вещества в элюате, определяют полноту смывания с колонки и необходимый для очистки объем элюента.
     
     Примечание. Профиль вымывания может измениться при использовании новой партии сорбентов и растворителей.
     
     

2.6. Описание определения

     
2.6.1. Вода

     
     100 мл отобранного образца воды помещают в делительную воронку вместимостью 500 мл, добавляют в нее 10 мл насыщенного раствора хлорида натрия, 25 мл дихлорметана и встряхивают на аппарате для встряхивания в течение 30 мин.
     
     После разделения смеси, отделяют нижний органический слой и пропускают его через химическую воронку диаметром 30-37 мм (отверстие прикрывают тампоном ваты), содержащую безводный сульфат натрия, собирая экстракт в грушевидную колбу вместимостью 100 мл.
     
     Оставшийся в делительной воронке водный слой подвергают повторной автоматической экстракции новой порцией дихлорметана объемом 25 мл и повторный экстракт после сушки над безводным сульфатом натрия присоединяют к ранее полученному. Объединенный экстракт упаривают на ротационном вакуумном испарителе до объема 5 мл, а затем количественно переносят его в грушевидную колбу вместимостью 10 мл и упаривают досуха. Остаток растворяют в 1 мл дихлорметана и анализируют на содержание флудиоксанила по п.2.7.3.
     

2.6.2. Почва

     
     2.6.2.1. Экстракция. К 25 г отобранного образца почвы, помещенного в коническую колбу вместимостью 300 мл, добавляют 15 мл воды и 100 мл метанола и помещают на аппарат для встряхивания на 1 час.
     
     Затем полученную массу фильтруют через воронку Бюхнера, снабженную бумажным фильтром "синяя лента", промывают остаток на фильтре 25 мл чистого метанола.
     
     Фильтрат из колбы Бунзена количественно переносят в делительную воронку вместимостью 1 л и подвергают очистке по п.2.6.2.2.
     
     2.6.2.2. Очистка экстракта. К раствору в делительной воронке добавляют 50 мл насыщенного раствора хлорида натрия, 450 мл воды и подвергают экстракции 75 мл дихлорметана в течение 5 минут.
     
     После разделения смеси отделяют нижний органический слой, собирая его в коническую колбу вместимостью 500 мл. Водную фазу подвергают экстракции дихлорметаном порциями по 75 мл еще дважды.
     
     Объединенный экстракт, осушенный безводным сульфатом натрия, упаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха, остаток растворяют в 5 мл метанола, раствор количественно переносят в грушевидную колбу вместимостью 10 мл и упаривают до объема 1 мл.
     
     Сконцентрированный метанольный раствор наносят с помощью пипетки на приготовленную очистительную колонку А с оксидом алюминия, колонку промывают 2 мл метанола и собранный элюат упаривают досуха в грушевидной колбе. Остаток растворяют в 1 мл дихлорметана и анализируют на содержание флудиоксонила по п.2.7.3.
     

2.6.3. Картофель

     
     25 г измельченного образца семенного материала помещают в коническую колбу вместимостью 200 мл, добавляют к нему 100 мл смеси метанола и ацетона (4:1) и встряхивают в течение 1 часа.
     
     Дают раствору отстояться и осторожно декантируют через химическую воронку диаметром 60 мм, снабженную бумажным фильтром "синяя лента" в коническую колбу вместимостью 300-500 мл. Пробу картофеля подвергают экстракции еще дважды метанолом порциями по 50 мл. Отстоявшийся метанольный раствор также декантируют через химическую воронку в колбу с ранее полученным экстрактом.
     
     Оставшуюся в колбе для экстракции массу фильтруют через воронку Бюхнера, снабженную бумажным фильтром "синяя лента", промывая остаток на фильтре 25 мл метанола.
     
     Объединенный метанольный экстракт и промывку количественно переносят в делительную воронку вместимостью 1 л, далее проводят процедуру очистки экстракта в соответствии с п.2.6.2.2.
     

2.6.4. Зерно и солома хлебных злаков, зерно и зеленая масса кукурузы

     
     2.6.4.1. Экстракция. Навеску 25 г измельченного зерна хлебных злаков или кукурузы, зеленой массы кукурузы (10 г соломы) помещают в коническую колбу на 250 мл, смачивают 30 мл воды и тщательно перемешивают. Добавляют в колбу 75 мл (для соломы 100 мл) ацетона и встряхивают 1 час. Отстоявшийся раствор сливают через бумажный фильтр в круглодонную колбу на 500 мл. Процедуру экстракции повторяют еще дважды, используя по 50 мл ацетона для зерна и зеленой массы кукурузы, 100 и 75 мл ацетона для соломы. Объединенный экстракт концентрируют на ротационном вакуумном испарителе до водного остатка (30-40 мл). К оставшемуся водному раствору добавляют примерно равный объем ацетона и помещают в морозильную камеру бытового холодильника на 1 час. Отфильтровывают выпавший осадок через бумажный фильтр, промывая его 20 мл охлажденной смеси ацетон-вода (1:1, по объему). Раствор сливают в круглодонную колбу на 250 мл упаривают до объема 30-40 мл. К оставшемуся водному раствору добавляют 50 мл дистиллированной воды, 10 мл насыщенного раствора NaCl, переносят в делительную воронку на 250 мл и экстрагируют трижды по 20 мл смеси гексан-эфир (4:1). Объединенную органическую фазу упаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха.
     
     Остаток растворяют в 5 мл ацетона, добавляют 70 мл воды и 10 мл насыщенного раствора NaCl. Раствор переносят в делительную воронку на 250 мл и экстрагируют трижды по 20 мл хлороформа. Хлороформный экстракт сливают через слой безводного сульфата натрия в круглодонную колбу на 100 мл и упаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха.
     
     Далее проводят очистку экстрактов на колонке Б с силикагелем по п.2.6.4.2 или на колонке В с флорисилом по п. 2.6.4.3. Очистка на колонке с флорисилом является более эффективной.
     
     2.6.4.2. Очистка на колонке Б с силикагелем. Остаток в колбе, полученный по п.2.6.4.1 с помощью 3-5 мл элюента N 1 количественно переносят пипеткой в колонку Б, дают растворителю стечь до верхнего края сорбента. Промывают колонку 30 мл гексана, который отбрасывают, затем 35 мл основного элюента N 1. Первые 10 мл основного элюата отбрасывают, оставшиеся 25 мл собирают в круглодонную колбу на 50-100 мл и упаривают досуха. Остаток экстракта зерна и зеленой массы кукурузы растворяют в 10 мл, соломы - в 4-х мл подвижной фазы N 1 или в 1 мл подвижной фазы N 2 (для всех растительных объектов) и анализируют на содержание флудиоксонила соответственно по п.2.7.1 или 2.7.2.
     
     2.6.4.3. Очистка на колонке В с флорисилом. Остаток в колбе по п.2.6.4.2 с помощью 3-5 мл элюента N 1 количественно переносят пипеткой в колонку В, дают растворителю стечь до верхнего края сорбента. Промывают колонку 20 мл гексана, 30 мл элюента N 1, затем 50 мл основного элюента N 2. Гексан, элюат N 1, а также 20 мл основного элюата N 2 отбрасывают, остальные 30 мл собирают в круглодонную колбу на 50-100 мл и упаривают досуха. Остаток экстракта зерна и зеленой массы кукурузы растворяют в 10 мл, соломы - в 4-х мл подвижной фазы N 1 или в 1 мл подвижной фазы N 2 (для всех растительных объектов) и анализируют на содержание флудиоксонила соответственно по п.2.7.1 или 2.7.2.
     

2.6.5. Зеленая масса, семена и масло подсолнечника

     
     2.6.5.1. Экстракция. Навеску (25 г) измельченной зеленой массы заливают 100 мл ацетонитрила и гомогенизируют в течение 5 минут при 8000 об./мин. Гомогенат фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Остаток на фильтре промывают 50 мл ацетонитрила. Из объединенного экстракта отбирают аликвоту (около 30 мл), эквивалентную 5 г растительного материала.
     
     Навеску (10 г) размолотых семян помещают в коническую колбу емкостью 250 мл, приливают 100 мл ацетонитрила и помещают в ультразвуковую баню на 5 минут. Суспензию фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр и остаток на фильтре промывают 30 мл ацетонитрила. Из полученного экстракта отбирают аликвоту раствора (около 60 мл), эквивалентную 5 г семян.
     
     К навеске (5 г) масла добавляют 20 мл гексана и переносят в делительную воронку, приливают 30 мл ацетонитрила и смесь встряхивают в течение 1 минуты. Собирают ацетонитрильную фазу, а гексановый раствор масла повторно экстрагируют 20 мл ацетонитрила. Ацетонитрильные фракции объединяют.
     
     2.6.5.2. Очистка экстрактов. Аликвоты экстрактов зеленой массы, и семян, и ацетонитрильный экстракт масла переносят в делительную воронку емкостью 100 мл, добавляют 20 мл гексана и смесь встряхивают в течение 1 минуты. Гексановый слой отбрасывают, а ацетонитрильную фазу упаривают на роторном вакуумном испарителе досуха при температуре 40 °С. Сухой остаток дважды обрабатывают 10 мл порциями смеси ацетонитрил-вода (3:7, по объему) и полученный раствор переносят в делительную воронку емкостью 100 мл. Добавляют 30 мл смеси гексан-диэтиловый эфир (4:1, по объему) и встряхивают в течение 1 минуты. Собирают верхний слой (фаза гексан-эфир), содержащий флудиоксонил, и ацетонитрильный слой повторно обрабатывают 20 мл смеси гексан-диэтиловый эфир. Объединенный гексан-эфирный экстракт сушат над безводным сульфатом натрия и упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30 °С. Дальнейшую очистку экстракта проводят по п.2.6.5.3.
     
     2.6.5.3. Очистка на колонке с оксидом алюминия. Остаток в колбе, полученный при упаривании очищенных по п.2.6.5.2 экстрактов зеленой массы, семян и масла, количественно переносят тремя 1-мл порциями элюента N 3 в подготовленную для анализа подсолнечника хроматографическую колонку А. Флудиоксонил элюируют 50 мл смеси гексан-этилацетат (90:10, по объему), отбрасывая первые 15 мл элюента и собирая последующие 35 мл в грушевидную колбу емкостью 50 мл. Полученный раствор упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 40 °С. Сухой остаток растворяют в 2 мл подвижной фазы N 1 для ВЭЖХ и анализируют на содержание флудиоксонила по п.2.7.4.
     

2.7. Условия хроматографирования

     
2.7.1. Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором Perkin-Elmer (США)

     
     Колонка стальная длиной 25 см, внутренним диаметром 4,6 мм, содержащая Hipersil ODS, зернением 5 мкм
     

     Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 0,25 мкг/мл, разбавляют подвижной фазой N 1 для ВЭЖХ.
     

2.7.2. Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором Милихром (Россия)

     
     Колонка стальная, длиной 64 мм, внутренним диаметром 2 мм, содержащая Силасорб 600, зернением 5 мкм
     

     Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 10 мкг/мл, разбавляют подвижной фазой N 2 для ВЭЖХ.
     

2.7.3. Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором Милихром (Россия)

     
     Колонка стальная, длиной 80 мм, внутренним диаметром 2 мм, содержащая Сепарон CGN-CN, зернением 5 мкм
     

     Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 10 мкг/мл, разбавляют дихлорметаном.
     

2.7.4. Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором фирмы Altex (США)

     
     Колонка стальная длиной 15 см, внутренним диаметром 4 мм, содержащая Кромасил 100А-С18, зернением 5 мкм
     

     Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 0,5 мкг/мл, разбавляют подвижной фазой N 1 для ВЭЖХ.
     

2.8. Обработка результатов анализа

     
     Содержание флудиоксонила рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:
     

, где

     
      - содержание флудиоксонила в пробе, мг/кг; мг/л;
     
      - концентрация флудиоксонила в хроматографируемом растворе, найденная по градуировочному графику, мкг/мл;
     
      - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл;
     
      - масса (или объем) анализируемого образца, г (мл).
     
     

3. Требования техники безопасности

     
     При выполнении измерений концентраций флудиоксонила следует соблюдать все необходимые требования безопасности при работе в химических лабораториях в соответствии с "Правилами устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемиологического режима и личной гигиены при работе в лечебных и санитарно-эпидемиологических учреждениях системы МЗ СССР" (N 2455-81 от 20.10.81), а также требования, изложенные в документации на прибор.
     
     

4. Разработчики

     
     Ракитский В.Н., член-кор. РАМН, проф.; Юдина Т.В., д.б.н.; Федорова Н.Е., д.б.н.; Ларькина М.В., к.б.н. (зерно и солома хлебных злаков, зерно и зеленая масса кукурузы).
     
     Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф.Эрисмана (ФНЦГ им. Ф.Ф.Эрисмана).
     
     141000, г.Мытищи Московской обл., ул.Семашко, д.2, лаборатория аналитических методов контроля.
     
     Телефон: (095) 586-1276.
     
     Новицкий В.Ф., Марусич Н.И., Капуцкая В.К., Гинько Г.В. (вода, почва, картофель).
     
     Белорусский научно-исследовательский санитарно-гигиенический институт. 220012, г.Минск, ул. Ф.Скорины, 8/47, тел. 394-375.
     
     Талалакина Т.Н., Макеев А.М., к.б.н. (зеленая масса, семена и масло подсолнечника)
     
     Всероссийский научно-исследовательский институт фитопатологии. 143050, Московская обл., п/о Большие Вяземы, тел. 592-92-20.
     
     

Таблица 2

     
Полнота определения Флудиоксонила в воде, почве, картофеле, зерне и соломе пшеницы, зерне
 и зеленой массе кукурузы (6 повторностей для каждой концентрации)

     
     
     
Текст документа сверен по:
официальное издание
Определение остаточных количеств пестицидов
в пищевых продуктах, сельскохозяйственном сырье
и объектах окружающей среды: Сборник методических
указаний. Выпуск 1. - М.: Федеральный центр
госсанэпиднадзора Минздрава России, 2004