МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОМУ ИЗМЕРЕНИЮ СОДЕРЖАНИЯ
МЕТИЛТЕСТОСТЕРОНА И МЕТАНДРОСТЕНОЛОНА НА КОЖЕ

     
     
     УТВЕРЖДЕНЫ заместителем Главного государственного санитарного врача СССР В.И.Чибураевым 28 сентября 1989 г. N 5122-89
          
     

         
     17-Метиландростен-4-ол-17-он-3 (метилтестостерон)
          

     
     17-Метиландростадиен-1,4-ол-17-он-3 (метандростенолон)
     
     

Таблица 12

1. Характеристика методики

     
     Определение основано на хроматографическом выделении анализируемых веществ в тонком слое сорбента с последующим проявлением хроматограмм раствором фосфорномолибденовой кислоты и денситометрировании окрашенных зон.
     
     В качестве смывающей жидкости используется этиловый спирт.
     
     Диапазон измеряемого содержания в смыве МТ 0,00014 мг/см - 0,0014 мг/см; MAC от 0,006 до 0,06 мг/см.
     
     Определение избирательно на стадиях сушки, просеивания и фасовки.
     
     Граница суммарной погрешности измерения не превышает ±25%.
     
     ПДУ концентраций МТ на коже 0,0003 мг/см; MAC - 0,002 мг/см.
     
     

2. Реактивы и растворы

     
     МТ - фармакопейный.
     
     MAC - фармакопейный.
     
     Этиловый спирт, ГОСТ 5963-67*.
_______________
     * Действует ГОСТ Р 51723-2001. - Примечание изготовителя базы данных.
          
     Углерод четыреххлористый, ГОСТ 20228-74, х.ч.

     
     Ацетон, ГОСТ 2603-79, х.ч.
     
     Фосфорномолибденовая кислота, ТУ 6-09-3540-78, ч.д.а., 10%-ный раствор.
     
     Кислота серная, ГОСТ 4204-77, х.ч.
     
     Система растворителей: смесь четыреххлористого углерода с ацетоном в соотношении 4:1 (по объему).
     
     Проявляющий реактив: готовят перед употреблением, смешивая 10 мл 10%-ного раствора фосфорномолибденовой кислоты с 0,1 мл концентрированной серной кислоты.
     
     Основные стандартные растворы МТ и MAC с концентрацией 1 мг/мл готовят растворением 0,1 г каждого вещества в этиловом спирте в мерной колбе вместимостью 100 мл. Растворы устойчивы в течение месяца.
     
     Стандартные растворы с концентрациями МТ 10-20-40-60-80-100 мкг/мл, MAC - 50-100-200-300-400-500 мкг/мл готовят путем соответствующего разбавления 95% этанолом исходных стандартных растворов. Растворы устойчивы в течение 7 дней.
     
     Марлевые тампоны.
     
     

3. Приборы, аппаратура, посуда

     
     Камера для хроматографирования, ГОСТ 10565-75, размером 95х165 мм.
     
     Пульверизатор стеклянный.
     
     Хроматографические пластинки "Силуфол" UV-254, размером 75х150 мм.
     
     Микропипетки, ГОСТ 1770-74, вместимостью 0,1 мл.
     
     Пипетки, ГОСТ 1770-74, вместимостью 1, 2, 5 и 10 мл с делениями.
     
     Стаканы лабораторные стеклянные, ГОСТ 10394-74, вместимостью 25 мл.
     
     Колбы мерные, ГОСТ 1770-74, вместимостью 25 и 100 мл.
     
     Пробирки градуированные с пришлифованными пробками, ГОСТ 10515-75, вместимостью 15 мл.
     
     Колбы грушевидные, ГОСТ 10394-72, вместимостью 25 мл.
     
     Вакуумная установка.
     
     Сушильный шкаф.
     
     Пинцет медицинский.
     
     Денситометр "БИАН-170".
     
     

4. Проведение измерения  

Условия проведения смыва

     
     Трафарет размером 36 см накладывают на исследуемый участок кожного покрова работающего. Двумя марлевыми тампонами, смоченными в спирте, проводят смыв, затем сухим тампоном промокают смываемый участок кожи. Все тампоны складывают в пробирку или стакан. Одновременно проводят контрольный смыв с кожи у работающих, не контактирующих с МТ и MAC.
     

Условия анализа

     
     Тампоны тщательно промывают двумя порциями спирта по 5 мл каждая, сливают полученный раствор в грушевидную колбу и упаривают под вакуумом при температуре 60-70 °С. Сухой остаток растворяют в 0,5 мл спирта и используют для анализа.
     
     При хроматографировании смыва с чистой кожи на пластинке "Силуфол" образуется слабо окрашенная полоса. С целью исключения влияния "фона" на результаты анализа для приготовления шкалы стандартов используют спирт, полученный после смыва с чистой кожи.
     
     Для очистки сорбента пластинку помещают в камеру для хроматографирования с системой растворителей четыреххлористый углерод-ацетон (4:1) и закрывают крышкой. Край пластинки погружают в растворитель подвижной фазы не более чем на 0,5 см. После того как подвижная фаза дойдет до конца пластинки, последнюю вынимают из камеры и сушат на воздухе 3-5 мин. На подготовленную таким образом пластинку, на линию старта (от края 1 см), наносят при помощи микропипетки по 0,05 мл растворов пробы и шкалы стандартов (размер пятен не должен превышать 0,5 см). Пластинку высушивают на воздухе в течение 3 мин и помещают в ту же камеру с системой растворителей. После поднятия подвижной фазы на высоту 10 см от стартовой линии пластинку из камеры вынимают и оставляют на воздухе под вытяжным шкафом до полного испарения растворителей (3-5 мин). Затем пластинку опрыскивают проявляющим реактивом и помещают в сушильный шкаф на 2 мин при температуре 100 °С. Анализируемые вещества проявляются на хроматограмме в виде синих пятен на желтом фоне с MT=0,38±0,02; MAC=0,28±0,02.
     
     Количественное измерение содержания МТ и MAC в анализируемом объеме проводят по отношению интегральных значений содержаний вещества в пробах и "свидетелях" с помощью денситометра "БИАН-170".
     
     Содержание МТ и MAC в мг/см вычисляют по формуле:
     

,

     
где  - количество вещества во всей пробе, мг;

     
      - площадь исследуемой части тела, см.