МУК 4.1.1403-03  

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

     
     
Определение остаточных количеств хлоримурон-этила в воде, почве, семенах
и масле сои  методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

     
     
Дата введения 2003-06-30

     
     
     УТВЕРЖДЕНЫ Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации Г.Г. Онищенко 24 июня 2003 г.
     
     

1. Вводная часть

     
     Фирма-производитель: Лазорик Агро.
     
     Торговое наименование: Классик.
     
     Действующее вещество: хлоримурон-этил.

     Структурная формула:
     
     1-(4-хлор-6-метоксипиримидин-2-илуреидосульфонил)бензойной кислоты этиловый эфир (IUPAC).
     
     Этил 2-[[[[(4-хлоро-6-метокси-2-пиридиминил)амино]карбонил]амино]сульфонил]бензоат (С.А.).
     
     Эмпирическая формула: CHClNOS.
     
     Молекулярная масса: 414,83.
     
     Бесцветное кристаллическое вещество.
     
     Температура плавления: 181 °С.
     
     Давление паров при 25 °С: 4,9 10 мПа.
     
     Коэффициент распределения н-октанол/вода: 0,11 (рН 7).
     
     Низкая растворимость в органических растворителях; растворимость в воде (мг/л, 25 °С): 9 (рН 5), 450 (рН 6), 1200 (рН 7).
     
     Вещество относительно стабильно в кислых средах (25 °С, рН 5,  17-25 дней), быстро разлагается в щелочных растворах (при рН более 9).
     
     Область применения препарата. Классик - гербицид для уничтожения многих видов однолетних двудольных сорных растений на сое норма расхода 12-24 г/га для вегетирующих растений и 24-52,5 г/га при внесении в почву до посева или до появления всходов. Нельзя использовать препарат в почвах с РН 7 и выше (см. физические свойства). Чувствительные культуры в севообороте - кукуруза, сорго, хлопчатник, рис. Применяется также вместе с метрибузином (препараты канопи, превю) и минуром (препараты джемени, лорокс-плюс).
     
     

2. Методика определения хлоримурон-этила в воде, почве,
семенах и масле сои методом ВЭЖХ

2.1. Основные положения

     
2.1.1. Принцип метода

     
     Методика основана на определении хлоримурон-этила методом ВЭЖХ с использованием УФ детектора после его извлечения из образцов водно-ацетоновой смесью и очистке путем перераспределения между двумя жидкими фазами, а также на колонке с силикагелем.
     

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

     
     Метрологическая характеристика метода представлена в табл.1 и 2.
     
     

Таблица 1

     
Метрологическая характеристика метода

     
     
Таблица 2

     
Полнота определения хлоримурон-этила в воде, почве, семенах и масле сои
(6 для каждой концентрации)

     
     
2.1.3. Избирательность метода

     
     Присутствие других пестицидов, близких по химическому строению и области применения, определению не мешает.
     
     

2.2. Реактивы и материалы

2.3. Приборы и посуда

2.4. Отбор проб

     
     Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79). Пробы растительных материалов хранятся до анализа в морозильной камере при температуре -18 °С, перед проведением анализа их измельчают на лабораторной мельнице.
     

2.5. Подготовка к определению

     
2.5.1. Подготовка и очистка реактивов и растворителей

     
     Органические растворители перед началом работы очищают, сушат и перегоняют в соответствии с типовыми методиками. Гексан и хлористый метилен встряхивают с небольшими порциями концентрированной серной кислоты до прекращения окрашивания свежей порции кислоты, затем промывают водой, 2%-ным раствором гидроксида натрия и снова водой, после чего его сушат над гидроксидом натрия и перегоняют.
     
     Ацетон перегоняют над перманганатом калия и поташем (на 1 л ацетона 10 г KMnO и 2 г KCO).
     
     Ацетонитрил сушат над пентоксидом фосфора и перегоняют; отогнанный растворитель повторно перегоняют над углекислым калием.
     

2.5.2. Кондиционирование колонки

     
     Перед началом анализа колонку Symmetry-C18 кондиционируют в потоке подвижной фазы (1 мл/мин) до стабилизации нулевой линии в течение 1-2 ч.
     

2.5.3. Приготовление растворов

     
     Для приготовления 0,005М раствора ортофосфорной кислоты 0,5 г 98% (или 0,56 г 87%) кристаллической HPO помещают в мерную колбу объемом 1 л, растворяют в 600 мл дистиллированной воды и доводят объем до метки дистиллированной водой. Для приготовления 0,5М раствора KНРО 114 г кристаллического KНРOх3НО помещают в мерную колбу на 1 л, растворяют при перемешивании в 600 мл дистиллированной воды и доводят объем раствора до метки, 0,25М раствор KНРО готовят разбавлением в 2 раза 0,5М раствора. Для получения 90%-го водного ацетона в колбе емкостью 1 л смешивают 900 мл ацетона с 100 мл дистиллированной воды, используя мерные цилиндры. Для приготовления подвижной фазы смешивают 550 мл ацетонитрила с 450 мл 0,005М ортофосфорной кислоты в колбе на 1000 мл, смесь фильтруют, при необходимости дегазируют. Для приготовления элюента N 1 в колбе на 1000 мл смешивают 850 мл н-гексана и 150 мл ацетона. Для приготовления элюента N 2 в колбе на 1000 мл смешивают 700 мл н-гексана и 300 мл ацетона.
     

2.5.4. Приготовление стандартного и градуировочных растворов

     
     Берут точную навеску хлоримурон-этила (50 мг), переносят в мерную колбу на 50 мл, растворяют навеску в ацетонитриле и доводят до метки (стандартный раствор с концентрацией 1,0 мг/мл). Градуировочные растворы с концентрациями 0,1; 0,2; 0,5; 1,0 и 2,0 мкг/мл готовят методом последовательного разбавления, используя раствор подвижной фазы (смесь ацетонитрил-0,005М ортофосфорная кислота [55:45, по объему]). Стандартный раствор можно хранить в холодильнике при температуре 0-4 °С в течение 1 месяца, градуировочные растворы - в течение суток.
     

2.5.5. Построение градуировочного графика

     
     Для построения градуировочного графика (площадь пика - концентрация хлоримурон-этила в растворе) в хроматограф вводят по 20 мкл градуировочных растворов (не менее 3 параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4 точек по диапазону измеряемых концентраций), измеряют площади пиков и строят график зависимости среднего значения площади пика от концентрации хлоримурон-этила в градуировочном растворе (мкг/мл).
     

2.5.6. Подготовка колонки с силикагелем для очистки экстракта

     
     В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 1 см помещают тампон из стекловаты, закрывают кран и вносят суспензию 5 г силикагеля в 20 мл смеси гексан-ацетон (85:15, по объему). Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента. Колонку последовательно промывают 50 мл смеси гексан-ацетон (70:30, по объему) и 30 мл смеси гексан-ацетон (85:15, по объему) со скоростью 1-2 капли в секунду, после чего она готова к работе.
     

2.5.7. Проверка хроматографического поведения хлоримурон-этила на колонке с силикагелем

     
     В круглодонную колбу емкостью 10 мл отбирают 0,1 мл стандартного раствора хлоримурон-этила с концентрацией 10 мкг/мл. Отдувают растворитель током теплого воздуха, остаток растворяют в 5 мл элюента N 1 и наносят на колонку. Колбу обмывают еще 5 мл элюента N 1 и также наносят на колонку. Промывают колонку 25 мл элюента N 1, затем 50 мл элюента N 2 со скоростью 1-2 капли в секунду. Отбирают фракции по 10 мл каждая, упаривают, остаток растворяют в 2 мл подвижной фазы для ВЭЖХ (п.2.5.3) и анализируют на содержание хлоримурон-этила по п.2.6.6.
     
     Фракции, содержащие хлоримурон-этил, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 2 мл подвижной фазы для ВЭЖХ и вновь анализируют по п.2.6.6. Рассчитывают содержание хлоримурон-этила в элюате, определяя полноту вымывания вещества из колонки и необходимый для этого объем элюента.
     
     Примечание: параметры удерживания хлоримурон-этила и сопутствующих экстрактивных веществ могут меняться при использовании новой партии сорбента и растворителей.
     
     

2.5.8. Подготовка приборов и средств измерения

     
     Установка и подготовка всех приборов и средств измерения проводится в соответствии с требованиями стандартов и технической документации.
     
     

2.6. Проведение определения

     
2.6.1. Определение хлоримурон-этила в воде

     
     Образец предварительно отфильтрованной воды объемом 100 мл подкисляют 2М НРО до рН 3 (контроль осуществляют рН-метром) и экстрагируют хлористым метиленом трижды по 20 мл. Объединенный экстракт фильтруют через слой безводного сульфата натрия (3 г), осушитель промывают 10-15 мл хлористого метилена. Полученный раствор упаривают на роторном испарителе при температуре не выше 40 °С. При необходимости проводят дополнительную очистку экстракта на колонке с силикагелем по пункту 2.6.5.
     
     Сухой остаток растворяют в 2 мл подвижной фазы для ВЭЖХ и 20 мкл раствора вводят в жидкостный хроматограф.
     

2.6.2. Экстракция хлоримурон-этила из проб масла сои

     
     Навеску масла, массой 20 г растворяют в 25 мл ацетона, раствор помещают в делительную воронку объемом 100 мл и добавляют 25 мл воды. Смесь встряхивают в течение 2 мин, нижний водно-ацетоновый слой отделяют. Экстракцию повторяют с 50 мл смеси ацетон-вода (в соотношении 1:1). Объединенный экстракт помещают в морозильную камеру с температурой -18 °С на 1 час, после чего фильтруют через бумажный фильтр (красная лента) и упаривают на вакуумном ротационном испарителе при температуре бани не выше 40 °С до полного удаления ацетона (объем ~50 мл). Водный остаток переносят в делительную воронку объемом 500 мл, добавляют 50 мл 0,5М раствора KНРО. Далее очистку экстрактов проводят по п.2.6.4.
     

2.6.3. Экстракция хлоримурон-этила из проб почвы и семян сои

     
     Образец воздушно-сухой почвы или навеску измельченных на лабораторной мельнице семян сои, массой 20 г помещают в коническую колбу емкостью 250 мл с притертой пробкой, добавляют 40 мл 90%-го водного ацетона и экстрагируют в течение 15 мин на ультразвуковой бане. Суспензию фильтруют на стеклянной воронке через бумажный фильтр "красная лента". Экстракцию повторяют дважды с 30 мл 90%-ного водного ацетона. Объединенные экстракты упаривают до водного остатка (~10 мл) на роторном испарителе при температуре не выше 40 °С. Водный остаток переносят в делительную воронку объемом 500 мл, добавляют 90 мл 0,25М раствора KНРО. Далее очистку экстрактов проводят по п.2.6.4.
     

2.6.4. Очистка экстрактов

     
     Приготовленные по п.п.2.6.2 и 2.6.3 экстракты промывают дважды 20 мл гексана (верхний органический слой отбрасывают) и 25 мл хлористого метилена (нижний органический слой отбрасывают), встряхивая делительную воронку каждый раз по 2-3 мин. Водный раствор подкисляют 2М НРО (~30 мл) до рН 3 (контроль осуществляют рН-метром) и экстрагируют хлористым метиленом трижды по 25 мл. Объединенный экстракт фильтруют через слой безводного сульфата натрия (3 г), осушитель промывают 10-15 мл хлористого метилена. Полученный раствор упаривают на вакуумном ротационном испарителе при температуре не выше 40 °С. Дальнейшую очистку экстракта проводят по пункту 2.6.5*.
________________
     * В случаях, когда очистка экстрактов контрольных проб (п.2.6.3) дает удовлетворительные результаты дополнительную очистку на колонке с силикагелем можно исключить.
     

2.6.5. Очистка на колонке с силикагелем

     
     Сухой остаток в колбе, полученный при упаривании очищенных по п.п.2.6.2 и 2.6.3 экстрактов почвы и растительного материала количественно переносят двумя 3-мл порциями смеси гексан-ацетон (85:15, по объему) в кондиционированную хроматографическую колонку (п.2.5.6). Промывают колонку 25 мл элюента N 1, которые отбрасывают. Хлоримурон-этил элюируют 50 мл элюента N 2, собирая элюат в грушевидную колбу емкостью 100 мл. Раствор упаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при температуре не выше 40 °С. Сухой остаток растворяют в 2 мл подвижной фазы для ВЭЖХ и 20 мкл раствора вводят в жидкостный хроматограф.
     

2.6.6. Условия хроматографирования

     
     Жидкостный хроматограф "Альянс" фирмы "Waters" с УФ-детектором (Waters 2487), снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки или другой с аналогичными характеристиками.
     
     Колонка Symmetry - С18 (250х4,6) мм, зернение 5 мкм (Waters, USA) или аналогичная.
     
     Температура колонки 30 °С.
     
     Предколонка Waters Symmetry С-18 для защиты аналитической колонки.
     
     Подвижная фаза: ацетонитрил-0,005М ортофосфорная кислота в соотношении 55:45 (по объему).
     
     Скорость потока элюента: 1 мл/мин.
     
     Рабочая длина волны 236 нм.
     
     Объем вводимой пробы 20 мкл.
     
     Время удерживания хлоримурон-этила 9,2±0,1 мин.
     
     Линейный диапазон детектирования 0,1-2,0 мкг/мл.
     

2.6.7. Обработка результатов анализа

     
     Количественное определение проводят методом абсолютной градуировки, содержание хлоримурон-этила в образце воды, почвы или растительных материалов (, мг/кг) вычисляют по формуле:
     

,

где  - площадь пика хлоримурон-этила в стандартном растворе, ед.адсс;
     
      - площадь пика хлоримурон-этила в анализируемой пробе, ед.адсс;
     
      - объем пробы, подготовленной для хроматографического анализа, мл;
     
      - навеска анализируемого образца, г, (для воды - объем, мл);
     
      - концентрация стандартного раствора хлоримурон-этила, мкг/мл.
     
     Содержание остаточных количеств хлоримурон-этила в анализируемом образце вычисляют как среднее из 3 параллельных определений.
     
     Образцы, дающие пики большие чем пик стандартного раствора хлоримурон-этила с концентрацией 2 мкг/мл, разбавляют.
     
     

3. Требования техники безопасности

     
     При проведении работы необходимо соблюдать требования инструкции "Основные правила безопасной работы в химической лаборатории", общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, а также инструкции по эксплуатации жидкостного хроматографа и электрооборудования до 400 В.
     
     

4. Контроль погрешности измерений

     
     Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости результатов измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95 "ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа".
     
     

5. Разработчики

     
     Юзихин О.С., Черменская Т.Д., Цибульская И.А., Долженко В.И.
     
     Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений.
     
     
     
Текст документа сверен по:
официальное издание
Определение остаточных количеств пестицидов
в пищевых продуктах, сельскохозяйственном сырье
и объектах окружающей среды: Сб. методических указаний.
Выпуск 3. Часть 4. МУК 4.1.1399-4.1.1403-03. -
М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии
Роспотребнадзора, 2006