МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
по измерению концентраций поли- и моносахаридов
(глюкозамингидрохлорида, хитозана, хитина) в воздухе рабочей зоны

     
     
     УТВЕРЖДЕНЫ заместителем Главного государственного санитарного врача СССР М.И.Наркевичем 10 октября 1991 г. N 5998-91
     
     

          
     Определяемые компоненты - твердые вещества, при температуре выше 100 °С теряющие воду и осмоляющиеся. Полиаминосахариды нерастворимы в воде и органических растворителях. Хитозан растворим в кислой среде, глюкозамингидрохлорид хорошо растворим в кислой среде и воде. Хитин разлагается ферментом хитиназой и дезацетилируется в концентрированных щелочных растворах. Являются аллергенами.
     
     ПДК в воздухе рабочей зоны - 0,005 мг/м.
     
     

Характеристика метода

     
     Метод основан на измерении флюоресценции флюоресцирующих аминосахаров с 1-диметиламино-5-нафталинсульфохлоридом, разделяемых тонкослойной хроматографией.
     
     Отбор проб воздуха проводят с концентрированием на фильтр.
     
     Нижний предел измерения концентрации аминосахаров в анализируемом растворе - 0,02 мкг.
     
     Нижний предел измерения содержания аминосахаров в воздухе - 0,0025 мг/м (при отборе 424 л воздуха).
     
     Диапазон измеряемых концентраций аминосахаров в воздухе - 0,0025-0,025 мг/м.
     
     Измерению не мешают органические растворители.
     
     Суммарная погрешность измерения не превышает 25%.
     
     Время выполнения измерения, включая отбор пробы, 4 часа.
     
     

Приборы, аппаратура, посуда

     
     Источник УФ-света ("Ультрахемископ", "Хроматоскоп" и др.).
     
     Фильтродержатели.
     
     Фильтр АФА-ВП.
     
     Микрошприц МШ-10, ГОСТ 8043-74.
     
     Колбы мерные, ГОСТ 1770-74, вместимостью 50 мл.
     
     Пипетки, ГОСТ 20292-74, вместимостью 0,01, 0,02, 0,04, 1,0, 2,0 мл.
     
     Камера для тонкослойной хроматографии.
     
     Пульверизатор стеклянный для орошения хроматограмм.
     
     Пластинки для тонкослойной хроматографии с силикагелем типа Лабсиль А производства Медимпекс, толщина слоя 0,15-0,20 мм, размер 10х10 см.
     
     

Реактивы, растворы, материалы

     
     Ацетон, ГОСТ 2603-75, ч.д.а.
     
     Кислота уксусная, ГОСТ 61-75, х.ч., 3%-ный раствор.
     
     Кислота трифторуксусная, ТУ 6-09-3877-80, ч.
     
     Этиловый эфир уксусной кислоты, ГОСТ 22300-76, х.ч.
     
     Спирт этиловый, ГОСТ 5962-67*.
_______________
     * На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 51652-2000. - Примечание .
           
     N,N-диметил-2-нафтиламин-5-сульфохлорид, ТУ 6-09-07-784-76, ч.д.а., в дальнейшем обозначается ДАНС-хлорид, 0,2%-ный раствор в ацетоне, хранят в темной склянке в холодильнике.
     
     Глицерин, ГОСТ 6259-75, ч.д.а., 5%-ный раствор в этиловом спирте.
     
     Хитозан, ТУ 6-09-05-397-75, ч.
     
     Глюкозамингидрохлорид, ТУ 6-09-95-936-78, ч.
     
     Стандартный раствор хитозана N 1 с концентрацией 1 мг/мл готовят в 3%-ном растворе уксусной кислоты растворением 50 мг вещества в мерной колбе вместимостью 50 мл. Соответствующим разведением готовят стандартный раствор N 2 с содержанием хитозана 0,1 мг/мл, из которого затем готовят рабочие стандартные растворы с содержанием хитозана 1, 2, 4, 10 мкг/мл. Растворы хранят в холодильнике.
     
     Стандартный раствор глюкозамина N 4 с содержанием глюкозамина 0,1 мг/мл готовят соответствующим разведением стандартного раствора N 3, из которого затем готовят стандартные растворы с содержанием глюкозамина 1, 2, 4, 10 мкг/мл. Растворы хранят в холодильнике.
     
     

Проведение измерения

     
     Аэрозольный фильтр с отобранной пробой извлекают из патрона, помещают в стеклянный бюкс вместимостью 25-30 мл, заливают 10 мл 3%-ного раствора уксусной кислоты (определение хитозана) или 10 мл воды (определение глюкозамина), оставляют на 30 минут для растворения, отжимают и удаляют фильтр, экстракты переносят в пробирку, упаривают в токе воздуха водные растворы при нагревании, а уксуснокислые - при комнатной температуре до сухого остатка, затем добавляют 1 мл трифторуксусной кислоты, закрывают и нагревают в течение часа на водяной бане при 65 °С. После охлаждения в растворы приливают 20 мкл ДАНС-хлорида и 40 мкл раствора гидрокарбоната натрия. Смесь нагревают при 45 °С в течение 30 минут, при этом происходит ее обесцвечивание.
     
     На хроматографическую пластинку на линию старта на расстоянии 15 мм друг от друга наносят 20 мкл исследуемой пробы и по 20 мкл стандартных растворов с содержанием 1, 2, 4, 10 мкг/мл, что соответствует соответственно 0,02; 0,04; 0,08; 0,2 мкг каждого вещества.
     
     Пластинку подсушивают на воздухе и опрыскивают раствором глицерина в спирте. При освещении УФ-лампой хитозан и хитин наблюдаются в виде желто-зеленых пятен на линии старта, глюкозамин - в виде желто-зеленых пятен с =0,64. Кроме пятен ДАНС-производных аминосахаридов и пятен, принадлежащих реактиву, могут наблюдаться пятна с =0,3-0,8 также желто-зеленого цвета, принадлежащие аминокислотам, образующимся при гидролизе белков, содержащихся в пробе.
     
     Количественное определение проводят путем сравнения площади одинаковых по интенсивности окраски пятен пробы и стандартного раствора.
     
     

Расчет концентрации

     
     Концентрации хитозана и глюкозамина "" в воздухе (в мг/м) вычисляют по формуле:
     

, где

     
      - содержание вещества в анализируемом объеме раствора пробы, мкг;
     
     ,  - площади пятен пробы и стандартного раствора соответственно, мм; мм.
     
      - объем воздуха (в л), отобранный для анализа и приведенный к стандартным условиям (см. Приложение 1).
     
     
     
Текст документа сверен по:
Методические указания по измерению концентрации
вредных веществ в воздухе рабочей зоны:
Сб. методических указаний. Вып.28. -
М.: Информационно-издательский центр
Госкомсанэпиднадзора Российской Федерации, 1993