МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОМУ ИЗМЕРЕНИЮ СОДЕРЖАНИЯ
ТЕСТОСТЕРОНА И ЭФИРОВ ТЕСТОСТЕРОНА-ПРОПИОНАТА,
ФЕНИЛПРОПИОНАТА, ИЗОКАПРОНАТА, КАПРИНАТА И ЭНАНТАТА НА КОЖЕ

     
     
     УТВЕРЖДЕНЫ заместителем Главного государственного санитарного врача СССР В.И.Чибураевым 28 сентября 1989 г. N 5132-89
     
     

Таблица 20

1. Характеристика методики

     
     Определение основано на хроматографировании анализируемых веществ в тонком слое сорбента с последующим проявлением зон локализации раствором фосфорномолибденовой кислоты и денситометрировании окрашенных зон.
     
     В качестве смывающей жидкости используется этиловый спирт.
     
     Определение избирательно на стадиях сушки, просеивания и фасовки.
     
     Диапазон измеряемого содержания Т 0,0001-0,01 мг/см, ТП, ТФП, ТИК, ТК и ТЭ - 0,0004-0,01 мг/см.
     
     Граница суммарной погрешности измерения не превышает ±25%.
     
     Рекомендуемый предельно допустимый уровень (ПДУ) загрязнения кожи: Т - 0,0003 мг/см; ТП, ТФП, ТИК, ТК и ТЭ - 0,001 мг/см.
     
     

2. Реактивы и растворы

     
     Т - перекристаллизованный из изопропилового спирта.
     
     ТП - ФС42-1119-77.
     
     ТФП - ВФС 42-0563-76.
     
     ТИК - ВФС 42-0562-76.
     
     ТК - ВФС 42-0561-76.
     
     ТЭ - ФС 42-1545-80.
     
     Спирт этиловый ректификат, ГОСТ 5963-67*.
_______________
     * Действует ГОСТ Р 51723-2001. - Примечание изготовителя базы данных.

     
     Ацетон, х.ч., ГОСТ 2603-79.
     
     Хлороформ, х.ч., ГОСТ 20015-74.
     
     Система растворителей: смесь хлороформа с ацетоном в соотношения 9:1 (по объему).
     
     Проявляющий раствор - 10% раствор фосфорно-молибденовой кислоты в ацетоне.
     
     Основные растворы Т, ТП, ТФП, ТИК, ТК и ТЭ, содержащие 2,5 мг/мл, готовят растворением 0,2500 г каждого вещества в этиловом спирте в мерной колбе вместимостью 100 мл.
     
     Стандартные растворы тестостеронов с содержанием 1 мг/мл готовят соответствующим разбавлением основного раствора этиловым спиртом.
     
     Марлевые тампоны.
     
     

3. Приборы и посуда

     
     Камера хроматографическая.
     
     Пластинки силуфол размером (7,5х15,0) см.
     
     Пульверизатор стеклянный.
     
     Пипетки вместимостью 1, 2, 5 и 10 мл с делениями, ГОСТ 20292-74*.
_______________
     * Действуют ГОСТ 29169-91, ГОСТ 29227-91-ГОСТ 29229-91, ГОСТ 29251-91-ГОСТ 29253-91. - Примечание изготовителя базы данных.

     
     Микропипетки вместимостью 0,1 мл с оттянутым на капилляр концом.
     
     Стаканы лабораторные стеклянные вместимостью 25 мл, ГОСТ 10394-72.
     
     Колбы мерные вместимостью 25, 50 и 100 мл, ГОСТ 1770-74.
     
     Пробирки с притертыми пробками вместимостью 10 мл.
     
     Остродонные колбы вместимостью 25 мл с нормальным шлифом.
     
     Вакуумная установка.
     
     Баня водяная.
     
     Сушильный шкаф.
     
     Пинцет медицинский.
     
     Денситометр.
     
     

4. Проведение измерения  

Условия проведения смыва

     Трафарет размером (5х5) см накладывают на исследуемый участок кожного покрова работающего. Двумя марлевыми тампонами, смоченными в спирте, проводят смыв, затем сухим тампоном промокают смываемый участок кожи.
     
     Все тампоны складывают в пробирку или стакан. Одновременно проводят контрольный смыв с кожи у работающих, не контактирующих с тестостеронами.
     

Условия анализа

     Тампоны тщательно промывают двумя порциями спирта по 5 мл каждая, сливают полученный раствор в остродонную колбу и упаривают под вакуумом при температуре 60-70 °С. Сухой остаток растворяют в 0,5 мл спирта и используют для анализа.
     
     При хроматографировании смыва с чистой кожи на пластинке силуфол образуется слабо окрашенная полоса. С целью исключения влияния "фона" на результаты анализа, для приготовления шкалы стандартов используют спирт, полученный после смыва с чистой кожи.
     
     Для очистки сорбента пластинку помещают в камеру для хроматографирования с системой растворителей хлороформ-ацетон (9:1) и закрывают крышкой. Для насыщения камеры парами подвижной фазы достаточно 10 минут. Край пластинки погружают в растворитель подвижной фазы не более чем на 0,5 см. После того как подвижная фаза дойдет до конца пластинки, последнюю вынимают из камеры и сушат на воздухе 3-5 минут. На подготовленную таким образом пластинку, на линию старта (от края 1 см), наносят при помощи микропипетки по 0,05 мл растворов пробы и шкалы стандартов (размер пятен не должен превышать 0,5 см). Пластинку высушивают на воздухе в течение 3 минут и помещают в ту же камеру с системой растворителей. После поднятия подвижной фазы на высоту 10 см от стартовой линии пластинку из камеры извлекают и оставляют на воздухе под вытяжным шкафом до полного испарения растворителей (3-5 минут). Затем пластинку опрыскивают проявляющим раствором и помещают в сушильный шкаф на 5 минут при температуре 80 °С. Анализируемые вещества проявляются в виде синих пятен на желтом фоне. Окраска пятен устойчива в течение суток.
     
     Количественное определение анализируемых веществ на хроматограмме оценивают денситометрически сравнением пятен проб и шкалы стандартов.  тестостерона составляет 0,2; ТП - 0,57; ТФП - 0,55; ТИК - 0,57; ТК - 0,57 и ТЭ - 0,63.
     
     Шкалу стандартов с содержанием Т 5-25-50-100-300-500 мкг/мл и ТП, ТФП, ТИК, ТК и ТЭ 25-50-100-300-500 мкг/мл готовят соответствующим разведением стандартного раствора N 1, это соответствует содержанию Т 0,25 мкг, 1,25 мкг, 2,5 мкг, 5 мкг, 25 мкг, ТП, ТФП, ТИК, ТК и ТЭ 1,25 мкг, 2,5 мкг, 5 мкг, 25 мкг.
     
     Содержание анализируемых веществ в мг/см кожи  вычисляют по формуле:
     

,

     
где  - количество вещества во всей пробе, мг;

     
      - площадь исследуемой части тела, см.