МУК 4.1.1415-03  

     
     
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

     
Определение кломазона в воде хроматографическими методами

     
     
Дата введения 2003-06-30

     
     УТВЕРЖДЕНЫ Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, Г.Г.Онищенко 24 июня 2003 г.
     
     

1. Вводная часть

     
     Фирма производитель: ФМС (США).
     
     Торговое название: КОММАНД.
     
     Действующее вещество: кломазон.
     
     2-(2-хлорбензил)-4,4-диметил-3-изоксалидин-3-он (ИЮПАК)
    
       

     
     Эмпирическая формула: CHClNO                                                  M. м.: 239,7
     
     Светло-коричневая вязкая жидкость.
     
     Температура плавления: 25 °С.
     
     Температура кипения: 275 °С.
     
     Давление паров при 25 °С: 19,2 мПа.
     
     Коэффициент распределения н-октанол/вода: =2,5.
     
     Хорошо растворим в ацетоне, гексане, этаноле, метаноле, хлороформе, дихлорметане и ацетонитриле; растворимость в воде - 1,10 г/дм.
     
     Стабилен при комнатной температуре не менее 2 лет, при 50 °С - не менее 3 месяцев.
     
     Краткая токсикологическая характеристика: Острая пероральная токсичность () для крыс - 1369-2077 мг/кг; острая дермальная токсичность () для крыс - более 2000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность () для крыс - 4,8 мг/дм (4 ч).
     
     Гигиенические нормативы. ПДК в воде - 0,02 мг/дм.
     
     Область применения препарата. Кломазон - гербицид избирательного действия, применяемый для борьбы со злаковыми и двудольными сорными растениями в посевах сои и риса при довсходовом или предпосевном внесении.
     
     

2. Методика определения кломазона в воде хроматографическими методами

     
2.1. Основные положения

     
2.1.1. Принцип методики

     
     Методика основана на извлечении кломазона из анализируемой пробы гексаном, концентрировании экстракта и последующем количественном определении альтернативными методами: высокоэффективной жидкостной хроматографией (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором, газожидкостной хроматографией (ГЖХ) с детектором постоянной скорости рекомбинации или тонкослойной хроматографией (ТСХ).
     
     Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.
     

2.1.2. Избирательность метода

     
     В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии глобальных загрязнителей окружающей среды: хлорпроизводные циклопарафинов (изомеры ГХЦГ), соединений дифенильного ряда (ДДТ и его производные), их метаболитов - полихлорированных бензолов и фенолов, а также в присутствии трихлорацетата натрия, который может применяться на посевах в качестве гербицида.
     

2.1.3. Метрологическая характеристика метода (=0,95)

     
     
2.2. Реактивы, растворы и материалы

     
2.3. Приборы, аппаратура, посуда

     
2.4. Отбор проб

     
     Отбор, хранение и подготовка проб проводятся в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными за N 2051-79 от 21.08.79.
     
     Отобранные пробы можно хранить в холодильнике не более 5 дней. Перед анализом воду (при наличии взвеси) фильтруют через неплотный бумажный фильтр.
     

2.5. Подготовка к определению

     
2.5.1. Метод ВЭЖХ

     
2.5.1.1. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ

     
     В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают с помощью пипетки 5 мл изопопанола и 5 мл метанола, доливают до метки гексаном, перемешивают, фильтруют.
     

2.5.1.2. Кондиционирование колонки

     
     Промыть колонку для ВЭЖХ смесью гексан-метанол-изопропанол (90:5:5, по объему) в течение 30 мин при скорости подачи растворителя 100 мкл/мин.
     

2.5.2. Метод ГЖХ. Подготовка и кондиционирование колонки

     
     Готовую насадку (5% SE-30 на Хроматоне N-AW-DMCS) засыпают в стеклянную колонку, уплотняют под вакуумом, колонку устанавливают в термостате хроматографа, не подсоединяя к детектору, и стабилизируют в токе азота при температуре 250 °С в течение 10-12 ч.
     

2.5.3. Метод ТСХ

     
2.5.3.1. Приготовление проявляющих реагентов

     
2.5.3.1.1. Проявляющий реагентин N 1

     
     1 г нитрата серебра растворяют в 1 мл дистиллированной воды, добавляют 10 мл 2-феноксиметанола, 190 мл ацетона, 1-2 капли пероксида водорода, раствор перемешивают и переносят в склянку из темного стекла.
     

2.5.3.2.2. Проявляющий реагент N 2

     
     0,5 г нитрата серебра растворяют в 5 мл дистиллированной воды в мерной колбе на 100 мл, добавляют 10 мл 25%-ного водного аммиака, раствор доводят до 100 мл ацетоном, перемешивают и переносят в склянку из темного стекла.
     

2.5.3.2. Приготовление подвижной фазы для ТСХ

     
     В мерную колбу вместимостью 100 мл вносят 20 мл ацетона и добавляют до метки гексан, перемешивают. Смесь наливают в хроматографическую камеру слоем не более 6-8 мм за 30 мин до начала хроматографирования.
     

2.5.4. Приготовление стандартных растворов

     
     Основной стандартный раствор кломазона с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 0,010 г препарата, содержащего 99,8% д.в., в гексане в мерной колбе на 100 мл. Раствор хранится в холодильнике в течение месяца.
     
     Рабочие стандартные растворы с концентрацией 0,4; 1,0; 2,0; 4,0; 10,0; 20 и 40,0 мкг/мл готовят из основного стандартного раствора кломазона соответствующим последовательным разбавлением гексаном.
     
     Рабочие растворы хранят в холодильнике не более месяца.
     

2.5.5. Построение градуировочного графика

     
     2.5.5.1. Градуировочный график А (измерение по п.2.7.1, ВЭЖХ).
     
     Для построения градуировочного графика в инжектор хроматографа вводят по 5 мкл рабочего стандартного раствора кломазона с концентрацией 4,0; 10,0; 20,0 и 40 мкг/мл.
     
     2.5.5.2. Градуировочный график В (измерение по п.2.7.2, ГЖХ).
     
     Для построения градуировочного графика в испаритель хроматографа вводят по 5 мкл рабочего стандартного раствора кломазона с концентрацией 0,4; 1,0; 2,0; 4,0 и 10,0.
     
     Осуществляют не менее 5 параллельных измерений. Находят среднее значение высоты хроматографического пика для каждой концентрации. Строят градуировочный график (А или В) зависимости высоты хроматографического пика в мм от концентрации кломазона в растворе в мкг/мл.
     

2.6. Описание определения

     
     100 мл анализируемой пробы воды помещают в делительную воронку вместимостью 250 мл, приливают 10 мл 25%-ного водного раствора гидроксида натрия, перемешивают и добавляют 20 мл н-гексана. Воронку встряхивают в течение 3 мин, после разделения фаз гексановый слой сливают в грушевидную колбу вместимостью 100 мл, пропуская его через слой безводного сульфата натрия, помещенного в конической воронке на складчатом бумажном фильтре. Извлечение препарата из водной пробы повторяют еще дважды, используя по 20 мл н-гексана. Объединенный гексановый экстракт упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °С почти досуха, остаток отдувают потоком воздуха или азота особой чистоты. Сухой остаток растворяют в 0,1 (ВЭЖХ, ТСХ) или 0,25 мл (ГЖХ) н-гексана и анализируют одним из хроматографических методов.
     

2.7. Условия хроматографирования

     
2.7.1. ВЭЖХ

     
     Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором Милихром (Россия).
     
     Колонка стальная длиной 64 мм, внутренним диаметром 2 мм, заполненная Силасорбом 600, зернением 5 мкм.
     
     Температура колонки: комнатная.
     
     Подвижная фаза: гексан-изопропанол-метанол (90:5: 5, по объему).
     
     Скорость потока элюента: 100 мкл/мин.
     
     Рабочая длина волны: 240 нм.
     
     Чувствительность: 0,4 ед. абсорбции на шкалу.
     
     Объем вводимой пробы: 5 мкл.
     
     Время выхода кломазона: около 6 мин.
     
     Линейный диапазон детектирования: 20-200 нг.
     
     Образцы, дающие пики, большие, чем стандартный раствор с концентрацией 40 мкг/мл, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ.
     

2.7.2 ГЖХ

     
     Хроматограф газовый "Цвет-570" с детектором постоянной скорости рекомбинации ионов.
     
     Колонка стеклянная длиной 1 м, внутренним диаметром 3 мм, заполненная Хроматоном N-AW-DMCS с 5% SE-30 (0,16-0,20 мм).
     
     Рабочая шкала электрометра 64·10 Ом.
     
     Скорость движения ленты самописца 200 мм/ч.
     
     Температура термостата колонки - 190 °С
     
                                                детектора - 300 °С
     
                                                испарителя - 220 °С
     
     Скорость газа-носителя (азота) - 60 мл/мин.
     
     Объем вводимой пробы - 5 мкл.
     
     Время выхода кломазона - 2,5 мин.
     
     Линейный диапазон детектирования: 2-50 нг.
     
     Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 10 мкг/мл, разбавляют гексаном.
     
     Для повышения точности идентификации кломазона при совместном присутствии в пробе -ГХЦГ, имеющего близкое время удерживания, кломазон удаляется из пробы обработкой концентрированной серной кислотой. Повторный анализ пробы позволяет установить вклад кломазона в первичный хроматографический сигнал.
     

2.7.3. ТСХ

     
     Гексановый раствор в колбе, полученный по п.2.6 количественно (или его аликвотную часть) наносят на хроматографические пластинки "Силуфол", "Кизельгель 60F-254" или Пластинки для ВЭТСХ". Рядом наносят стандартные растворы в объеме, соответствующем содержанию кломазона 1, 2, 5 и 10 мкг. Пластинку помещают в камеру для хроматографирования, содержащую смесь н-гексан-ацетон (4:1, по объему). После развития хроматограммы пластинку вынимают из камеры, помещают ее под тягу до испарения растворителей, затем обрабатывают одним из проявляющих реагентов и помещают под ультрафиолетовую лампу на 5 мин. Зона локализации препарата на пластинках "Силуфол", "Пластинках для ВЭТСХ" и "Кизельгель 60F-254" проявляется в виде серо-бурых пятен с величиной Rf 0, 35, 0,85 и 0,43, соответственно.
     
     Для определения кломазона методом ТСХ можно использовать пластинки "Алюграм" и "Полиграм" (производства ФРГ). Величина Rf кломазона на этих пластинках составляет 0,37 и 0,38, соответственно.
     

2.8. Обработка результатов анализа

     
2.8.1. Метод ВЭЖХ и ГЖХ

     
     Содержание кломазона рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:
     

,

где  - содержание кломазона в пробе, мг/дм;

      - конечный объем пробы, подготовленной для хроматографирования, мл;
     
      - объем аликвоты пробы, введенной в хроматограф, мкл;
     
      - объем пробы воды, взятой для анализа, дм;
     
      - коэффициент градуировки прибора, рассчитанный из серии измерений стандартного раствора препарата.
     

2.8.2. Метод ТСХ

     
     Количественное определение проводят путем сравнения площади и интенсивности окраски пятен анализируемой пробы и серии стандартов.
     
     Содержание кломазона в анализируемой пробе воды , мг/дм,
     

     
      - содержание кломазона в пробе (мг), соответствующее интенсивности окраски пятна;
     
      - объем пробы воды, взятой для анализа (дм).
     
     

3. Требования техники безопасности

     
     Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами.
     
     

4. Контроль погрешности измерений

     
     Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95. ГСИ "Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа".
     
     

5. Разработчики

     
     Юдина Т.В., Федорова Н.Е. (ФНЦГ им. Ф.Ф.Эрисмана)
     
     Давидюк Е.И. (УкрНИИГИНТОКС, г.Киев); Кисенко М.А., Демченко В.Ф. (Институт медицины труда АН и АМН Украины, г.Киев).
     
     
     

Текст документа сверен по:
официальное издание
Определение остаточных количеств пестицидов в пищевых продуктах,
сельскохозяйственном сырье и объектах окружающей среды:
Сб. методических указаний. Выпуск 3. Часть 7. МУК 4.1.1412-4.1.1415-03. -
М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2005