МУК 4.2.1776-03

    
    
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

    
    
4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

    
Метод микробиологического измерения концентрации клеток
Aspergillus awamori ВНИИгенетика 120/177 - продуцента глюкоамилазы
в воздухе рабочей зоны

    
    
Дата введения 2003-12-01

    
    
    1. РАЗРАБОТАНЫ: Российским государственным медицинским университетом (к.б.н. Н.И.Шеиной).
    
    2. УТВЕРЖДЕНЫ Первым заместителем министра здравоохранения Российской Федерации - Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко 24 октября 2003 г.
    
    3. ВВЕДЕНЫ В ДЕЙСТВИЕ с 1 декабря 2003 г.
    
    4. ВВЕДЕНЫ ВПЕРВЫЕ.
    
    

1. Общие положения и область применения

    
    Настоящие методические указания устанавливают методику проведения микробиологического количественного анализа концентрации клеток штамма Aspergillus awamori ВНИИгенетика 120/177 - продуцента глюкоамилазы в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 100 до 5000 клеток в 1 м воздуха.
    
    Методические указания разработаны в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 "ССБТ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования" и ГОСТ Р 8.563-96 "Методики выполнения измерений".
    
    Методические указания предназначены для применения в лабораториях предприятий, организаций и учреждений, аккредитованных в установленном порядке на право проведения микробиологических исследований.
    
    Методические указания одобрены и рекомендованы секцией "Гигиенические аспекты биотехнологии и микробного загрязнения окружающей среды" Проблемной комиссии "Научные основы гигиены окружающей среды".
    
    

2. Биологическая характеристика Aspergillus awamori ВНИИгенетика 120/177
и его гигиенический норматив

    
    На 5 день развития на сусло-агаре штамм образует крупные ровные круглые колонии, средний диаметр которых составляет 0,5-1,0 см, а максимальный - 1,5-3,0 см. Край колоний ровный. Колонии гомогенные, гладкие, плоские.
    
    При температуре 38-42 °С штамм-продуцент появляется на сусло-агаре в виде маленьких белых колоний уже на 1-2 дни. На 3-й день в среду выделяется оранжево-желтый пигмент, процесс спорообразования идет интенсивнее. Образование конидиеносцев с конидиями придает колониям глубокий интенсивно-серый цвет. Колонии становятся опущенными и приподнимаются над средой.
    
    Систематическое положение микроорганизма
    

    
    Штамм Aspergillus awamori 120/177 получен во ВНИИгенетика как мутант из A.awamori С529Д 466 и депонирован в ЦМПМ института. Штамм является продуцентом глюкоамилазы.
    
    Штамм-продуцент растет на жидких и агаризованных средах. Оптимальная температура роста 27-30 °С, рН среды 5,0-6,0, культивирование 7 суток. Для размножения используется агаризованная среда Чапека, сусло-агар 5-6 °Б, картофельно-сахарозный агар.
    
    Предельно допустимая концентрация (ПДК) в воздухе рабочей зоны - 2000 кл./м, А.
    
    

3. Пределы измерений

    
    Методика обеспечивает выполнение измерений количества клеток плесневого гриба в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 100 до 5000 клеток в 1 м воздуха при доверительной вероятности 0,95.
    
    

4. Метод измерений

    
    Метод основан на аспирации из воздуха клеток плесневого гриба на поверхность среды сусло-агар и подсчета выросших колоний по типичным культурально-морфологическим признакам и яркому оранжево-желтому окрашиванию субстрата на 3 сутки.
    
    

5. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

    
    При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства и материалы.
    

5.1. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы

    
5.2. Реактивы, растворы

6. Требования безопасности

    
    При выполнении измерений концентрации клеток штамма-продуцента в воздухе рабочей зоны соблюдают следующие требования.
    
    6.1. Правила техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.005-88.
    
    6.2. Электробезопасность при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-79 и инструкции по эксплуатации прибора.
    
    6.3. Руководство "Положение об организации работы по технике безопасности в микробиологической промышленности" (1980), "Инструкции по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности" (1977).
    
    6.4. Все виды работ с реактивами проводят только в вытяжном шкафу при работающей вентиляции, работа с биологическим материалом осуществляется в боксе, оборудованном бактерицидными лампами.
    
    

7. Требования к квалификации операторов

    
    К выполнению измерений и обработке их результатов допускают лиц с высшим или средним специальным образованием, прошедших соответствующую подготовку и имеющих навыки работы в области микробиологических исследований.
    
    

8. Условия измерений

    
    Процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха (20±5 °С), атмосферном давлении 630-800 мм рт.ст. и влажности воздуха не более 80%.
    
    

9. Проведение измерения

    
9.1. Условия отбора проб воздуха

    
    Для определения концентрации клеток плесневого гриба воздух аспирируют при помощи аппарата Кротова со скоростью 10 л/мин на поверхность среды сусло-агар. Время аспирации воздуха (1-10 мин) зависит от предполагаемой концентрации клеток штамма-продуцента.
    
    Аппарат Кротова перед каждым отбором пробы воздуха тщательно протирают спиртом. Особенно тщательно обрабатывают поверхность подвижного диска и внутреннюю стенку прибора; наружную и внутреннюю стенку крышки. На подвижной диск устанавливают подготовленную чашку Петри со средой, одновременно снимая с нее крышку. Прибор закрывают. Соприкосновение крышки прибора со средой недопустимо. После отбора пробы воздуха и остановки диска, прибор открывают, быстро снимают чашку Петри и закрывают крышкой от данной чашки. На дне чашки Петри стеклографом отмечают точку контроля, время аспирации и дату отбора пробы.
    

9.2. Выполнение анализа

    
    Метод предполагает учет количества типичных колоний, выросших на 3 сутки после посева проб воздуха по культурально-морфологическим признакам и яркой оранжево-желтой пигментации среды. Прямой метод позволяет учитывать на чашке до 200 колоний продуцента.
    
    Агаризованную среду сусло-агар расплавляют, остужают до 50-60 °С, добавляют молочную кислоту из расчета 2 мл на 0,5 л среды (для подавления посторонней бактериальной микрофлоры), тщательно перемешивают и разливают по 10 мл в стеклянные чашки Петри на горизонтальной поверхности.
    
    Чашки с застывшей средой помещают в термостат на сутки при температуре 37 °С, после чего проросшие чашки бракуют, стерильные чашки используют для контроля воздуха.
    
    После отбора проб воздуха чашки Петри помещают в термостат при температуре 38-42 °С (повышенная температура, способствующая более быстрому росту колоний и плодоношений рода Aspergillus). Через 2-3 суток производят подсчет выросших типичных колоний продуцента. При необходимости культуру подвергают микроскопированию.
    
    

10. Вычисление результатов измерения

    
    Расчет концентрации клеток продуцента в пересчете на 1 м воздуха производят по формуле:
    

,   кл./м,

    
где - концентрация клеток продуцента в воздухе;
    
     - количество колоний продуцента, выросших на чашке;
    
    1000 - коэффициент пересчета на 1 м воздуха;
    
     - объем воздуха, л (произведение скорости на время аспирации).
    
    

11. Оформление результатов измерений

    
    Результаты измерений оформляют протоколом по форме.
    
    

Протокол N
количественного микробиологического анализа штамма-продуцента
Aspergillus awamori ВНИИгенетика 120/177 в воздухе рабочей зоны

Результаты микробиологического анализа

    
    
    Ответственный исполнитель
    
    Научный руководитель
    
    

Список литературы

    
    1. ГОСТ 12.1.005-88 "ССБТ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования".
    
    2. ГОСТ 8.563-96*. ГСИ "Методики выполнения измерений".
______________
    * Вероятно ошибка оригинала. Следует читать ГОСТ Р 8.563-96. ГСИ "Методики выполнения измерений". - Примечание .     
    
    3. Положение об организации работы по технике безопасности в микробиологической промышленности. - М., 1980. 27 с.
    
    4. Инструкции по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности. - М., 1977. 7 с.
    
    5. Влодавец В.В. К определению плесневых грибов рода Aspergillus в воздухе лечебных учреждений // Гиг. и сан., 1988, N 8, С.93-95.
    
    6. Бабьева И.П., Зенова Г.М. Биология почв. - М., МГУ. 122 с.



Текст документа сверен по:
официальное издание
Методические указания. -
М.: Федеральный центр госсанэпиднадзора
Минздрава России, 2004