МУК 4.1.1435-03
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Определение остаточных количеств Тифенсульфурон-метила в воде,
бобах и масле сои методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
Дата введения 2003-06-30
1. ПОДГОТОВЛЕНЫ: Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф.Эрисмана (чл.-корр. РАМН, проф. В.Н.Ракитский, проф. Т.В.Юдина); Московской сельскохозяйственной академией им. К.А.Тимирязева (проф. В.А.Калинин, к.хим.н. А.В.Довгилевич); при участии Департамента госсанэпиднадзора Минздрава России (А.П.Веселов). Разработчики методик указаны в конце каждой из них.
2. Методические указания рекомендованы к утверждению Комиссией по госсанэпиднормированию при Минздраве России.
3. УТВЕРЖДЕНЫ Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г.Онищенко 24 июня 2003 г.
4. Введены с 30 июня 2003 г.
5. ВВЕДЕНЫ ВПЕРВЫЕ.
1. Вводная часть
Фирма-производитель: Дюпон де Немур.
Торговое название: Хармони.
Название действующего вещества по ИСО: Тифенсульфурон-метил.
Название действующего вещества по ИЮПАК: Метиловый эфир 3-[[[[(4-метокси-6-метил-1,3,5-триазин-2-ил)амино]карбонил]амиино]сульфонил)-2-тиофенкарбоновой кислоты. |
Структурная формула:
Эмпирическая формула: CHNОS.
Молекулярная масса: 387,4.
Химически чистый Тифенсульфурон-метил представляет собой белый кристаллический порошок без запаха.
Температура плавления: 176 °С.
Давление паров 1,7х10 мПа (при 25 °С).
Коэффициент распределения октанол-вода =0,20 (рН 5), 0,02 (рН 7).
Растворимость в воде (мг/л, 25 °С): 230 (рН 5), 6270 (рН 7).
Растворимость в органических растворителях (г/л при 20 °С): гексан < 0,1, ксилол - 0,2, этанол - 0,9, метанол, этилацетат - 2,6, ацетонитрил - 7,3, ацетон - 11,9, хлористый метилен - 27,5.
Константа диссоциации рКа (при 25 °С) - 4,0.
Стабилен при температуре 55 °С. Гидролизуется при температуре 45 °С DT 4,7 ч (рН 3), 38 ч (рН 5), 250 ч (рН 7), 11 ч (рН 9).
Устойчивость в почве DT - 6-12 дней на солнечном свете (14 дней - в темноте)); DT - (30 °С, рН 8) - несколько часов. Подвергается микробиологической деградации и химическому гидролизу, в результате чего образуются неактивные метаболиты.
В растениях разлагается в течение нескольких дней, в устойчивых растениях полностью гидролизуется за 24 ч. В пшенице DT составляет 3-4 ч, в соевых бобах - 5-6 ч.
В организме теплокровных разлагается слабо, 70-75% выделяется в неизменном виде с мочой и фекалиями. Механизм первичной деградации включает гидролиз метоксикарбонильной группы, О-деметилирование гетероциклического кольца и гидролиз сульфонилмочевинной группы.
Краткая токсикологическая характеристика. Тифенсульфурон-метил относится к малоопасным соединениям по острой оральной (ЛД для крыс составляет более 5000 мг/кг) и дермальной (ЛД для кроликов более 2000 мг/кг) токсичности и умеренно опасным веществам по ингаляционной (ЛК для крыс (4 ч) более 7,9 мг/л) токсичности. Не вызывает покраснения кожи, слабо раздражает слизистую оболочку глаз. Не проявляет тератогенных и мутагенных свойств.
В России установлены следующие гигиенические нормативы для Тифенсульфурон-метила:
ДСД - 0,01 мг/кг массы тела человека;
ПДК в воде водоема - 0,01 мг/л;
ОДК в почве - 0,07 мг/кг;
МДУ (мг/кг): зерно хлебных злаков - 0,5;
семена и масло льна - 0,5;
семена и масло сои - 0,02;
зерно кукурузы - 0,02.
Область применения препарата. Тифенсульфурон-метил - гербицид системного действия, проникающий через корни и листья растений и ингибирующий биосинтез изолейцина и валина. Рекомендуется для применения на посевах яровых и озимых зерновых культур (пшеница, ячмень, рожь, овес, тритикале), сои и кукурузы. Хорошо подавляет развитие широколистных сорняков, используется для послевсходовой обработки с нормой расхода 9-60 г д.в./га. Обычно используется в комбинации с Метсульфурон-метилом.
В России зарегистрирован под торговым названием Хармони, СТС, 750 г/кг, для борьбы с однолетними двудольными сорняками, в том числе устойчивыми к 2,4-Д, МЦПА и триазинам видами, в посевах пшеницы, ячменя, кукурузы, льна-долгунца и сои с нормой расхода 6-25 г/га в зависимости от культуры.
2. Методика определения остаточных количеств Тифенсульфурон-метила в воде,
бобах и масле сои методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
2.1. Основные положения
2.1.1. Принцип метода
Методика основана на определении Тифенсульфурон-метила методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием ультрафиолетового детектора после его экстракции из образцов органическим растворителем, очистки экстракта путем перераспределения между двумя несмешивающимися органическими растворителями и на концентрирующих патронах на основе силикагеля (Диапак-Амин и Диапак-С). Идентификация веществ проводится по времени удерживания, а количественное определение методом абсолютной калибровки.
2.1.2. Метрологическая характеристика метода
Метрологическая характеристика метода представлена в табл.1 и 2.
Таблица 1
Метрологическая характеристика метода
Анализируемый объект |
Метрологические параметры, =0,95, =20 | ||||
|
предел обнаружения, мг/кг |
диапазон определяемых концентраций, мг/кг (мг/л) |
среднее значение определения, % |
стандартное отклонение, S |
доверительный интервал среднего результата, %, ± |
Вода |
0,005 |
0,005 |
88,0 |
2,75 |
3,42 |
Бобы сои |
0,01 |
0,01-0,10 |
74,8 |
1,06 |
1,32 |
Масло сои |
0,02 |
0,02-0,20 |
77,2 |
1,66 |
2,07 |
Таблица 2
Полнота определения Тифенсульфурон-метила в воде, бобах и масле сои (5 повторностей для каждой концентрации)
Среда |
Внесено Тифенсульфурон-метила, мг/кг (мг/л) |
Обнаружено, мг/кг (мг/л) |
Доверительный интервал, ± |
Полнота определения, % |
Вода |
0,005 |
0,0044 |
0,0002 |
88 |
Бобы сои |
0,01 |
0,0076 |
0,0001 |
76 |
|
0,02 |
0,0148 |
0,0005 |
74 |
|
0,05 |
0,0368 |
0,0007 |
73,6 |
|
0,10 |
0,0754 |
0,0016 |
75,4 |
среднее |
|
|
|
74,8 |
Масло сои |
0,02 |
0,0155 |
0,0004 |
77,5 |
|
0,04 |
0,0307 |
0,0009 |
76,8 |
|
0,10 |
0,0777 |
0,0034 |
77,7 |
|
0,20 |
0,1536 |
0,0028 |
76,8 |
среднее |
|
|
|
77,2 |
2.1.3. Избирательность метода
В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых при выращивании сои.
2.2. Реактивы, растворы, материалы и оборудование
2.2.1. Реактивы, материалы растворы
Тифенсульфурон-метил, аналитический стандарт с содержанием д.в. 99,6%, фирма Дюпон |
|
Ацетонитрил |
ТУ 6-09-3534-87 |
Вода бидистиллированная, деионизированная |
ГОСТ 7602-72 |
Гексан, ч |
ТУ 6-09-3375 |
Гелий, осч |
|
Калий марганцово-кислый, чда |
ГОСТ 20490-75 |
Кислота ортофосфорная, хч |
ГОСТ 6552-80 |
Кислота уксусная, ледяная |
ГОСТ 61-75 |
Концентрирующие патроны Диапак-Амин (0,6 г) |
ТУ 4215-002-05451931-94 |
Концентрирующие патроны Диапак-С (0,6 г) |
ТУ 4215-002-05451931-94 |
Магния сульфат, MgSОх7HO |
ГОСТ 4523-67 |
Натрий серно-кислый, безводный, хч |
ГОСТ 4166-76 |
Натрий хлористый, хч |
ГОСТ 4233-77 |
Подвижная фаза для ВЭЖХ: ацетонитрил - 300 мл, 0,1%-ный водный раствор ортофосфорной кислоты - 600 мл |
|
Фильтры бумажные "красная лента" |
ТУ-6-09-1678-86 |
Хлороформ, ч |
ГОСТ 20015-74 |
______________ | |
Этиловый эфир уксусной кислоты |
ГОСТ 223000-76* |
______________ | |
2.2.2. Приборы и оборудование | |
Алонж прямой с отводом для вакуума для работы с концентрирующими патронами, Диапак-Амин и Диапак-С |
|
Ванна ультразвуковая |
|
Весы аналитические ВЛА-200 или аналогичные |
ГОСТ 34104-80 E* |
_______________ | |
Весы лабораторные общего назначения, с наибольшим пределом взвешивания до 500 г и пределом допустимой погрешности ±0,038 г |
ГОСТ 19491-74 |
Воронки делительные на 250 и 500 мл |
|
Воронки конические стеклянные, диаметром 50-60 мм |
|
Встряхиватель механический или аналогичный |
ТУ 64-673М |
Колбы конические, плоскодонные на 250 и 500 мл |
ГОСТ 9737-70* |
______________ | |
Колбы мерные на 25, 50 и 100 мл
|
|
Концентраторы грушевидные и круглодонные, |
ГОСТ 10394-75 |
Микрошприц для жидкостного хроматографа на 50-100 мкл |
|
Насос водоструйный |
ГОСТ 10696-75 |
Пипетки мерные на 0,2; 1,0; 2,0; и 5,0 мл |
ГОСТ 20292-74 |
Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М или аналогичный |
ТУ 25-11-917-74 |
Стаканы стеклянные на 100-500 мл
|
ГОСТ 25366-80 E |
2.3. Подготовка к определению
2.3.1. Подготовка и кондиционирование колонки для жидкостной хроматографии
Колонку Spherisorb ODS устанавливают в термостате хроматографа и стабилизируют при температуре 25 °С и скорости потока подвижной фазы 1 мл/мин в течение 3-4 ч.
2.3.2. Подготовка растворителей
Перед началом эксперимента проверяют чистоту ацетона, гексана, этилацетата и хлороформа. Для этого досуха упаривают на ротационном вакуумном испарителе 100 мл растворителя, добавляют в концентратор 2 мл ацетонитрила, тщательно обмывают стенки концентратора и хроматографируют при 230 нм. При недостаточной чистоте растворителей проводят их очистку.
Гексан встряхивают с концентрированной серной кислотой, промывают бледно-розовым раствором марганцово-кислого калия до тех пор, пока раствор не перестанет обесцвечиваться, затем промывают водой, сушат над безводным хлористым кальцием и перегоняют (Гордон А., Форд Р. Спутник химика. М., 1976. С.441).
Хлороформ встряхивают с концентрированной серной кислотой, промывают водой, сушат над безводным хлористым кальцием и перегоняют (Гордон А., Форд Р. Спутник химика. М., 1976. С.443).
Этиловый эфир уксусной кислоты промывают равным объемом 5%-ного раствора соды, сушат над безводным хлористым кальцием (Беккер Г. и др. Органикум. М., 1979. С.372), кипятят в течение 1 ч с прокаленным сульфатом магния и затем перегоняют.
Бидистиллят кипятят в течение 6 ч с марганцово-кислым калием, добавленным из расчета 1 г/л и затем перегоняют.
Магний серно-кислый 7-водный прокаливают в течение 5 ч (до полного испарения воды).
2.3.3. Приготовление стандартных растворов
Взвешивают 100 мг Тифенсульфурон-метила в мерной колбе объемом 100 мл. Навеску растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом (стандартный раствор с концентрацией Тифенсульфурон-метила 1,0 мг/мл). Затем 10,0 мл стандартного раствора с концентрацией 1,0 мг/мл отбирают пипеткой в мерную колбу объемом 100 мл и доводят объем до метки ацетонитрилом при перемешивании (стандартный раствор с концентрацией Тифенсульфурон-метила 100,0 мкг/мл). Стандартные растворы можно хранить в холодильнике в течение месяца. Для хроматографического исследования и внесения в контрольные образцы каждый день из стандартного раствора с концентрацией 100 мкг/мл методом последовательного разведения ацетонитрилом готовят растворы, содержащие по 5,0; 2,0; 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/мл Тифенсульфурон-метила. Для внесения в образцы соевого масла при отработке метода из стандартного раствора с концентрацией 100 мкг/мл (в ацетонитриле) методом последовательного разведения этилацетатом готовят растворы, содержащие по 2,0; 1,0; 0,5; 0,2 мкг/мл Тифенсульфурон-метила.
2.3.4. Приготовление растворов для проведения анализа
2.3.4.1. Приготовление 0,1%-ного раствора уксусной кислоты в этилацетате.
В мерную колбу объемом 100 мл помещают 50 мл этилацетата и туда же добавляют 0,1 мл ледяной уксусной кислоты и доводят до метки этилацетатом, тщательно перемешивая. Раствор используют для элюирования Тифенсульфурон-метила с картриджа Диапак С.
2.3.4.2. Приготовление 2%-ного раствора уксусной кислоты в этилацетате.
В мерную колбу объемом 100 мл помещают 50 мл этилацетата и туда же добавляют 2,0 мл ледяной уксусной кислоты и доводят до метки этилацетатом, тщательно перемешивая. Раствор используют для элюирования Тифенсульфурон-метила с картриджа Диапак-Амин.
2.3.5. Приготовление растворов для жидкостной хроматографии
Для приготовления подвижной фазы используют свежеперегнанные ацетонитрил и очищенную воду.
2.3.5.1. Приготовление 0,1%-ного раствора ортофосфорной кислоты.
В мерную колбу объемом 1000 мл наливают 500 мл очищенной воды, добавляют туда 1 мл концентрированной ортофосфорной кислоты, перемешивают, доводят до метки очищенной водой и тщательно перемешивают.
2.3.5.2. Приготовление подвижной фазы для ВЭЖХ.
В плоскодонную колбу объемом 1 л помещают 300 мл ацетонитрила и 600 мл 0,1%-ного раствора ортофосфорной кислоты. Смесь тщательно перемешивают, пропускают через нее газообразный гелий со скоростью 20 мл/мин в течение 5 мин, после чего помещают в ультразвуковую ванну для удаления растворенных газов на 1 мин. Полученный раствор используют в качестве подвижной фазы.
2.3.6. Построение калибровочного графика
Для построения калибровочного графика вводят в хроматограф последовательно 3 раза по 20 мкл каждого из стандартных растворов, содержащих Тифенсульфурон-метил с концентрациями 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/мл, измеряют площадь пиков, рассчитывают среднее значение площади пика для каждой концентрации и строят график зависимости площади пика от концентрации Тифенсульфурон-метила.
2.3.7. Подготовка концентрирующего патрона Диапак-Амин (0,6 г) для очистки экстракта
Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 мл/мин.
Патрон Диапак-Амин устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 мл (используют как емкость для элюентов).
Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают 10 мл этилацетата. Элюат отбрасывают. Нельзя допускать высыхания поверхности картриджа!
2.3.7.1. Проверка хроматографического поведения Тифенсульфурон-метила на концентрирующем патроне Диапак-Амин
Из стандартного раствора Тифенсульфурон-метила в ацетонитриле, содержащего 1 мкг/мл отбирают 2 мл, помещают в круглодонную колбу объемом 100 мл и упаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 5 мл этилацетата, помещают на 30 с в ультразвуковую ванну, тщательно обмывают стенки концентратора и полученный раствор вносят на картридж. Затем в концентратор добавляют 5 мл этилацетата, обмывают стенки концентратора и полученный раствор также вносят на картридж. Элюат собирают в концентратор, упаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 мл ацетонитрила, помещают на 30 с в ультразвуковую ванну, тщательно обмывают стенки концентратора и хроматографируют. Концентратор тщательно обмывают 10 мл 0,1%-ной уксусной кислоты в этилацетате и смесь также вносят на картридж. Элюат собирают в концентратор, упаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 мл ацетонитрила, помещают на 30 с в ультразвуковую ванну, тщательно обмывают стенки концентратора и хроматографируют.
Тифенсульфурон-метил элюируют с картриджа 10 мл 2%-ной уксусной кислоты в этилацетате порциями по 5 мл, элюат после внесения каждой порции упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. Остатки уксусной кислоты отдувают холодным воздухом. Сухой остаток растворяют в 2 мл ацетонитрила, помещают на 30 с в ультразвуковую ванну, тщательно обмывают стенки концентратора и хроматографируют. Определяют фракции, содержащие Тифенсульфурон-метил, объединяют их и высчитывают полноту снятия вещества с колонки.
2.3.8. Подготовка концентрирующего патрона Диапак-С (0,6 г) для очистки экстракта
Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 мл/мин.
Патрон Диапак-С устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 мл (используют как емкость для элюентов).
Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают последовательно 5 мл этилацетата и 5 мл смеси гексан-этилацетат в соотношении 8:2. Элюат отбрасывают. Нельзя допускать высыхания поверхности картриджа!
2.3.8.1. Проверка хроматографического поведения Тифенсульфурон-метила на концентрирующем патроне Диапак-С.
Из стандартного раствора Тифенсульфурон-метила в ацетонитриле, содержащего 1 мкг/мл, отбирают 1 мл, помещают в круглодонную колбу объемом 100 мл и упаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 2 мл этилацетата, помещают на 30 с в ультразвуковую ванну и тщательно обмывают стенки концентратора. Затем в концентратор добавляют 8 мл гексана, смесь тщательно перемешивают и полученный раствор вносят на картридж. Концентратор тщательно обмывают 5 мл смеси гексан-этилацетат в соотношении 4:1 и смесь также вносят на картридж. Элюат собирают в концентратор, упаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 мл ацетонитрила, помещают на 30 с в ультразвуковую ванну, тщательно обмывают стенки концентратора и хроматографируют.
Картридж высушивают под вакуумом в течение 2 мин. Тифенсульфурон-метил элюируют с картриджа 10 мл 0,1%-ной уксусной кислоты в этилацетате порциями по 5 мл, элюат после внесения каждой порции упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. Остатки уксусной кислоты отдувают холодным воздухом. Сухой остаток растворяют в 2 мл ацетонитрила, помещают на 30 с в ультразвуковую ванну, тщательно обмывают стенки концентратора и хроматографируют. Определяют фракции, содержащие Тифенсульфурон-метил, объединяют их и высчитывают полноту снятия вещества с колонки.
Пробу, подвергшуюся растворению, следует проанализировать достаточно быстро, так как Тифенсульфурон-метил довольно быстро разлагается и с течением времени его концентрация в анализируемом растворе уменьшается.
2.4. Отбор проб
Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79). Отобранные пробы бобов сои подсушивают до стандартной влажности и хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре при комнатной температуре.
2.5. Описание определения
2.5.1. Вода
Пробу воды объемом 200 мл помещают в химический стакан емкостью 250 мл, доводят рН до значения 3,5 с помощью потенциометра и переносят в делительную воронку объемом 500 мл. Туда же добавляют 20 г сухого хлористого натрия и перемешивают до полного растворения соли. К раствору в делительной воронке добавляют 100 мл хлороформа и интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После полного разделения фаз нижний слой (хлороформ) собирают в концентратор, пропуская его через безводный сульфат натрия.
Тифенсульфурон-метил экстрагируют еще два раза хлороформом порциями по 50 мл, интенсивно встряхивая воронку в течение 2 мин. Каждый раз после разделения фаз в воронке нижний слой (хлороформ) собирают в концентратор, пропуская его через безводный сульфат натрия. Объединенный экстракт упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток после упаривания растворяют в 2 мл смеси ацетонитрил-вода в соотношении 1:2 и аликвоту объемом 20 мкл хроматографируют.
2.5.2. Бобы сои
2.5.2.1. Экстракция и первичная очистка.
Образец размолотых бобов массой 20 г помещают в коническую колбу объемом 250 мл, прибавляют 50 мл этилацетата и экстрагируют на ультразвуковой ванне в течение 5 мин и дополнительно 5 мин на механическом встряхивателе. Экстракцию повторяют еще два раза, используя по 50 мл этилацетата и экстрагируя на ультразвуковой ванне 5 мин и дополнительно 5 мин на механическом встряхивателе. Экстракты объединяют, фильтруют в концентратор объемом 250 мл через фильтр "красная лента" и упаривают до маслянистого остатка при температуре не выше 30 °С.
К маслянистому остатку в концентраторе добавляют 20 мл гексана, тщательно обмывают стенки концентратора и раствор переносят в сухую делительную воронку. Затем концентратор обмывают еще двумя порциями гексана по 20 и 10 мл и объединяют все смывы в делительной воронке. К объединенному экстракту в делительной воронке добавляют 20 мл ацетонитрила и интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После полного разделения фаз нижний ацетонитрильный слой собирают в концентратор объемом 250 мл, пропуская через слой безводного сульфата натрия толщиной ~1 см. Экстракцию повторяют еще двумя порциями ацетонитрила по 20 мл, экстракты объединяют и выпаривают досуха при температуре не выше 30 °С.
2.5.2.2. Очистка экстракта.
2.5.2.3. Очистка на концентрирующих патронах.
Сухой остаток растворяют в 5 мл этилацетата, помещают на 30 с в ультразвуковую ванну тщательно обмывают стенки концентратора и полученный раствор вносят на картридж. Затем в концентратор добавляют 5 мл этилацетата, обмывают стенки концентратора и полученный раствор вносят на подготовленный картридж Диапак-Амин. Концентратор тщательно обмывают 10 мл 0,1%-ной уксусной кислоты в этилацетате и смесь также вносят на картридж. Элюат отбрасывают. Тифенсульфурон-метил элюируют с картриджа 10 мл 2%-ной уксусной кислоты в этилацетате, элюат упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 2 мл этилацетата, помещают на 30 с в ультразвуковую ванну и тщательно обмывают стенки концентратора. Затем в концентратор добавляют 8 мл гексана, смесь тщательно перемешивают и полученный раствор вносят на картридж Диапак-С. Концентратор тщательно обмывают 5 мл смеси гексан-этилацетат в соотношении 4:1 и смесь также вносят на картридж. Элюат отбрасывают. Картридж высушивают под вакуумом в течение 2 мин. Тифенсульфурон-метил элюируют с картриджа 10 мл 0,1%-ной уксусной кислоты в этилацетате, элюат упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С.
Сухой остаток растворяют в 2 мл смеси ацетонитрил-вода в соотношении 1:2 и аликвоту 20 мкл вводят в хроматограф.
2.5.3. Масло сои
Образец масла массой 10 г помещают в химический стакан объемом 100 мл, прибавляют 30 мл гексана, тщательно перемешивают и переносят в делительную воронку объемом 250 мл. Стакан обмывают еще два раза гексаном порциями по 30 мл и переносят в ту же делительную воронку. К объединенному гексановому экстракту в делительной воронке добавляют 30 мл ацетонитрила и интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После полного разделения фаз нижний ацетонитрильный слой собирают в химический стакан объемом 150-200 мл. Экстракцию повторяют еще двумя порциями ацетонитрила по 30 мл, экстракты объединяют и возвращают в ту же делительную воронку.
К объединенному ацетонитрильному экстракту в делительной воронке прибавляют 100 мл гексана и интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После полного разделения фаз нижний ацетонитрильный слой собирают в концентратор объемом 250 мл, пропускают через слой безводного сульфата натрия и упаривают досуха при температуре не выше 30 °С. Верхний гексановый слой отбрасывают. Сухой остаток очищают последовательно на концентрирующих патронах Диапак-Амин и Диапак-С, как указано в п.2.5.2.3. После очистки элюат упаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 2 мл смеси ацетонитрил-вода в соотношении 1:2 и аликвоту 20 мкл вводят в хроматограф.
2.6. Условия хроматографирования и обработка результатов
2.6.1. Условия хроматографирования
Хроматограф "Waters" или другой с аналогичными характеристиками с ультрафиолетовым детектором с изменяемой длиной волны.
Колонка стальная Spherisorb ODS, 4,6 мм х 25 см, зернением 5 мкм.
Предколонка Symmetry Shield RP 18, 4,6 мм х 2 см, зернением 5 мкм.
Время выхода Тифенсульфурон-метила 9,24-9,81 мин.
Альтернативная колонка Symmetry Shield RP 18, 4,6 мм х 25 см, зернением 5 мкм.
Время выхода Тифенсульфурон-метила |
12,91-13,73 мин. | |
Температура колонки |
25 °С. | |
Подвижная фаза |
ацетонитрил - 0,1%-ная ортофосфорная кислота в соотношении 1:2. | |
Чувствительность |
0,005 ед. оптической плотности на шкалу. | |
Объем вводимой пробы |
20 мкл. |
Линейный диапазон детектирования сохраняется в пределах 2-20 нг.
После каждой инъекции следует промыть колонку в течение 10-15 мин потоком подвижной фазы при скорости потока 1 мл/мин.
2.9.2. Обработка результатов анализа
Содержание Тифенсульфурон-метила рассчитывают по формуле:
, где
- содержание Тифенсульфурон-метила в пробе, мг/кг или мг/л;
- высота (площадь) пика стандарта, мм;
- высота (площадь) пика образца, мм;
- концентрация стандартного раствора, мкг/мл;
- объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл;
- масса анализируемого образца, г (мл);
- содержание Тифенсульфурон-метила в аналитическом стандарте, %.
3. Требования техники безопасности
Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами.
4. Разработчики
Калинин В.А., проф., к.с-х.н.; Довгилевич Е.В., к.биол.н.; Калинина Т.С., к.с-х.н.; Довгилевич А.В., к.хим.н.; Устименко Н.В., к.биол.н.
Московская сельскохозяйственная академия им. К.А.Тимирязева.
Учебно-научный консультационный центр "Агроэкология пестицидов и агрохимикатов". 127550, Москва, Тимирязевская ул., д.53/1. Телефон: (095) 976-37-68, факс: (095) 976- 43-26.
Текст документа сверен по:
официальное издание
Определение остаточных количеств пестицидов
в пищевых продуктах, сельскохозяйственном
сырье и объектах окружающей среды:
Сборник методических указаний.
МУК 4.1.1434-4.1.1436а.
Выпуск 4. Часть 3. -
М.: Федеральный центр госсанэпиднадзора
Минздрава России, 2004