МУК 4.1.766-99

    
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

    
Газохроматографический метод количественного определения
ароматических аминосоединений (анилин, N-метиланилин, о-толуидин,
N,N-диметиланилин, N-этиланилин, N,N-диэтиланилин) в биосредах (моча)

    
    
Дата введения 1999-09-06

    
    
    УТВЕРЖДЕНЫ Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 6 июля 1999 г.
    
    
    Методические указания разработаны в соответствии с требованиями ГОСТа 8.563-96 "Методики выполнения измерений" и ГОСТа Р 1.5-92 "Общие требования к построению, изложению, оформлению и содержанию стандартов". Методика анализа метрологически аттестована и обеспечивает определение ароматических аминосоединений в моче в диапазоне концентраций:
    

    
    Особенностью токсического действия ароматических аминосоединений являются функциональные нарушения центральной нервной системы, печени. Ароматические аминосоединения вызывают дерматиты, экземы и развитие аллергии.
    

    Анилин - маслянистая прозрачная светло-желтая жидкость специфическим запахом. - 184,4 °С, - минус 5,89 °С. Aнилин растворим в органических растворителях и труднорастворим в воде. Анилин относится ко 2 классу опасности.
    

    N-метиланилин - маслянистая прозрачная жидкость желтого цвета со специфическим запахом. - 195,7 °С, - минус 57,0 °С. N-метиланилин растворим в органических растворителях и труднорастворим в воде. N-метиланилин относится к 3 классу опасности.
    

    О-толуидин - маслообразная прозрачная жидкость от светло-желтого до красновато-коричневого. - 199,7 °С, - минус 24,4 °С. О-толуидин растворим в органических растворителях и труднорастворим в воде. О-толуидин относится ко 2 классу опасности.
    

    N,N-диметиланилин - маслянистая прозрачная жидкость желтого цвета со специфическим запахом. - 194,0 °С, - 2,45 °С. N,N-диметиланилин растворим в органических растворителях и малорастворим в воде. N,N-диметиланилин относится ко 2 классу опасности.
    

    N-этиланилин - маслянистая прозрачная жидкость с желтым оттенком со специфическим запахом. - 204,7 °С. N-этиланилин растворим в органических растворителях и труднорастворим в воде. N-этиланилин относится к 4 классу опасности.
    

    N,N-диэтиланилин - маслянистая прозрачная жидкость желтоватого цвета со специфическим запахом. - 216,27 °С. - минус 38,8 °С. N,N-диэтиланилин растворим в органических растворителях и малорастворим в воде. N,N-диэтиланилин относится к 4 классу опасности.
    

    Дифенил - бесцветные кристаллы. - 255,9 °С, - 71,0 °С. Дифенил не растворим в воде, растворим в органических растворителях.
    

    Хлороформ - бесцветная жидкость с характерным сладковатым запахом. - 61,15 °С, - минус 63,5 °С. Хлороформ paстворим в этаноле, эфире, бензоле, ацетоне и сероуглероде, малорастворим в воде. Хлороформ относится ко 2 классу опасности.
    
    Методика обеспечивает выполнение измерений с суммарной погрешностью результата измерений:
    

    При доверительной вероятности 0,95.

Сущность метода

    Методика основана на предварительном концентрировании анализируемых соединений из биологического материала экстракцией хлороформом и последующего газохроматографического анализа хлороформенного экстракта.
    
    Измерение концентрации ароматических аминосоединений выполняют методом газовой хроматографии с пламенно-ионизационным детектированием.
    
    Нижний предел измерения в объеме пробы:
    

    Определению не мешают ацетон, ароматические углеводороды и алифатические спирты. Длительность анализа, включая экстракцию пробы, - 40 мин.
    
    

Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы

    При выполнении применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы. Допускается применение других типов средств измерений, вспомогательного оборудования и химреактивов с аналогичными метрологическими характеристиками.
    

Требования к безопасности

    Помещение для проведения измерений должно соответствовать требованиям "Пожарных норм проектирования зданий и сооружений" (СНиП ПА-5-700) и "Санитарных норм проектирования промышленных предприятий" (СН-245-71) и СНиП-74.
    
    При выполнении работ должны быть соблюдены меры противопожарной безопасности в соответствии с требованиями ГОСТа 12.1.004-85 и правила техники безопасности в соответствии с ГОСТом 12.1.007-76.
    
    При работе необходимо соблюдать "Правила по технике безопасности и производственной санитарии при работе в химических лабораториях", утверждены МЗ СССР 20.12.82 (М., 1981), и "Правила устройства и безопасной эксплуатации сосудов, работающих под давлением", утверждены Госгортехнадзором СССР 27.11.87 (М.: Недра, 1989).
    
    При работе с реактивом соблюдают требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТу 12.1.005-88.
    
    При выполнении измерений с использованием газового хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТом 12.1.019-79 и инструкции по эксплуатации прибора.
    
    

Требования к квалификации оператора

    К выполнению измерений допускаются лица, имеющие квалификацию не ниже инженера-химика и опыт работы на газовом хроматографе.
    
    

Условия измерений

    При проведении процессов приготовления растворов и подготовки проб к анализу соблюдают следующие условия:
    
     температура воздуха (20±5) °С;
    
     атмосферное давление 630-800 мм рт.ст.;
    
     влажность воздуха - не более 80% при температуре 25 °С.
    
    Выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендуемых технической документацией по прибору.
    
    

Подготовка к выполнению измерений

    Перед выполнением измерений проводят следующие работы: подготовка хроматографической колонки, приготовление стандартных смесей, установление градуировочной характеристики.
    

Приготовление стандартных смесей

    
    Для построения градуировочного графика собирают мочу, не содержащую исследуемых компонентов, и готовят серию рабочих стандартных растворов.
    
    Стандартные растворы аминосоединений и внутреннего стандарта готовят в мерных колбах вместимостью 100 см с содержанием этих веществ 20, 30, 50, 60, 70 мг и дифенила с содержанием 100, 90, 70, 60, 50 мг в хлороформе.
    

Подготовка хроматографической колонки

    
    Хроматографическую колонку перед заполнением неподвижной фазой промывают дистиллированной водой, ацетоном, гексаном, высушивают в токе инертного газа. Заполнение хроматографической колонки насадкой проводят под вакуумом. Концы колонки закрывают стекловатой и, не подключая к детектору, кондиционируют в токе газа-носителя (гелия) с расходом 55 см/мин при температуре 300 °С в течение 18 ч. После охлаждения колонку подключают к детектору, записывают нулевую линию в рабочем режиме. При отсутствии мешающих влияний колонка готова к работе.
    

Установление градуировочной характеристики

    
    Градуировочную характеристику устанавливают методом внутреннего стандарта (в качестве внутреннего стандарта - дифенил). Она выражает зависимость калибровочных коэффициентов (/ст) от отношения площадей пиков на хроматограмме (/cт) и строится по 5 сериям стандартных растворов для градуировки. Для этого в каждую колбу вместимостью 100 см вносят небольшое количество хлороформа и взвешивают, затем прибавляют аминосоединения и внутренний стандарт и взвешивают колбу повторно. Объем доводят до метки хлороформом и по разности результатов первого и второго взвешиваний вычисляют массу аминосоединений и внутреннего стандарта. Срок хранения - 3 ч.
    
    

Таблица

    
Стандартные растворы для установления градуировочной характеристики при определении
концентрации аминосоединений (фрагмент шкалы)

    
    
    В хроматографическую колонку через испаритель вводят по 10 мм каждого стандартного раствора и анализируют в условиях:
    

    На хроматограмме находят значения площадей пиков и внутреннего стандарта и вычисляют калибровочные коэффициенты на основании анализа бинарных смесей: анилин-дифенил, N-метиланилин-дифенил, о-толуидин-дифенил, N,N-диметиланилин-дифенил, N-этиланилин-дифенил и N,N-диэтиланилин-дифенил. Значение калибровочного коэффициента вычисляют по формуле:

,

где , - площади пиков исследуемого компонента и стандарта, мм;

    , - количество исследуемого компонента и стандарта, мг.

    
    По результатам 5 измерений определяется среднее значение калибровочного коэффициента и строится градуировочный график в координатах калибровочный коэффициент-отношение площадей пиков .
    
    Градуировку проверяют 1 раз в неделю и при смене партии реактивов.
    

Отбор проб

    
    Отбор проб мочи в объеме 100 см производится в тщательно вымытый стеклянный сосуд с притертой пробкой. Анализ мочи проводить сразу или хранить в холодильнике не более 12 ч поcле отбора пробы.
    
    

Выполнение измерений

    
    Анализируемую пробу мочи в количестве 100 см помещают в делительную воронку, добавляют 30 г (хлорид натрия) и 10 см хлороформа. Содержимое воронки интенсивно встряхивают 15 мин, после отстаивания хлороформенный экстракт сливают в пробирку и центрифугируют для денатурации белка 20 мин. Полученный центрифугат упаривают на ротационном испарителе и проводят газохроматографический анализ.
    
    

Вычисление результатов измерений

    
    Расчет концентрации анилина, N-метиланилина, о-толуидина, N,N-диметиланилина, N-этиланилина, N,N-диэтиланилина (мкг/см) в биопробе вычисляют по формуле:
    

,

где - концентрация анализируемых соединений в биопробе, мкг/см;
    
    , - площади пиков компонентов и стандарта, мм;
    
    - калибровочный коэффициент;
    
    - навеска стандарта, мг;
    
    - объем пробы, см.
    
    

Внутренний оперативный контроль

    
    Внутренний оперативный контроль качества результатов контрольного химического анализа (сходимость, воспроизводимость, точность) осуществляют с целью получения оперативной информации о качестве анализов и принятия при необходимости оперативных мер по его повышению (МИ 2335-95).
    

Контроль сходимости выходных сигналов

    
    Контролируемым параметром является относительный размах выходных сигналов хроматографа при вводах трех параллельных проб градуировочного раствора. Контроль осуществляется при проведении градуировки, при периодическом контроле градуировочных коэффициентов, а также при выполнении измерений.
    
    Результат контроля признается положительным при выполнении условия:
    

%,

где - площадь пика, мм;
    
    - среднее арифметическое значение площади пиков при вводе 3 параллельных проб градуировочного раствора.
    

Оперативный контроль точности

    
    Периодичность контроля погрешности измерений зависит от количества рабочих измерений за контролируемый период и определяется планами контроля.
    
    Образцами для контроля являются представительные пробы биосред, к которым делаются добавки в виде раствора. Отбирают 2 пробы и к одной из них делают добавку в виде раствора таким образом, чтобы их содержание увеличилось по сравнению с исходным на 50-150%. Каждую пробу анализируют в точном соответствии с прописью методики и получают результат анализа исходной рабочей пробы и рабочей пробы с добавкой . Результаты анализа исходной рабочей пробы и рабочей пробы с добавкой получают не по возможности, а в одинаковых условиях, т.е. их получает один аналитик с использованием одного набора мерной посуды, одной партии реактивов и т.д.
    
    Результаты контроля признаются удовлетворительными, если выполняется условие:
    

,

    
где - добавка к пробе в виде раствора с концентрацией, мкг/см;
        
     - норматив оперативного контроля погрешности, мкг/см.
    
    При внешнем контроле (=0,95) принимают
    

,

    
где и - характеристики погрешностей для исходной пробы и пробы с добавкой, мкг/см.     

и .

         
    При внутрилабораторном контроле (=0,90) принимают, что     

.

    
    При превышении оперативного контроля погрешности эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, и их устраняют.
    
    
    
Текст документа сверен по:
официальное издание
Определение химических соединений
в биологических средах: Сборник методических
указаний МУК 4.1.763-4.1.779-99. -
М.: Федеральный центр
госсанэпиднадзора Минздрава России, 2000