МУК 4.1.1223-03
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Определение остаточных количеств метрибузина в клубнях картофеля
методом газожидкостной хроматографии
Дата введения 2003-07-01
УТВЕРЖДЕНЫ Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации Г.Г.Онищенко 16 марта 2003 г.
1. Вводная часть
Фирма производитель: Байер, АГ.
Торговое название: ЗЕНКОР, СП.
Действующее вещество: метрибузин.
4-амино-6-трет-бутил-3-метилтио-1,2,4-триазин-5(4Н)-он (ИЮПАК).
Структурная формула:
Эмпирическая формула: CHNOS.
Молекулярная масса: 214,3.
Химически чистое вещество: бесцветные кристаллы.
Температура плавления: 126,2 °С.
Давление паров при 20 °С<10 мбар.
Растворимость (г/1000 мл) при 20 °С в воде - 1,2, в гексане - 2,0, этаноле - 10, метаноле - 450, ацетонитриле - > 600, этилацетате - > 600, ацетоне - 820, хлороформе - 850.
Стабильность: устойчив к действию разбавленных кислот и щелочей до рН 12,5 при 20 °С.
Гигиенические нормативы: МДУ в картофеле - 0,25 мг/кг.
Область применения препарата: Зенкор, СП - гербицид для борьбы с однолетними двудольными и злаковыми сорными растениями.
2. Метод определения метрибузина в клубнях картофеля
с применением газожидкостной хроматографии
2.1. Основные положения
2.1.1. Принцип метода
Метод основан на извлечении остаточных количеств метрибузина из анализируемого объекта ацетоном, последующем перераспределении препарата из водно-ацетоновой фракции в дихлорметан, проведении очистки экстракта на колонке с силикагелем и концентрирования конечного реэкстракта.
Количественное определение проводят с применением газожидкостной хроматографии с использованием термоионного детектора (ТИД), пламенно-фотометрического детектора (ПФД) или детектора электронного захвата (ДЭЗ), набивной или капиллярной колонки с неподвижной фазой типа SE-30.
2.1.2. Избирательность метода
Проведение очистки экстрактов, а также использование селективных детекторов позволяет устранять влияние возможных мешающих анализу сопутствующих компонентов.
2.1.3. Метрологическая характеристика метода
Диапазоны измеряемых концентраций, пределы обнаружения и другие метрологические параметры метода представлены в табл.
Таблица
Метрологические параметры метода
Метрологические параметры, =0,95 , =5 |
Анализируемый объект, |
Предел обнаружения, мг/кг |
0,05 |
Диапазон определяемых концентраций, мг/кг |
0,05-0,5 |
Среднее значение определения, % |
88,9 |
Стандартное отклонение, % |
4,1 |
Относительное стандартное отклонение, % |
2,0 |
Доверительный интервал среднего, % |
88,9±3,7 |
2.2. Реактивы, растворы, материалы
Аналитический стандарт метрибузина |
|
Ацетон, хч |
ГОСТ 2603-79 |
Вода бидистиллированная, деионизированная или перегнанная над KМnО |
|
Дихлорметан, хч |
ТУ 6-09-2662-77 |
Натрия сульфат безводный, чда |
ГОСТ 4166-76 |
Натрия хлорид, чда |
ГОСТ 4233-77 |
Силикагель L (100/160) для хроматографии или аналогичный |
|
Фильтры бумажные, белая лента |
ТУ 6-09-1678-86 |
Фильтры бумажные, синяя лента |
ТУ 6-09-1678-86 |
Элюент для колоночной хроматографии: дихлорметан:диэтиловый эфир (8:2), по объему |
|
Эфир диэтиловый, хч |
ТУ 7506804-97-90 |
2.3. Приборы, аппаратура, посуда
Хроматограф газовый "Цвет-560" (или другой аналогичного типа) с ТИД, ПФД-сера или ДЭЗ (ДПР) |
|
Колонка хроматографическая набивная размером 1 м х 3 мм (внутренний диаметр) с неподвижной фазой 5% SE-30 на хроматоне N-Super, 0,125-0,16 мм |
|
Колонка хроматографическая капиллярная размером 5 м х 0,53 мм (внутренний диаметр) с неподвижной фазой НР-1 (типа SE-30), 2,65 мкм |
|
Аппарат для встряхивания |
ТУ 64-1-1081-73 |
Весы аналитические типа ВЛР |
ГОСТ 19491-74 |
Весы лабораторные типа ВЛКТ |
ТУ 64-1-1065-73 |
Воронки делительные емкостью 500 мл |
|
Воронки для фильтрования стеклянные |
|
Гомогенизатор типа MPW-324 или аналогичный |
|
Колбы грушевидные емкостью 100 мл |
|
Колбы плоскодонные емкостью 200 мл |
|
Колбы плоскодонные со шлифом емкостью 250 мл |
|
Колбы мерные со шлифом емкостью 25, 50, 100 мл |
|
Микрошприц МШ-10 для ввода проб в газовый хроматограф |
|
Ротационный испаритель типа LP 203 или аналогичный |
|
Пипетки мерные емкостью 1, 2, 5 и 10 мл |
ГОСТ 20292-74Е |
Пробирки конические градуированные на 15 мл |
|
Стаканы стеклянные на 200 мл |
|
Установка для перегонки растворителей при атмосферном давлении |
|
Установка ультразвуковая "Серьга" УЗМ002 или аналогичная |
|
2.4. Отбор проб
Отбор проб для анализа проводят в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными 21.08.79, N 2051-79.
Отобранные пробы хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике не более одного дня. Для длительного хранения пробы помещают в морозильную камеру с температурой -18 °С.
Перед анализом клубни картофеля промывают водой для удаления остатков почвы. Из каждого неочищенного клубня берут сегменты по осевой линии. Сегменты нарезают ножом и после гомогенизации выделяют средний образец.
2.5. Подготовка к определению
2.5.1. Подготовка и очистка реактивов и растворителей
Перед началом работы рекомендуется проверить чистоту применяемых органических растворителей. Для этого 100 мл растворителя упаривают в ротационном испарителе при температуре 40 °С до объема 1,0 мл и хроматографируют. При обнаружении мешающих определению примесей проводят очистку растворителей в соответствии с общепринятыми методиками.
2.5.2. Подготовка и кондиционирование набивной колонки
Подготовленной насадкой (5% SE-30 на хроматоне N-Super или другом носителе) заполняют стеклянную колонку и уплотняют ее под вакуумом. Колонку устанавливают в термостате хроматографа, не подсоединяя к детектору, и кондиционируют ее при рабочем расходе газа-носителя и температуре 260 °С в течение 8-10 ч.
2.5.3. Приготовление стандартных растворов
Основной раствор метрибузина с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 0,010 г препарата, содержащего 99,3% д.в., в ацетоне в мерной колбе на 100 мл. Раствор хранят в холодильнике не более месяца.
Рабочие стандартные растворы с концентрациями 1,0, 2,0, 5,0 и 10,0 мкг/мл (при использовании ТИД и ПФД) или 0,1, 0,2, 0,5 и 1,0 мкг/мл (при использовании ДЭЗ) готовят из основного стандартного раствора метрибузина соответствующим последовательным разбавлением ацетоном. Рабочие растворы хранят в холодильнике не более двух недель.
При изучении полноты извлечения метрибузина в модельных опытах используют ацетоновые растворы вещества.
2.5.4. Построение калибровочного графика
Для построения калибровочного графика в инжектор хроматографа вводят по 1-2 мкл рабочего стандартного раствора метрибузина с концентрацией 1,0, 2,0, 5,0 и 10,0 мкг/мл (при использовании ТИД и ПФД) или 0,1, 0,2, 0,5 и 1,0 мкг/мл (при использовании ДЭЗ). Осуществляют не менее 5 параллельных измерений и находят среднее значение высоты (площади) хроматографического пика для каждой концентрации. Строят калибровочный график зависимости высоты (площади) хроматографического пика в мм (мм) от концентрации метрибузина в растворе в мкг/мл.
2.5.5. Подготовка колонки с силикагелем
Силикагель прогревают в термостате при 130 °С в течение 3 ч и охлаждают до комнатной температуры. Стеклянную колонку размером 30,0х1,0 см заполняют (при легком постукивании) 3,0 г силикагеля (высота слоя ~7,0 см). Над слоем силикагеля помещают слой безводного сульфата натрия высотой 1,5-2,0 см и перед использованием промывают содержимое колонки 5,0 мл смеси дихлорметан:диэтиловый эфир (8:2).
2.6. Подготовка пробы
Образец массой 20,0±0,1 г помещают в плоскодонную колбу емкостью 200 мл, добавляют 50 мл ацетона, слегка встряхивают и подвергают обработке ультразвуком в УЗ-бане по 5 мин два раза. После этого содержимое колбы фильтруют через складчатый бумажный фильтр белая лента в делительную воронку емкостью 500 мл. К остатку образца, находящемуся в колбе, приливают 50 мл ацетона и процедуру экстрагирования и фильтрования повторяют.
При использовании аппарата для встряхивания в колбу с образцом вносят 80 мл ацетона и встряхивают в течение 30 мин. Содержимое колбы фильтруют через складчатый бумажный фильтр белая лента в делительную воронку емкостью 500 мл. Внутренние стенки колбы с образцом ополаскивают 20 мл ацетона и экстрагент фильтруют.
К объединенному фильтрату в делительную воронку добавляют 250 мл бидистиллированной воды, 25 мл насыщенного водного раствора натрия хлорида и 25 мл дихлорметана. Воронку встряхивают в течение 1 мин и после 5 минутного отстаивания нижний дихлорметановый слой фильтруют через слой безводного сульфата натрия (толщина слоя - 1,0-1,5 см), помещенный на бумажный фильтр синяя лента, в грушевидную колбу (концентратор) емкостью 100 мл. Экстрагирование с использованием 25 мл дихлорметана повторяют еще раз. Водно-ацетоновый слой отбрасывают.
Объединенный дихлорметановый экстракт упаривают на ротационном испарителе досуха при температуре водяной бани 40 °С. Остаток в колбе (концентраторе) перерастворяют 3 мл дихлорметана и переносят его для очистки в подготовленную колонку с силикагелем. Метрибузин элюируют двумя объемами по 5,0 мл смеси дихлорметан:диэтиловый эфир (8:2), собирая элюат в коническую пробирку емкостью 15 мл. Элюат упаривают досуха в токе азота. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона (при использовании ТИД и ПФД) или в 5 мл ацетона (при использовании ДЭЗ) и анализируют его на содержание метрибузина по п.2.7.
2.7. Условия хроматографирования
2.7.1. При использовании набивной колонки
Газовый хроматограф "Цвет-560" с ТИД, ПФД или ДЭЗ (ДПР).
Колонка хроматографическая набивная размером 1 м х 3 мм (внутренний диаметр) с неподвижной фазой 5% SE-30 на хроматоне N-Super, 0,125-0,16 мм
Показания электрометра - 8х10
Скорость движения ленты самописца - 0,25 см/мин
Температура испарителя - 250 °С
Температура колонки - 200 °С
Температура детектора - 350 °С (для ТИД, ДЭЗ), 250 °С (для ПФД)
Скорость потока газа-носителя (азот) - 30 см/мин
Скорость водорода и воздуха к ТИД - 15 и 300 см/мин соответственно, к ПФД - 60 и 250 см/мин соответственно
Объем вводимой пробы - 1-2 мкл
Время удерживания метрибузина - 4,0±0,1 мин
Предел детектирования - 0,05 нг для ДЭЗ (ДПР), 0,5 нг для ТИД и 1,0 нг для ПФД.
Линейный диапазон детектирования - 0,1-1,0 нг для ДЭЗ (ДПР), 0,5-10 нг для ТИД и 1,0-10 нг для ПФД-сера.
2.7.2. При использовании капиллярной колонки
Газовый хроматограф с ТИД, ПФД или ДЭЗ.
Колонка хроматографическая капиллярная размером 5 м х 0,53 мм (внутренний диаметр) с неподвижной фазой НР-1 (типа SE-30), 2,65 мкм.
Температура испарителя - 250 °С.
Температура колонки с программированием при использовании ТИД или ДЭЗ от 60 °С (1 мин) до 260 °С (15 мин) со скоростью 10 °С/мин; при использовании ПФД-сера от 160 °С (1 мин) до 260 °С (15 мин) со скоростью 10 °С/мин.
Температура детектора - 300 °С (для ТИД, ДЭЗ), 200 °С (для ПФД).
Скорость потока газа-носителя (гелий) - 10 см/мин.
Скорость водорода и воздуха к ТИД - 30 и 300 см/мин соответственно, к ПФД - 90 и 200 см/мин соответственно, дополнительного газа (гелий) к ТИД - 60 см/мин, дополнительного газа (азот) к ДЭЗ - 40 см/мин.
Объем вводимой пробы - 1 мкл.
Время удерживания метрибузина при использовании ТИД или ДЭЗ 14,4±0,1 мин, при использовании ПФД - 4,5±0,1 мин.
Предел детектирования - 0,02 нг для ДЭЗ, 0,2 нг для ТИД и 0,5 нг для ПФД.
Линейный диапазон детектирования - 0,05-1,0 нг для ДЭЗ, 0,2-10 нг для ТИД и 0,5-10 нг для ПФД.
2.7.3. Обработка результатов анализа
Содержание метрибузина рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:
,
где - содержание метрибузина в пробе, мг/кг;
- высота (площадь) пика образца, мм (мм);
- высота (площадь) пика стандарта, мм (мм);
- концентрация стандартного раствора метрибузина, мкг/мл;
- объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл;
- масса анализируемой части образца (г).
3. Требования техники безопасности
Необходимо соблюдать общепринятые правила техники безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами, а также требования, изложенные в документации на приборы.
4. Контроль погрешности измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95. ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа.
5. Разработчики
В.И.Долженко, П.А.Тарарин, Т.А.Маханькова, Н.А.Ермолова (Всесоюзный научно-исследовательский институт защиты растений (Санкт-Петербург).
Текст документа сверен по:
официальное издание
Определение остаточных количеств пестицидов
в пищевых продуктах, сельскохозяйственном
сырье и объектах окружающей среды:
Сборник методических указаний. Вып.2. Ч.3. -
М.: Федеральный центр гигиены и
эпидемиологии Роспотребнадзора, 2005