МУК 4.1.1026-01

Методические указания


4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств Ципродинила в воде, почве, яблоках,
грушах и косточковых методом газожидкостной хроматографии

     
     
Дата введения 2003-01-01

     
     
     УТВЕРЖДЕНЫ Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации Г.Г.Онищенко
     
     

1. Вводная часть

     
     Фирма производитель: Новартис (Швейцария).
     
     Торговое название: Хорус, Юникс.
     
     Название действующего вещества по ИСО: Ципродинил.
     
     Название действующего вещества по ИЮПАК: 4-циклопропил-6-метил-N-фенил-пиримидин-2-амин.
          
          

          
     Химически чистый Ципродинил представляет собой кремовое кристаллическое вещество с запахом.
     
     Температура плавления 75,9 °С.
     
     Давление паров при 25 °С 5,1х10 Ра (модификация А) и 4,71х10 Ра (модификация Б).
     
     Растворимость в органических растворителях (25 °С, г/л растворителя): ацетон - 610, этанол - 160, н-гексан - 30, толуол - 460, р-октанол - 160.
     
     Растворимость в воде (мг/л) - 20 (рН 5,5), 13 (рН 7,0), 15 (рН 9,0).
     
     Коэффициент перераспределения октанол/вода =3,9 (рН 5,0), 4,0 (рН 7,0), 4,0 (рН 9,0) при 25 °С.
     
     Величина рК 4,44.
     
     Ципродинил устойчив к гидролизу (период полуразложения больше 1 года при рН 4-9). Фотолитически быстро разрушается в воде (ДТ 0,4-13,5 дней).
     
     Ципродинил является среднестойким соединением, с периодом полуразложения в почве 20-60 дней. В растениях метаболизируется посредством гидроксилирования 6-метильной группы, а также пиримидинового и фенильного ядра.
     
     Краткая токсикологическая характеристика
     
     Ципродинил относится к малоопасным соединениям по острой (ЛД для крыс более 2000 мг/кг) и дермальной токсичности (ЛД для крыс более 2000 мг/кг) и умеренно опасным по ингаляционной (ЛК (4 ч) более 1200 мг/м) токсичности.
     
     Не оказывает раздражающего действия на кожу и глаза кроликов.
     
     В России установлены следующие гигиенические нормативы: ДСД - 0,02 мг/кг/сут.; ОДК в почве - 0,7 мг/кг; ПДК в воде водоемов - 0,1 мг/дм; МДУ в плодовых косточковых и семечковых - 0,4 мг/кг.
     
     Область применения препарата
     
     Ципродинил - системный фунгицид, хорошо проникающий в растение через листья и передвигающийся преимущественно по ксилеме. Эффективно подавляет рост мицелия различных патогенов, в т.ч. устойчивых к фунгицидам из групп триазолов, имидазолов и др. В рекомендуемых дозах не оказывает отрицательного действия на растения.
     
     

2. Методика определения остаточных количеств Ципродинила в воде, почве,
яблоках, грушах и косточковых методом газожидкостной хроматографии

     
2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

     
     Методика основана на извлечении Ципродинила из анализируемой пробы органическим растворителем, очистке экстракта путем перераспределения Ципродинила между двумя несмешивающимися растворителями и последующим его определении с помощью газожидкостной хроматографии при использовании термоионного детектора (в азотном режиме), набивных колонок на неподвижной фазе OV-17 или SE-30 или капиллярной колонки с неподвижной фазой SE-54.
     
     Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.
     

2.1.2. Избирательность метода

     
     В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых для защиты плодовых культур от вредителей и болезней (хлор- и фосфорорганические пестициды, амиды, тио- и дитиокарбаматы, синтетические пиретроиды).
     

2.1.3. Метрологическая характеристика метода

     
     Метрологическая характеристика метода представлена в табл.1 и 2.
     
     

Таблица 1

     
Метрологическая характеристика метода

     
     
Таблица 2

     
Полнота определения Ципродинила в воде, почве, яблоках и грушах
(5 повторностей для каждой концентрации)

2.3. Подготовка к определению

2.3.1. Подготовка и кондиционирование колонки для газожидкостной хроматографии

     
     Готовую насадку (5% OV-17 на Инертоне-супер или 5% SE-30 на Хроматоне-N-AW-DMCS) засыпают в стеклянную колонку, уплотняют под вакуумом, колонку устанавливают в термостате хроматографа, не подсоединяя к детектору, и стабилизируют в токе азота при температуре 250 или 270 °С в течение 10-12 ч.
     
     Капиллярную колонку стабилизируют в токе гелия согласно прилагаемой к ней инструкции.
     

2.3.2. Приготовление стандартных растворов

     
     Стандартный основной раствор Ципродинила с концентрацией 100 мкг/мл готовят растворением 0,010 г вещества в гексане в мерной колбе на 100 мл. Раствор хранится в холодильнике в течение двух месяцев.
     
      Методом последовательного разбавления готовят стандартные растворы Ципродинила в гексане с концентрациями 0,1; 0,2; 0,4 и 1,0 мкг/мл для построения калибровочных графиков. Для внесения в образцы при постановке методики готовят из основного стандартного раствора Ципродинила растворы в ацетоне с концентрациями 0,4-1,0 мкг/мл.
     

2.3.3. Построение градуировочного графика

     
     Для построения градуировочного графика в испаритель хроматографа вводят по 3 мкл рабочих растворов Ципродинила с концентрациями 0,1; 0,2; 0,4 и 1,0 мкг/мл. При работе с капиллярной колонкой объем вводимой пробы - 1 мкл.
     
     Осуществляют не менее 5 параллельных измерений для каждой концентрации. Находят среднее значение высоты хроматографического пика для каждой концентрации.
     
     Строят градуировочный график зависимости высоты (площади) хроматографического пика в мм (мм) от концентрации Ципродинила в растворе, мкг/мл.
     

2.4. Отбор проб

     
     Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79). Пробы яблок и груш хранятся при температуре 0-4 °С в течение суток. Для длительного хранения пробы замораживаются и хранятся при температуре - 18 °С. Для длительного хранения пробы почвы подсушиваются при комнатной температуре в отсутствии прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут храниться в течение года. Перед анализом сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм, яблоки и груши перед анализом, не размораживая, измельчают на терке.
     

2.5. Описание определения

     
2.5.1. Почва

     
     К навеске 50 г воздушно-сухой почвы в конической колбе емкостью 250 мл добавляют 20 мл дистиллированной воды и 100 мл ацетона. Почву экстрагируют в колбе на аппарате для встряхивания в течение 1 ч. Экстракт фильтруют в концентратор методом декантации через фильтр "красная лента". Экстракцию повторяют еще два раза, используя по 50 мл ацетона соответственно, встряхивая колбу каждый раз в течение 30 мин.
     
     Объединенный экстракт упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 35 °С до полного удаления ацетона.
     
     Водную фракцию переносят в делительную воронку объемом 250 мл, обмывая концентратор 10-15 мл воды, добавляют 30 мл хлористого метилена и встряхивают смесь 1-2 мин. После разделения фаз нижний слой сливают через слой безводного сульфата натрия в концентратор и повторяют экстракцию хлористым метиленом еще два раза, используя соответственно 20 и 20 мл. Органические фракции объединяют, а водную фазу отбрасывают.
     
     Растворитель упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 35 °С досуха, остаток растворяют в 5 мл гексана и вводят в хроматограф 3 мкл (1 мкл для капиллярной колонки) пробы.
     

2.5.2. Вода

     
     В делительную воронку объемом 250 мл помещают 100 мл воды и пробу трижды экстрагируют хлористым метиленом порциями по 30, 20 и 20 мл соответственно. После каждой экстракции собирают нижний слой в концентратор, пропуская хлористый метилен через слой безводного сульфата натрия. После третьей экстракции воду отбрасывают, объединенный экстракт упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 35 °С досуха, остаток растворяют в 5 мл гексана и вводят в хроматограф 3 мкл (1 мкл для капиллярной колонки) пробы.
     

2.5.3. Яблоки и груши

     
     К навеске 25 г измельченных на терке плодов в конической колбе емкостью 250 мл добавляют 50 мл ацетона, смесь экстрагируют на аппарате для встряхивания в течение 30 мин. Содержимое колбы фильтруют в стакан методом декантации через фильтр "красная лента". Экстракцию повторяют еще 2 раза, используя по 50 мл ацетона каждый раз и встряхивая смесь в течение 30 мин. Объединенный экстракт в стакане помещают в морозильную камеру с температурой -10-12 °С на 1 ч. Раствор вторично фильтруют в концентратор через фильтр "красная лента" и упаривают до полного удаления ацетона на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 35 °С.
     
     Водный остаток переносят в делительную воронку объемом 250 мл, обмывая концентратор 20 мл воды, добавляют в воронку 20 мл хлористого метилена и встряхивают смесь 1-2 мин. После разделения фаз нижний слой сливают в стакан и повторяют экстракцию хлористым метиленом еще два раза, используя по 20 мл растворителя. Органические фракции объединяют, а водную фазу возвращают в воронку, добавляют 50 мл воды и выделившийся хлористый метилен сливают в стакан, объединяя с основной массой органического экстракта. Объединенный органический экстракт переносят в концентратор, фильтруя его через слой безводного сульфата натрия. Растворитель упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 35 °С досуха, остаток растворяют в 5 мл гексана и вводят в хроматограф 3 мкл (1 мкл для капиллярной колонки) пробы.
     

2.6. Условия хроматографирования и обработка результатов

     
2.6.1. Условия хроматографирования

     
     Хроматограф "Цвет-600" или аналогичный, снабженный термоионным детектором с пределом детектирования по азоту (в азобензоле) не менее 1,5х10 г/см.
     
     Рабочая шкала электрометра 8х10. Скорость движения ленты самописца 120 мм/ч.
     
     Колонка стеклянная, спиральная, длиной 1 м, внутренний диаметр 3 мм, заполненная 5% OV-17 на Инертоне-супер (0,16-0,20 мм).
     
     Температура испарителя - 290 °С, термостата колонки 220 °С, детектора - 340 °С, переходной камеры - 364 °С.
     
     Газовый режим: азот - 35, водород - 12, воздух - 130 мл/мин.
     
     Абсолютное время удерживания - 1 мин 57 с.
     
     Линейность детектирования сохраняется в пределах 0,3-3,0 нг.
     
     Альтернативная фаза: 5% SE-30 на Хроматоне N-AW-DMCS (0,20-0,25 мм), длина колонки 3 м.
     
     Температура термостата колонки - 230 °С, детектора - 340 °С, испарителя - 290 °С, переходной камеры - 364 °С.
     
     Газовый режим: азот - 35, водород - 12, воздух - 130 мл/мин.
     
     Абсолютное время удерживания - 1 мин 07 с.
     
     Рабочая шкала электрометра 8х10. Скорость движения ленты самописца 120 мм/ч.
     
     Альтернативные условия хроматографирования с использованием капиллярной колонки.
     
     Колонка хроматографическая, капиллярная НР-5, длина 30 м с внутренним диаметром 0,25 мм, неподвижная фаза 5% дифенил- и 95% диметилполисилоксан.
     
     Температура: испарителя 250 °С, колонки 220 °С, детектора 360 °С.
     
     Регулятор расхода гелия: тип регулятора - РРГ-11; режим - нормальный.
     
     Газ 1 - гелий, расход - 0,5 мл/мин, линейная скорость - 16 см/с, давление на входе - 81,48 кПа.
     
     Газ 2 - гелий (продувка испарителя), сброс 1:80, расход - 40 мл/мин.
     
     Газ 3 - азот (поддув в блок детекторов), расход - 40 мл/мин.
     
     Продувка системы после анализа при температуре 240 °С в течение 2 мин: продувка блока детекторов азотом - 40 мл/мин; продувка испарителя гелием - 40 мл/мин.
     
     Расход водорода - 12, воздуха - 200 мл/мин, объем пробы 1 мкл.
     
     Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют среднюю высоту пика.
     
     Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрациями Ципродинила 1,0 мкг/мл, соответственно разбавляют.
     

2.6.2. Обработка результатов анализов

     
     Содержание Ципродинила в пробах воды, почвы, яблоках, грушах и косточковых рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:
     

     
      - содержание Ципродинила в пробе, мг/кг;
     
      - высота (площадь) пика образца, мм;
     
      - высота (площадь) пика стандарта, мм;
     
      - концентрация стандартного раствора, мкг/мл;
     
      - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования (мл);
     
      - масса или объем анализируемого образца, г или мл.
     
      - содержание Ципродинила в аналитическом стандарте.
     
     

3. Требования техники безопасности

     
     Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами.
     
     

4. Разработчики

     
     Калинин В.А., проф., к.с-х.н., Довгилевич Е.В., к.биол.н., Калинина Т.С., к.с-х.н., Довгилевич А.В., к.хим.н., Рыбакова О.И., н.с., Устименко Н.В., ст.н.с., к.биол.н.
     
     Московская сельскохозяйственная академия им. К.А.Тимирязева. 127550, Москва, Тимирязевский пр., 2, кафедра химических средств защиты растений. Телефон: 976-02-20. Факс: 976-43-26.
     
     
     

Текст документа сверен по:
официальное издание
Определение остаточных количеств пестицидов
в пищевых продуктах, сельскохозяйственном сырье
и объектах окружающей среды: Сборник методических
указаний. Выпуск 1. - М.: Федеральный центр
госсанэпиднадзора Минздрава России, 2004