МУК 4.1.1138-02  

     
     
Методические указания


4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств квизалофоп-П-тефурила и его метаболитов
в клубнях картофеля, ботве и корнеплодах сахарной и столовой свеклы,
моркови и луке методом газожидкостной хроматографии

     
     
Дата введения 2003-01-01

     
     
     УТВЕРЖДЕНЫ Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации Г.Г.Онищенко
     
     

1. Вводная часть

     
     Фирма производитель: Юнироял Кемикал Ко. Инк.
     
     Торговое наименование препарата: ПАНТЕРА, КЭ.
     
     Действующее вещество (д.в.): квизалофоп-П-тефурил
     
     Название д.в. по номенклатуре ИЮПАК: (R)-2-[4-(6-=хлорхиноксалин-2-илокси) фенокси]пропионовой кислоты тетрагидрофурфуриловый эфир.
     

     
     Кристаллический порошок белого цвета без запаха.
     
     Давление паров: <5,9х10 мм Hg при 25 °С.
     
     Растворимость (мг/л при 25 °С): в воде - 3,753, метаноле - 6439, толуоле - 65170, н-гексане - 1243.
     
     Температура плавления: 72,5-74,5 °С.
     
     Коэффициент распределения в системе октанол/вода:  - 4,3222.
     
     Основным продуктом гидролитического разложения (метаболитом) квизалофоп-П-тефурила является 2-[4-(6-хлорхиноксалин-2-илокси) фенокси]пропионовая кислота.
     
     Токсикологическая характеристика: ДСД для массы тела человека 0,004 мг/кг.
     
     Гигиенические нормативы
     
     МДУ в сельскохозяйственной продукции: свекла, картофель 0,04 мг/кг; лук - 0,06 мг/кг.
     
     ПАНТЕРА, КЭ - послевсходовый гербицид для борьбы с однолетними и многолетними злаковыми сорными растениями при возделывании овощных и технических культур.     
     
     

2. Методика определения остаточных количеств квизалофоп-П-тефурила
и его метаболитов в клубнях картофеля, ботве и корнеплодах сахарной
и столовой свеклы, моркови и луке с применением
газожидкостной хроматографии

     
2.1. Основные положения

     
2.1.1. Принцип метода

     
     Метод основан на извлечении остаточных количеств квизалофоп-П-тефурила и его метаболитов из анализируемого объекта метанолом, последующем гидролизе квизалофоп-П-тефурила и метаболитов с дериватизацией (метанолиз) до конечного продукта 2-метокси-6-хлорхиноксалина, проведении очистки экстрактов на колонке с оксидом алюминия и концентрирования конечных реэкстрактов.
     
     Количественное определение проводят методом внешнего стандарта с применением газожидкостной хроматографии с использованием термоионного детектора (ТИД) или детектора электронного захвата (ДЭЗ), набивной или капиллярной колонки с неподвижной фазой типа SE-30.
     

2.1.2. Избирательность метода

     
     Прочие пестициды, применяемые в интенсивной технологии выращивания овощей, определению не мешают. Использование колоночной хроматографии для очистки экстрактов, а также селективных детекторов позволяет устранить влияние возможных мешающих анализу примесей.
     

2.1.3. Метрологическая характеристика метода

     
Таблица

     
Полнота определения квизалофоп-П-тефурила в модельных пробах (=6)

2.3. Приборы, аппаратура, посуда

2.4. Отбор проб

     
     Отбор проб для анализа проводят в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными 21.08.79 N 2051-79.
     

2.5. Подготовка к определению

     
2.5.1. Подготовка и очистка растворителей

     
     Перед началом работы рекомендуется проверить чистоту применяемых органических растворителей. Для этого 100 мл растворителя упаривают в ротационном испарителе при температуре 40 °С до объема 1,0 мл и хроматографируют. При обнаружении мешающих определению примесей очистку растворителей производят в соответствии с общепринятыми методиками.
     

2.5.2. Подготовка и кондиционирование колонки

     
     Подготовленной насадкой (3% SE-30 на хроматоне N-AW или другом носителе) заполняют стеклянную колонку и уплотняют ее под вакуумом. Колонку устанавливают в термостате хроматографа, не подсоединяя к детектору, и кондиционируют ее при рабочем расходе газа-носителя и температуре 260 °С в течение 8-10 ч.
     

2.5.3. Приготовление стандартных растворов

     
     Основной раствор 2-метокси-6-хлорхиноксалина с концентрацией 100 мкг/мл готовят в мерной колбе растворением 0,01 г стандартного вещества в 100 мл н-гексана. Раствор хранят в холодильнике не более 3 месяцев. Рабочие стандартные растворы с концентрациями 2,0; 5,0; 10,0 и 25,0 мкг/мл готовят из основного стандартного раствора 2-метокси-6-хлорхиноксалина соответствующим последовательным разбавлением н-гексаном. Рабочие растворы хранят в холодильнике не более месяца.
     
     При определении в модельных пробах полноты извлечения квизалофоп-П-тефурила используют соответствующие растворы вещества в ацетоне.
     

2.5.4. Построение калибровочного графика

     
     Для построения калибровочного графика в инжектор хроматографа вводят по 1-3 мкл рабочего стандартного раствора 2-метокси-6-хлорхиноксалина с концентрацией 2,0; 5,0; 10,0 и 25,0 мкг/мл. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений и находят среднее значение высоты (площади) хроматографического пика для каждой концентрации. Строят калибровочный график зависимости высоты (площади) хроматографического пика в мм (мм) от концентрации 2-метокси-6-хлорхиноксалина в растворе в мкг/мл.
     

2.5.5. Подготовка хроматографических колонок с оксидом алюминия 1-й и 4-й степени активности по Брокману
для очистки экстрактов

     
     Оксид алюминия прогревают в фарфоровой чашке в термостате при 150 °С в течение 5 ч и охлаждают до комнатной температуры (1-я степень активности по Брокману). Для приготовления оксида алюминия 4-й степени активности по Брокману внутреннюю поверхность колбы со шлифом объемом 0,5 л увлажняют 11,1 мл дистиллированной воды и добавляют в колбу 100 г активированного оксида алюминия. Содержимое колбы тщательно перемешивают. Колбы с подготовленным оксидом алюминия хранят герметично закрытыми.
     
     Стеклянную колонку размером 30,0х1,0 см заполняют (при легком встряхивании) 5,0 г оксида алюминия (высота слоя ~7,0 см). Над слоем оксида алюминия помещают слой безводного сульфата натрия высотой 2,0 см и содержимое колонки перед использованием промывают 30,0 мл н-гексана.
     

2.5.6. Подготовка проб к определению

     
     Клубни картофеля, корнеплоды моркови и свеклы промывают водой для удаления остатков почвы и обсушивают фильтровальной бумагой. Из каждого неочищенного клубня, корнеплода или репки лука берут сегменты (1/4 часть) по осевой линии. Сегменты нарезают ножом, гомогенизируют и после тщательного перемешивания выделяют средний образец. Ботву свеклы нарезают ножом, гомогенизируют, перемешивают и выделяют средний образец.
     

2.6. Проведение определения

     
2.6.1. Обработка проб для газохроматографического анализа с использованием ДЭЗ

     
     2.6.1.1 Проведение экстракции и метанолиза. Образец массой 10,0±0,1 г помещают в круглодонную колбу со шлифом емкостью 250 мл, добавляют 25 мл метилового спирта и 5 мл 40% водного раствора гидроокиси натрия, слегка встряхивают и добавляют 25 мл (вторая порция) метилового спирта. Колбу помещают на водяную баню, присоединяют обратный холодильник и содержимое колбы кипятят в течение 90 мин. Затем обратный холодильник отсоединяют, колбу 90 мин.* Затем обратный холодильник отсоединяют, колбу закрывают пробкой и охлаждают в струе проточной холодной воды. Сразу же после этого содержимое колбы фильтруют через складчатый бумажный фильтр "красная лента" в делительную воронку емкостью 500 мл. Внутренние стенки колбы и фильтр промывают 15 мл метилового спирта. Затем в воронку добавляют 50 мл дистиллированной воды, 10 мл насыщенного водного раствора хлористого натрия и с использованием концентрированной соляной кислоты (~ 3 мл) доводят содержимое воронки до рН 5-6. В воронку приливают 30 мл н-гексана и встряхивают в течение 3 мин. После 5-минутного отстаивания нижний водно-метанольный слой сливают в плоскодонную колбу емкостью 500 мл.
_____________
     * Текст соответствует оригиналу. - Примечание .
     
     Гексановый экстракт, оставшийся в делительной воронке, пропускают через коническую воронку с ватным тампоном и слоем безводного сульфата натрия (толщина 1,0-1,5 см) в грушевидную колбу-концентратор емкостью 100 мл. Экстрагирование с использованием 30 мл н-гексана повторяют еще раз. Воронку и сульфат натрия промывают 5 мл н-гексана. Объединенный гексановый экстракт упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °С до объема 5,0 мл.
     
     Водно-метанольный слой отбрасывают.
     
     2.6.1.2. Проведение очистки экстрактов корнеплодов и ботвы свеклы, корнеплодов моркови и клубней картофеля на колонке с оксидом алюминия 4-й степени активности по Брокману. Остаток гексанового экстракта объемом 5 мл количественно переносят из колбы-концентратора в подготовленную колонку с оксидом алюминия. Элюирование 2-метокси-6-хлорхиноксалина осуществляют 20 мл н-гексана со скоростью ~60 кап./мин в грушевидную колбу-концентратор.
     
     Элюат после очистки концентрируют на ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °С до объема 1,5-2,0 мл. Остаток количественно переносят в мерную коническую пробирку емкостью 10 мл и упаривают н-гексан в токе азота досуха. Сухой остаток в пробирке растворяют в 0,5 мл н-гексана и хроматографируют.
     

     2.6.1.3. Проведение очистки экстрактов репок лука на колонке с оксидом алюминия 1-й степени активности по Брокману. При проведении анализа проб репок лука остаток гексанового экстракта репок лука объемом 5 мл количественно переносят в колонку с оксидом алюминия 1-й степени активности по Брокману.
     
     Колонку с нанесенным экстрактом промывают 30 мл смеси н-гексан-метилен хлористый (98:2) и элюат отбрасывают. После этого проводят элюирование 2-метокси-6-хлорхиноксалина 15 мл смеси н-гексан-метилен хлористый (93:7) со скоростью ~60 кап./мин в грушевидную колбу-концентратор.
     
     Элюат после очистки концентрируют на ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °С до объема 1,5-2,0 мл. Остаток количественно переносят в мерную коническую пробирку емкостью 10 мл и упаривают н-гексан в токе азота досуха. Сухой остаток в пробирке растворяют в 0,5 мл н-гексана и хроматографируют.
     

2.6.2. Обработка проб для газохроматографического анализа с использованием ТИД

     
     Образец массой 10,0±0,1 г помещают в круглодонную колбу со шлифом емкостью 250 мл, добавляют 25 мл метилового спирта и 5 мл 40%-ного водного раствора гидроокиси натрия, слегка встряхивают и добавляют 25 мл (вторая порция) метилового спирта. Колбу помещают на водяную баню, присоединяют обратный холодильник и содержимое колбы кипятят в течение 90 мин. Затем обратный холодильник отсоединяют, колбу закрывают пробкой и охлаждают в струе проточной холодной воды. Сразу же после этого содержимое колбы фильтруют через складчатый бумажный фильтр "красная лента" в делительную воронку емкостью 500 мл. Внутренние стенки колбы и фильтр промывают 15 мл метилового спирта. Затем в воронку добавляют 50 мл дистиллированной воды, 10 мл насыщенного водного раствора хлористого натрия и с использованием концентрированной соляной кислоты (~3 мл) доводят содержимое воронки до рН 5-6. В воронку приливают 30 мл н-гексана и встряхивают в течение 3 мин. После 5-минутного отстаивания нижний водно-метанольный слой сливают в плоскодонную колбу емкостью 500 мл.
     
     Гексановый экстракт, оставшийся в делительной воронке, пропускают через коническую воронку с ватным тампоном и слоем безводного сульфата натрия (толщина 1,0-1,5 см) в грушевидную колбу-концентратор емкостью 100 мл. Экстрагирование с использованием 30 мл н-гексана повторяют еще раз. Воронку и сульфат натрия промывают 5 мл н-гексана. Водно-метанольный слой отбрасывают.
     
     Объединенный гексановый экстракт упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °С до объема 5,0 мл. Остаток количественно переносят в мерную коническую пробирку емкостью 10 мл и упаривают н-гексан в токе азота досуха. Сухой остаток в пробирке растворяют в 0,5 мл н-гексана и хроматографируют.
     

2.7. Условия газохроматографического анализа

     
2.7.1. При использовании насадочной колонки

     
     Примечание: после выполнения 5-7 анализов насадочную колонку следует прогреть при температуре 260 °С в течение 1 ч.
     
     

2.7.2. При использовании капиллярной колонки

     
     
2.7.3. Расчет суммарного содержания квизалофоп-П-тефурила и его метаболитов

     
     Расчет проводят по стандартному раствору 2-метокси-6-хлорхиноксалина, высота (площадь) пика которого наиболее близка высоте (площади) пика в рабочей пробе. Расчет суммарного содержания квизалофоп-П-тефурила и его метаболитов производят по следующей формуле:
     

 [мг/кг], где

     
      - концентрация стандартного раствора 2-метокси-6-хлорхиноксалина, нг/мкл;
     
      - высота (площадь) пика 2-метокси-6-хлорхиноксалина в анализируемой пробе, мм (мм);
     
      - высота (площадь) пика 2-метокси-6-хлорхиноксалина в стандартном растворе, мм (мм);
     
      - объем анализируемой пробы, введенной в хроматограф, мкл;
     
      - объем пробы стандартного раствора, введенного в хроматограф, мкл;
     
      - общий объем анализируемой пробы, мкл;
     
      - навеска исследуемого образца пробы, г;
     
      - коэффициент пересчета, равный 2,75, учитывающий соотношение молекулярных масс квизалофоп-П-тефурила и 2-метокси-6-хлорхиноксалина, а также степень извлечения анализируемых компонентов из матрицы.
     
     Для получения достоверных результатов измерений конечный результат записывается следующим образом:
     

, где

     
      - содержание остаточных количеств квизалофоп-П-тефурила и его метаболитов в анализируемой пробе в пересчете на действующее вещество;
     
      - среднее из трех параллельных результатов измерений;
     
      - показатель погрешности измерений, соответствующий диапазону, в который попадает величина .
     
     

3. Требования техники безопасности

     
     Необходимо соблюдать общепринятые правила техники безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами, а также требования, изложенные в документации на приборы.
     
     

4. Разработчики

     
     Долженко В.И., Крылов А.И., Григорьева Л.В., Тарарин П.А., Николаев М.Я. (ВНИИ защиты растений, 189620, Санкт-Петербург - Пушкин, шоссе Подбельского, 3).
     
     
     

Текст документа сверен по:
официальное издание
Определение остаточных количеств пестицидов
в пищевых продуктах, сельскохозяйственном сырье
и объектах окружающей среды: Сборник методических
указаний. Выпуск 1. - М.: Федеральный центр
госсанэпиднадзора Минздрава России, 2004