МУК 4.1.1400-03  

     
     
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств фипронила  и его метаболита
фипронил-сульфона в воде, почве, клубнях картофеля, зерне и соломе
зерновых колосовых культур методом газожидкостной хроматографии

     
     
Дата введения 2003-06-30

     
     
     УТВЕРЖДЕНЫ Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации Г.Г. Онищенко 24 июня 2003 г.
     
     

1. Вводная часть

     
     Фирма-производитель: Рон-Пуленк.
     
     Торговое название: Регент, Адонис, Космос.
     
     Названия по ИСО: фипронил, фипронил-сульфон.
     

         
     Эмпирическая формула: СHClFNOS (1), СHClFNOS (2).
     
     Молекулярная масса: 437,2.
     
     Химически чистый фипронил представляет собой бесцветное кристаллическое вещество с плесневым запахом.
     
     Давление насыщенного пара 3,7х10 mРа при 20 °С.
     
     Температура плавления: 195,5-203,0 °С.
     
     Коэффициент распределения октанол/вода: 4,00 при 20 °С.
     
     Растворимость (г/100 мл): дихлорметан - 2,23, ацетон - 54,59, этилацетат - 26,49, гексан - 0,003 (28 мг/л), метанол - 13,75, 1-октанол - 1,22, вода - 1,9-2,4 мг/л (независимо от рН). Коэффициент распределения октанол/вода 4,00 при 20 °С. Фипронил термически стабилен, не разрушается в присутствии металлов, не гидролизуется при рН 5-7; при рН 9 гидролизуется на 50% за 28 дней.
     
     В растениях соединение в результате окисления метаболизируется до фипронил-сульфона. В почве в период 30 и более дней наряду с сульфоном образуется соответствующий сульфид в результате восстановления сульфоксидной группы, а также амид за счет гидролиза нитрильной группы.
     
     В России установлены следующие гигиенические нормативы: ДСД - 0,0002 мг/кг/сутки; ПДК в почве - 0,05 мг/кг; ПДК в воде водоемов - 0,001 мг/дм. МДУ в клубнях картофеля и зерне хлебных злаков - 0,005 мг/кг.
     
     Фипронил - инсектицид из группы арилпиразолов контактного, кишечного и частично системного действия с длительным защитным эффектом. Он эффективно подавляет развитие вредителей из отрядов жесткокрылых и прямокрылых в посевах зерновых культур и на плантациях картофеля при норме расхода 5-12,5 г д.в./га, а также почвообитающих вредителей при обработке семян зерновых культур.
     
     Зарегистрирован в России под торговыми названиями Регент, Адонис и Космос в виде воднодиспергируемых гранул, концентратов эмульсии и суспензии для борьбы с грызущими и сосущими насекомыми с нормой расхода 4-20 г д.в. на га в зависимости от культуры и вредителя в посадках картофеля и посевах зерновых колосовых культур.
     
     

2. Методика определения фипронила и фипронила-сульфона в воде, почве,
клубнях картофеля, зерне и соломе зерновых колосовых культур
методом газожидкостной хроматографии

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

     
     Методика основана на определении фипронила и фипронил-сульфона методом газожидкостной хроматографии с использованием электронозахватного детектора после их экстракции из образцов органическим растворителем и очистки экстрактов методом перераспределения соединений между двумя несмешивающимися растворителями. Идентификация фипронила и фипронил-сульфона проводится по временам удерживания, а количественное определение - методом абсолютной калибровки
     

2.1.2. Избирательность метода

     
     В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых при возделывании картофеля и зерновых культур (производные фенокси- и гетарилоксикарбоновых кислот, хлор- и фосфорорганические соединения, пиретроиды).
     

2.1.3. Метрологическая характеристика метода

     
     Метрологическая характеристика метода представлена в табл.1 и 2.
     
     

Таблица 1

     
Метрологическая характеристика метода

     
     
Таблица 2

     
Доверительный интервал и полнота определения фипронила и фипронил-сульфона в воде,
почве, клубнях картофеля, зерне и соломе зерновых колосовых культур

2.2. Реактивы, растворы, материалы и оборудование

     
2.2.1. Реактивы, материалы и растворы

2.2.2. Приборы, аппаратура, посуда

2.3. Подготовка к определению

     
2.3.1. Подготовка и кондиционирование колонки для газожидкостной хроматографии

     
     Готовую насадку засыпают в стеклянную хроматографическую колонку и уплотняют под вакуумом. Колонку устанавливают в термостате хроматографа, не подсоединяя к детектору, и стабилизируют в токе азота при температуре на 20 °С ниже максимально допустимой для данной жидкой фазы в течение 8-10 ч.
     

2.3.2. Приготовление стандартных растворов

     
     Взвешивают 50 мг фипронила или фипронил-сульфона в мерной колбе на 50 мл, растворяют навеску в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом (стандартные растворы N 1, концентрация 1 мг/мл).
     
     Стандартные растворы N 1 можно хранить в холодильнике в течение 6 месяцев.
     
     Методом последовательного разбавления готовят стандартные растворы фипронила и фипронил-сульфона в ацетонитриле с концентрацией 0,1; 0,05; 0,01 и 0,005 мкг/мл для построения калибровочных графиков. Для приготовления стандартных растворов фипронила можно использовать толуол.
     

2.3.3. Подготовка колонки для очистки экстракта

     
     В пластиковую или стеклянную колонку диаметром 15 мм помещают 4-5 г флорисила с размером зерен 60-100 меш и, аккуратно постукивая по стенкам колонки, формируют слой адсорбента высотой 5 см. Сверху на флорисил насыпают 1 г безводного сульфата натрия. Колонку промывают 20 мл смеси этилацетата с гексаном в соотношении 1:1 и высушивают при комнатной температуре.
     
     

2.4. Отбор проб

     Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79). Пробы клубней картофеля хранят при температуре 0-4 °С в течение суток. Для длительного хранения пробы замораживаются и хранятся при температуре -18 °С.
     
     Отобранные пробы зерна и соломы подсушивают до стандартной влажности и хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре при комнатной температуре. Для длительного хранения пробы почвы подсушиваются при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут храниться в течение года.
     
     Перед анализом сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм, клубни картофеля измельчают на терке, зерно и солому - на лабораторной мельнице.
     
     

2.5. Описание определения

     
2.5.1. Вода

     
     Пробу воды объемом 100 мл помещают в делительную воронку емкостью 250 мл и трижды экстрагируют хлористым метиленом порциями по 20 мл, встряхивая каждый раз воронку в течение 1-2 мин. После разделения фаз в воронке нижний слой сливают в концентратор, пропуская его через безводный сульфат натрия. Объединенные экстракты выпаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре бани не выше 40 °С.
     
     Остаток в концентраторе растворяют в 10 мл гексана и переносят раствор в делительную воронку, обмывая концентратор еще 10 мл гексана. Фипронил трижды реэкстрагируют ацетонитрилом порциями 20, 10 и 10 мл соответственно, встряхивая воронку во время экстракции 1-2 мин. Сливают каждый раз нижний слой из делительной воронки в концентратор, объединяя все порции ацетонитрила.
     
     Растворитель выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °С досуха. Сухой остаток растворяют в 5 мл ацетонитрила и вводят в хроматограф 2 мкл раствора.
     

2.5.2. Почва

     
     Образец почвы массой 20 г помещают в коническую колбу объемом 250 мл, добавляют 50 мл ацетонитрила и встряхивают смесь на встряхивателе 1 ч. Дают осадку отстояться и растворитель декантируют в концентратор через фильтр "красная лента". К остатку почвы в колбе прибавляют 20 мл ацетонитрила и дополнительно экстрагируют образец на встряхивателе в течение 20 мин. Экстракт фильтруют через тот же фильтр в концентратор. Ацетонитрил упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °С до объема 10-15 мл и добавляют в концентратор 10 мл дистиллированной воды. Затем ацетонитрил доупаривают полностью в вакууме, а водный остаток переносят в делительную воронку.
     
     Реэкстрагируют фипронил из водной среды тремя порциями по 10 мл хлористого метилена, встряхивая воронку во время каждой экстракции в течение 1-2 мин. Сливают в концентратор нижний слой после разделения фаз в делительной воронке, пропуская каждый раз экстракт через слой безводного сульфата натрия. Объединенный экстракт выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °С досуха. Сухой остаток растворяют в 5 мл толуола и вводят в хроматограф 5 мкл пробы. При необходимости проведения анализа на содержание остатков Фипронил-сульфона сухой остаток растворяют в 5-10 мл ацетонитрила.
     

2.5.3. Клубни картофеля

     
     Навеску 25 г растертых клубней картофеля помещают в коническую колбу емкостью 250 мл, добавляют 75 мл ацетонитрила и встряхивают смесь на встряхивателе 1 ч. Экстракт фильтруют через фильтр "красная лента" в коническую колбу на 100 мл методом декантации и добавляют к раствору 5 г твердого хлорида натрия. Оставляют на 20 мин, после чего раствор аккуратно переносят в делительную воронку так, чтобы осадок остался в колбе. Повторяют экстракцию еще раз, используя 50 мл ацетонитрила и встряхивая смесь 0,5 ч. Экстракт объединяют в делительной воронке объемом 250 мл.
     
     К объединенным экстрактам в делительной воронке добавляют 20 мл насыщенного раствора хлорида натрия и встряхивают смесь 1-2 мин. Водный слой (нижний) отбрасывают, органическую фазу фильтруют через слой безводного сульфата натрия в концентратор. Растворитель выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °С досуха.
     
     Остаток растворяют в 5 мл ацетонитрила и добавляют в концентратор 40 мл дистиллированной воды. Смесь переносят в делительную воронку и экстрагируют хлористым метиленом трижды порциями по 20 мл. Сливают из делительной воронки каждый раз нижний слой в концентратор, пропуская его через безводный сульфат натрия. Объединенные экстракты выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °С досуха. Сухой остаток растворяют в 5 мл ацетонитрила и вводят в хроматограф 5 мкл пробы в условиях, указанных в п.2.6.1.1. Для определения содержания фипронил-сульфона пробу повторно хроматографируют в условиях, указанных в п.2.6.1.2.
     

2.5.4. Зерно

     
     К навеске 10 г размолотого зерна в конической колбе емкостью 250 мл добавляют 30 мл ацетонитрила и встряхивают смесь 1 ч на встряхивателе. Экстракт фильтруют в концентратор через бумажный фильтр "красная лента" методом декантации. Повторяют экстракцию еще два раза, используя каждый раз тот же объем растворителя и встряхивая смесь по 0,5 ч. Экстракты объединяют в концентраторе объемом 250 мл. Объединенные экстракты выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °С досуха.
     
     Остаток в концентраторе растворяют в 5 мл ацетонитрила и добавляют 40 мл воды. Смесь переносят в делительную воронку и экстрагируют хлористым метиленом трижды порциями по 20 мл. Сливают из делительной воронки каждый раз нижний слой в концентратор, пропуская его через безводный сульфат натрия. Объединенные экстракты выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °С досуха. Сухой остаток растворяют в 5 мл ацетонитрила и вводят в хроматограф 5 мкл пробы в условиях, указанных в п.2.6.1.1. Для определения содержания фипронил-сульфона пробу повторно хроматографируют в условиях, указанных в п.2.6.1.2.
     

2.5.5. Солома

     
     К навеске 10 г измельченной соломы в конической колбе емкостью 250 мл добавляют 10 мл дистиллированной воды и 75 мл ацетонитрила. Встряхивают смесь в течение 1 ч на встряхивателе. Экстракт фильтруют в делительную воронку через бумажный фильтр "красная лента". Повторяют экстракцию ацетонитрилом еще два раза, используя по 50 мл растворителя и встряхивая смесь каждый раз на встряхивателе по 0,5 ч. Экстракты объединяют в делительной воронке объемом 250 мл.
     
     Добавляют в делительную воронку к объединенным экстрактам 50 мл насыщенного раствора хлорида натрия и встряхивают смесь 1-2 мин. Водный слой (нижний) отбрасывают. К ацетонитриловому раствору добавляют 50 мл гексана, и смесь встряхивают в воронке 1-2 мин. Нижнюю фазу после разделения слоев в делительной воронке фильтруют через безводный сульфат натрия в концентратор. Гексановый (верхний) слой отбрасывают. Растворитель выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °С досуха.
     
     К сухому остатку в колбе добавляют 1 мл этилацетата и 4 мл гексана и переносят раствор на колонку для очистки образцов, подготовленную в соответствии с п.2.3.3. Последовательно промывают колонку 10 мл гексана, 5 мл смеси гексана с этилацетатом в соотношении 4:1 и 2 мл смеси гексана с этилацетатом в соотношении 1:1. Элюаты отбрасывают.
     
     Далее колонку промывают 10 мл смеси гексана с этилацетатом в соотношении 1:1, собирая элюат в концентратор. Растворитель выпаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °С досуха. Остаток растворяют в 5 мл ацетонитрила и вводят пробу объемом 5 мкл в хроматограф.
     

2.6.1*. Условия хроматографирования

________________
     * Нумерация соответствует оригиналу. - Примечание .

     
     Хроматограф "Цвет-550" с детектором постоянной скорости рекомбинации ионов с пределом детектирования по Линдану не выше 4х10 г/см.
     
     Рабочая шкала электрометра 16х10 или 32х10. Скорость движения ленты самописца 120 мм/ч.
     
     Колонка стеклянная, спиральная, длина 2 м, внутренний диаметр 3 мм.
     
     2.6.1.1. Вода, клубни картофеля, зерно и солома.
     
     Носитель Газохром Q размер частиц 0,12-0,16 мм, неподвижная фаза 5% ОV-210.
     
     Фипронил.
     
     Температура испарителя - 250 °С, термостата колонки - 210 °С, детектора - 340 °С.
     
     Газовый режим: азот- 40 мл/мин.
     
     Абсолютное время удерживания фипронила - 8 мин 58 с.
     
     Линейность детектирования сохраняется в пределах 0,025-0,5 нг.
     
     Фипронил-сульфон.
     
     Температура испарителя 250 °С, термостата колонки 230 °С, детектора - 340 °С.
     
     Абсолютное время удерживания фипронил-сульфона - 9 мин 56 с.
     
     Линейность детектирования сохраняется в пределах 0,05-0,5 нг.
     
     2.6.1.2. Почва.
     
     Носитель Хромосорб W-HD размер частиц 80-100 меш, неподвижная фаза 3% OV-210.
     
     Фипронил.
     
     Температура испарителя - 250 °С, термостата колонки 210 °С, детектора - 340 °С.
     
     Газовый режим: азот - 40 мл/мин.
     
     Абсолютное время удерживания фипронила - 3 мин 50 с.
     
     Линейность детектирования сохраняется в пределах 0,025-0,5 нг.
     
     Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют среднюю высоту пика.
     
     Образцы, дающие пики большие чем стандартный раствор с концентрациями фипронила и фипронил-сульфона 0,1 мкг/мл соответственно, разбавляют.
     
     Альтернативная фаза: 5% OV-17 на Инертоне-супер, длина колонки 3 м. Температура термостата колонки - 230 °С, детектора - 340 °С, испарителя - 280 °С. Скорость газа-носителя (азот) - 40 мл/мин.
     
     Время удерживания фипронила - 8 мин 20 с, фипронил-сульфона -10 мин 18 с.
     

2.6.2. Обработка результатов анализов

     
     Содержание фипронила и/или фипронил-сульфона в пробах воды, почвы, клубнях картофеля, зерна и соломы рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:
     

,

где  - содержание фипронила и/или фипронил-сульфона в пробе, мг/кг;

      - высота пика образца, мм;
     
      - высота пика стандарта, мм;
     
      - концентрация стандартного раствора, мкг/мл;
     
      - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования (мл);
     
      - масса или объем анализируемого образца, г или мл.
     
      - содержание фипронила и/или фипронил-сульфона в аналитическом стандарте.
     
     

3. Требования техники безопасности

     
     Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами.
     
     

4. Разработчики

     
     Калинин В.А., Довгилевич Е.В., Калинина Т.С., Довгилевич А. В.
     
     Московская сельскохозяйственная академия им. К.А.Тимирязева. Учебно-научный консультационный центр "Агроэкология пестицидов и агрохимикатов", 127550, Москва, Тимирязевская ул., д.53, стр.1.
     
     Телефон/факс: 976-37-68 / 976-43-26.
     
     
     
Текст документа сверен по:
официальное издание
Определение остаточных количеств пестицидов
в пищевых продуктах, сельскохозяйственном сырье
и объектах окружающей среды: Сб. методических указаний.
Выпуск 3. Часть 4. МУК 4.1.1399-4.1.1403-03. -
М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии
Роспотребнадзора, 2006