МУК 4.1.0.358-96

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Фотометрическое измерение концентраций глюкозооксидазы
в воздухе рабочей зоны

    
Дата введения: с момента утверждения

    
    
    РАЗРАБОТАНЫ Киевским госуниверситетом, Украина.
         
    УТВЕРЖДЕНЫ и.о. Председателя Госкомсанэпиднадзора России - заместителем Главного государственного санитарного врача Российской Федерации Г.Г.Онищенко 8 июня 1996 г.

    Ферментный препарат глюкозооксидазы
         

    Глюкозооксидаза представляет собой желтый кристаллический порошок. Оптимальные условия проявления ферментативной активности: Т - 30-35 °С; рН - 5,8-6,0. Хорошо растворим в воде.
    
    В воздухе находится в виде аэрозоля.
    
    Является малоопасным веществом, обладает умеренным кумулятивным и слабым раздражающим действием.
    
    ПДК в воздухе - 2,0 мг/м.
    
    

Характеристика метода

    Метод основан на реакции взаимодействия остаточных количеств пероксида водорода (после воздействия фермента на глюкозу) с молибдатом аммония и последующим фотометрическим измерением окрашенного продукта реакции при длине волны =415 нм. Отбор проб проводят с концентрированием на фильтр.
    
    Нижний предел измерения в анализируемом объеме - 0,5 мкг.
    
    Нижний предел измерения в воздухе - 0,2 мг/м (при отборе 2,5 л воздуха).
    
    Диапазон измеряемых концентраций от 0,2 до 20 мг/м.
    
    Измерению мешают: неорганические вещества, содержащие фосфор, а также азид, гидроксиламин, цианистый водород.
    
    Суммарная погрешность измерения не превышает ±10%.
    
    Время выполнения измерения, включая отбор проб - 50 мин.
    
    

Приборы, аппаратура, посуда

Реактивы, растворы, материалы

    Стандартный раствор глюкозооксидазы. 10 мг каждого стандартного образца препарата с различной активностью растворяют в 100 мл дистиллированной воды. При отсутствии набора стандартов глюкозооксидазы различной активности стандартные растворы соответствующей активности готовят из раствора фермента в 1000 единиц активности, разводя этот раствор в 200; 40; 20; 10; 5; 2,5; 2,0 раза. Для анализа берут по 0,1 мл каждого раствора, что соответствует 0,5; 2,5; 5,0; 10; 20; 40 и 50 ед. активности.
    
    Натрий-ацетатный буферный раствор готовят смешиванием 0,5 мл 1 н уксусной кислоты и 9,5 мл ацетата натрия - 1 г в 100 мл.
    

Отбор проб воздуха

    Воздух с объемным расходом 1 л/мин аспирируют через фильтр "синяя лента", закрепленный в фильтродержателе. Для измерения 1/2 ПДК достаточно отобрать 2,5 л воздуха.
    
    Пробы могут сохраняться в течение 7 дней в холодильнике.
    
    

Подготовка к измерению

    Градуировочные растворы (устойчивы 2 часа) готовят согласно таблице.
    
    

Таблица

Шкала градуировочных растворов

    
    
    Для построения градуировочного графика исходные растворы смешивают и прогревают 1 мин при 30  °С, затем добавляют 1 мл 33%-ного раствора глюкозы и инкубируют 3-5 мин при 30 °С (рН 5,8). Реакцию останавливают внесением 1,0 мл 10 н серной кислоты, затем добавляют 1,0 мл 0,02 М раствора молибдата аммония. После каждого добавления растворы перемешивают. Через 20 мин измеряют оптическую плотность на фотоэлектроколориметре при длине волны 415 нм. Измерение оптической плотности растворов проводят в кюветах с толщиной поглощающего слоя 10 мм по отношению к раствору сравнения не содержащего глюкозооксидазу.
    
    Строят градуировочный график: на ось ординат наносят значения оптических плотностей градуировочных растворов, на ось абсцисс - соответствующие им концентрации препарата (в мкг) с известной активностью.
    
    Проверку градуировочного графика проводят 1 раз в месяц или в случае использования новой партии реактивов.
    
    

Проведение измерения

    Фильтр с отобранной пробой переносят в бюкс, заливают 5 мл дистиллированной воды и оставляют на 10 мин, периодически перемешивая. Отжимают фильтр стеклянной палочкой, фильтрат переносят в пробирку, доводят объем до 5 мл.
    
    Полученный раствор прогревают при 30 °С в течение 1 мин. Затем добавляют 1 мл 33%-ного раствора глюкозы и инкубируют 3-5 мин при 30 °С (рН 5,8). Останавливают реакцию внесением 1,0 мл 10 н серной кислоты. Затем добавляют 1,0 мл 0,02 М раствора молибдата аммония. После каждого добавления реактива следует хорошо перемешать смесь. Через 20 мин измеряют оптическую плотность полученного анализируемого раствора, по сравнению с контрольным раствором, которым является вытяжка с чистого фильтра, обработанная одновременно и аналогично пробе.
    
    Количественное определение концентрации глюкозооксидазы в анализируемой пробе проводят по предварительно построенному градуировочному графику.
    
    При определении активности глюкозооксидазы в присутствии каталазы, последнюю инактивируют. Для этого к 4,5 см испытуемого комплексного ферментного раствора, содержащего не более 50 ед/см каталазы, прибавляют 0,5 см 1 н раствора муравьиной кислоты (в конечной концентрации 0,1 н) и определяют активность глюкозооксидазы описанным выше методом.
    
    

Расчет концентрации

    Концентрацию вещества () в воздухе (мг/м) вычисляют по формуле:     
    

, где

     - содержание глюкозооксидазы в анализируемом объеме пробы, мкг;
    
     - объем воздуха, отобранного для анализа и приведенного к стандартным условиям, л (см. приложение 1).
    
    
         

Текст документа сверен по:
официальное издание

Измерение концентраций вредных
веществ в воздухе рабочей зоны:
Сборник методических указаний.
МУК 4.1.0.341-4.1.0.405-96. Выпуск 32. -
М.: Федеральный центр Госсанэпиднадзора
Минздрава России, 1999