МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
HА ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЗООКУМАРИНА В ВОЗДУХЕ

    
    
    УТВЕРЖДЕНЫ Заместителем Главного государственного санитарного врача СССР А.И.Заиченко 18 марта 1981 г. N 2319-81
    
    

    
    
    3-(-Ацетонилбензил)-4-оксикумарин представляет собой желтовато-сероватый порошок с едва уловимым характерным запахом с т.пл. 161 °C. Растворяется в ацетоне, диоксане, в 5% растворе едкого натра, трудно растворим в 95% спирте, эфире. Не растворяется в бензоле, в воде стоек.
    
    

I. Общая часть

    
    1. Определение основано на хроматографировании зоокумарина в тонком слое силикагеля КСК и образовании окрашенного продукта взаимодествия зоокумарина с диазотированной сульфаниловой кислотой.
    
    2. Предел обнаружения - 10 мкг в анализируемом объеме раствора.
    
    3. Предел обнаружения в воздухе - 0,05 мг/м (расчетный).
    
    4. Погрешность определения ±14%.
    
    5. Диапазон измеряемых концентраций 0,05-0,4 мг/м.
    
    6. Определению не мешают неокумарин и дикумарин.
    
    7. Предельно допустимая концентрация зоокумарина в воздухе 0,1 мг/м.
    
    

II. Реактивы и аппаратура

    
    8. Применяемые реактивы и растворы
    
    Зоокумарин 92%, х.ч.
    
    Стандартный раствор зоокумарина N 1 с содержанием 1000 мкг/мл готовят растворением 100 мг зоокумарина в ацетоне в мерной колбе емкостью 100 мл.
    
    Стандартный раствор N 2, содержащий 100 мкг/мл зоокумарина, готовят соответствующим разбавлением ацетоном стандартного раствора N 1.
    
    Эфир диэтиловый, ГОСТ 6265-52.
    
    Бензол, х.ч., ГОСТ 5955-75.
    
    Спирт этиловый, ГОСТ 5963-67*.
______________
    * На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 51723-2001. - Примечание .
    
    Ацетон перегнанный, ч.д.а., ГОСТ 2603-71.
    
    Натрий азотистокислый, х.ч., ГОСТ 4197-66, 10%-ный раствор.
    
    Натрий углекислый, х.ч., ГОСТ 84-69, 10%-ный раствор.
    
    Кали едкое, х.ч., ГОСТ 4203-65, 10%-ный раствор.
    
    Гипс медицинский, ГОСТ 4766-49.
    
    Кальций хлористый безводный, х.ч., ГОСТ 4234-69.
    
    Соляная кислота, х.ч., ГОСТ 4118-67.
    
    Сульфаниловая кислота, х.ч., ГОСТ 5821-69.
    
    Подвижная фаза: смесь ацетона и бензола в соотношении 2:1 по объему.
    
    Проявляющий реактив - диазотированная сульфаниловая кислота. 25 г сульфаниловой кислоты растворяют в 1…5* мл раствора едкого калия. После охлаждения добавляют 100 мл 10%-ного раствора азотисто-кислого натрия. Затем полученный раствор прибавляют по каплям к охлажденной льдом соляной кислоте (40 мл HCI уд. вес 1,19 в 20 мл воды) так, чтобы температура раствора не поднималась выше 8 °С. Полученную диазотированную сульфаниловую кислоту отфильтровывают, промывают ледяной водой, этанолом, эфиром и сушат на воздухе. Для проявления хроматограммы 0,1 г диазотированной сульфаниловой кислоты растворяют в 20 мл раствора углекислого натрия.
_______________
    * Брак оригинала. - Примечание .
    
    9. Применяемые посуда и приборы.
    
    Аспирационное устройство.
    
    Фильтродержатели.
    
    Фильтры беззольные (синяя лента).
    
    Колбы мерные, ГОСТ 1770-74, емкостью 50-100 мл.
    
    Микропипетки, ГОСТ 20292-74, емкостью 0,1-0,2 мл с оттянутыми концами.
    

    Цилиндры мерные, ГОСТ 1770-74, емкостью 25, 50, 100 мл.
    

    Стаканы химические, емкостью 50-100 мл.
    

    Палочки стеклянные.
    
    Воронки химические диаметром 5-7 см.
    
    Чашки выпарительные фарфоровые, диаметром 4-5 см.
    
    Камера хроматографическая - сосуд цилиндрический, высотой 22 см и диаметром 14,5 см с пришлифованной крышкой.
    
    Пульверизаторы стеклянные.
    
    Сита металлические с диаметром 0,05 мм.
    
    Эксикатор.
    
    Термометр до 100 °С.
    
    Пластинки для хроматографии. Стеклянные пластинки (размер 9x12), промытые содой, хромовой смесью и дистиллированной водой, сушат, протирают спиртом или эфиром и покрывают сорбционной массой.
    
    Для получения сорбционной массы силикагель марки КСК предварительно очищают от примесей. Для этого его заливают на 18-20 часов соляной кислотой (1:1), затем кислоту сливают, силикагель промывают водой и кипятят в течение 2-3 часов с разбавленной азотной кислотой (1:1). Обработанный таким образом силикагель промывают проточной водой, затем дистиллированной до нейтральной реакции промывных вод, сушат в сушильном шкафу при температуре 130 °С в течение 6 часов.
    
    Очищенный силикагель измельчают в ступке и отбирают фракцию 0,05 мм.
    
    10 г просеянного силикагеля и 0,5 г гипса хорошо растирают в фарфоровой ступке, помещают в колбу с притертой пробкой, добавляют 30 мл дистиллированной воды, встряхивают в течение 10-15 минут до образования однородной массы. Полученную массу равномерным слоем наносят на 6 пластинок, которые сушат на воздухе при комнатной температуре в течение 24 часов, а затем активируют нагреванием в сушильном шкафу в течение 3 часов при температуре 100 °С.
    
    

III. Отбор проб воздуха

    
    10. Воздух со скоростью 20 л/мин протягивают через беззольный фильтр, помещенный в фильтродержатель. Для определения 1/2 предельно допустимой концентрации следует отобрать 400 литров воздуха. Срок хранения отобранных проб неограничен.
    
    

IV. Описание определения

    
    11. Фильтр с пробой помещают в стакан, заливают 6 мл ацетона и оставляют на 30 минут, периодически перемешивая их содержимое. По истечении этого времени, фильтр тщательно отжимают стеклянной палочкой. Раствор переносят в выпарительную чашку, ацетон упаривают на воздухе под тягой. Сухой остаток в выпарительной чашке растворяют в 0,2 мл ацетона. Проводят контрольные опыты с чистым фильтром, их обрабатывают так же, как исследуемые образцы. На стартовую линию хроматографической пластинки наносят 0,1 мл ацетонового раствора пробы и 0,1, 0,2, 0,3 мл стандартного раствора зоокумарина, содержащих 10, 20, 30 мкг препарата. Пластинку сушат при комнатной температуре и помещают в камеру для хроматографирования, в которую за 30 минут до хроматографирования наливают подвижный растворитель (ацетон:бензол в отношении 2:1 в таком количестве, чтобы пластинка погружалась в растворитель не более чем на 0,5 см. Сверху камеру закрывают стеклянной крышкой. После того, как растворитель поднимается на 10 см, пластинку вынимают из камеры, отмечают линию фронта и оставляют на несколько минут на воздухе для испарения растворителя. Затем пластинку опрыскивают проявляющим реагентом. Анализируемый препарат проявляется на пластинке в виде желтооранжевых пятен с величиной =0,76±0,1. Окраска пятен устойчива в течение 1 часа.
    
    Количественное определение зоокумарина проводят путем сравнения интенсивности окраски пятен пробы с окраской пятен стандартного раствора.
    
    Концентрацию зоокумарина в мг/м воздуха () вычисляют по формуле:
    

,

где - количество зоокумарина, найденное в анализируемом объеме пробы, мкг;

    
     - объем ацетона, взятый для растворения сухого остатка, мл;
    
     - объем пробы, взятый для хроматографирования, мл;
    
     - объем воздуха в л, взятый для анализа и приведенный к стандартным условиям по формуле (см. приложение 1).
    
    
    
Текст документа сверен по:
/ Министерство здравоохранения СССР.
Методические указания по определению
вредных веществ в воздухе. Выпуск XVII. - М., 1981