МУК 4.1.881-99  

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
по измерению концентраций N-ацетил-L-глутаминовой кислоты
в воздухе рабочей зоны методом тонкослойной хроматографии

    
    
Дата введения: с момента утверждения

    УТВЕРЖДЕНЫ Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко 30.12.1999 г.
    
    

         
    N-ацетил-L-глутаминовая кислота (АГК) - белый или почти белый кристаллический порошок без запаха, с температурой плавления 193-198 °С. Растворим в воде, умеренно растворим в спирте 95%, практически нерастворим в эфире.
    
    В воздухе находится в виде аэрозоля.
    
    Обладает общетоксическим действием.
    
    ПДК в воздухе 2,0 мг/м.
    
    

Характеристика метода

    
    Метод основан на хроматографировании вещества в тонком слое на пластинках Силуфол с последующим обнаружением хроматограмм раствором о-толидина и денситометрировании окрашенных зон при длине волны 513 нм.
    
    Отбор проб проводят с концентрированием на фильтр.
    
    Нижний предел измерения содержания вещества в анализируемом объеме 2,0 мкг.
    
    Нижний предел измерения вещества в воздухе 1,0 мг/м (при отборе 20,0 л воздуха).
    
    Диапазон измеряемых концентраций в воздухе от 1,0 до 10,0 мг/м.
    
    Определению не мешают добезилат кальция, анестезин, аммиак.
    
    Суммарная погрешность измерения не превышает ±20%.
    
    Время выполнения измерения 2 часа, включая отбор проб.
    
    

Приборы, аппаратура, посуда

    
    Спектрофотометр Спекорд М-40 с приставкой для измерения отражения с фотометрическим шаром, денситометр БИАН-170.
    
    Аспирационное устройство.
    
    Фильтродержатели.
    
    Хроматографическая камера для ТСХ размером 10x20 см, ГОСТ 23932-79Е.
    
    Пластинки для тонкослойной хроматографии Силуфол УФ 254.
    
    Хроматографическая камера для ТСХ, ГОСТ 23932-79.
    
    Стаканы химические, вместимостью 50 мл, ГОСТ 19908-80.
    
    Вакуумная установка.
    
    Колбы грушевидные, вместимостью 25 мл, ГОСТ 23932-79.
    
    Колбы мерные, вместимостью 25 и 100 мл, ГОСТ 1770-74.
    
    Пипетки, вместимостью 1, 2, 5 и 10 мл, ГОСТ 20292-74*.
________________
    * Действуют ГОСТ 29169-91, ГОСТ 29227-91-ГОСТ 29229-91, ГОСТ 29251-91-ГОСТ 29253-91. - Примечание изготовителя базы данных.
         
    Эксикатор с пришлифованной крышкой, ГОСТ 6371-73.
    
    Сушильный шкаф.

Реактивы, растворы, материалы

    
    N-Ацетил-L-глутаминовая кислота, фармакопейная.
    
    Этиловый спирт, ГОСТ 5963-67*.
_______________
    * Действует ГОСТ Р 51723-2001. - Примечание изготовителя базы данных.
         
    Бутиловый спирт, ГОСТ 6006-78.
    
    Кислота уксусная ледяная, ГОСТ 61-75.
    
    Кислота соляная, х.ч. ГОСТ 3118-77, 10% раствор.
    
    Калий иодистый, ч.д.а., ГОСТ 4232-74
    
    O-толидин, ТУ 6-09-11-788-764
    
    Калий марганцовокислый, ГОСТ 20490-75, х.ч.; 1,5% раствор.
    
    Калий иодистый, ГОСТ 4232-74, ч.д.а.
    
    Подвижный растворитель: н-бутиловый спирт - ледяная уксусная кислота - вода (40:15:10 мл).
         

Проявляющий реактив

    
    1. Получение паров хлора. На дно эксикатора, вместимостью 1,5 л наливают 50 мл 1,5% раствора калия перманганата и 50 мл 10% раствора соляной кислоты и осторожно перемешивают. Внутрь эксикатора кладут фарфоровую вкладку и закрывают пришлифованной крышкой. Смесь готовят за 60 мин до определения. Эксикатор должен находиться в вытяжном шкафу.
    
    2. Раствор о-толидина. 160 мг о-толидина растворяют в 30 мл ледяной уксусной кислоты, доводят объем до 500 мл дистиллированной водой и добавляют 1,0 г иодистого калия. Хранят в посуде темного стекла. Реактив устойчив в течение 2 недель.
    
    Стандартный раствор N 1 с концентрацией 500 мкг/мл готовят растворением 0,0500 г вещества в 40% растворе этанола в мерной колбе вместимостью 100 мл. Раствор устойчив в течение недели при хранении в холодильнике.
    
    Стандартные растворы, с концентрацией 20-40-80-120-200 мкг/мл вещества, готовят соответствующим разбавлением 40% раствором этанола стандартного раствора N 1. Растворы устойчивы в течение недели при хранении в холодильнике.
    
    Фильтры АФА-ВП-10, ТУ 95-743-80.
    
    

Отбор пробы воздуха

    
    Воздух с объемным расходом 10 л/мин аспирируют через фильтр АФА-ВП-10. Для измерения 1/2ПДК следует отобрать 20 л воздуха. Срок хранения проб 7 суток.
    
    

Подготовка к измерению

    
    Фильтр с отобранной пробой переносят в химический стакан, объем доводят 40% этанолом до 6 мл и оставляют на 15 мин, периодически помешивая стеклянной палочкой для лучшего растворения вещества. Степень десорбции с фильтра 95%. Полученный раствор сливают в грушевидную колбу и упаривают досуха под вакуумом при температуре 60-70 °С. Сухой остаток растворяют в 1,0 мл 40% этанола и используют полученный раствор для анализа.
    
    На линию старта пластинки Силуфол (от края 1,5 см) наносят с помощью микропипетки по 0,1 мл растворов пробы и стандартных растворов с концентрацией от 20 до 200 мкг (размер пятна не должен превышать 0,5 см). Пластинку высушивают на воздухе в течение 3 мин, помещают в камеру для хроматографирования с системой растворителей н-бутиловый спирт - ледяная уксусная кислота - вода (40:15:10 мл) и хроматографируют восходящим методом. После того как фронт растворителя пройдет до конца пластинки, ее вынимают из камеры и подсушивают на воздухе 20 мин. Затем пластинку обрабатывают парами воды (держат 2 мин над кипящей водяной баней) и переносят в камеру с парами хлора, где выдерживают 20 мин. Для удаления паров хлора пластинку помещают под фен и обрабатывают теплым воздухом 2 мин, затем орошают раствором о-толидина и высушивают феном (все операции осуществляют только в вытяжном шкафу).
    
    АГК проявляется в виде темно-синего пятна с величиной =0,76±0,02. Окраска пятен устойчива в течение суток.
    
    Количественное измерение содержания АГК в пробе проводят путем измерения пятен проб и стандартов с помощью планиметра или денситометра.
    
    Интенсивность окраски пятен вещества измеряют на спектрофотометре Спекорд М-40 с приставкой для отражения с фотометрическим шаром при длине волны 513 нм по отношению к фону. В качестве фона используется участок исследуемой пластинки без вещества. Для каждой концентрации измеряют отражение () в %. Оптическая плотность () и отражение () связаны между собой соотношением:     

где - выражено в %, тогда

или

    По средним результатам из пяти определений строят градуировочный график: на ось ординат наносят значение оптических плотностей градуировочных хроматограмм, на ось абсцисс - соответствующее им количество вещества в мкг в градуировочном растворе.
    
    При использовании планиметра количество вещества "" (в мкг) в анализируемом объеме пробы находят по формуле:
              

,

где - содержание вещества на пятне стандарта, мкг;
                    
     - площадь пятна пробы, мм.
           
     - площадь пятна стандарта, мм.
    
    При использовании денситометра содержание вещества в анализируемом объеме находят по градуировочному графику.
    
    

Расчет концентрации

    
    Концентрацию АГК в воздухе "" (мг/м) вычисляют по формуле:
    

,

где - содержание вещества, найденное по градуировочному графику, мкг;
                   
     - общий объем раствора пробы, мл;
                  
     - объем раствора пробы, используемый для анализа, мл;
                 
     - объем воздуха, отобранный для анализа и приведенный к стандартным условиям, л (см. Приложение 1).