МУК 4.1.1230-03  

     
     
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

     
     
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

     
Определение остаточных количеств тралкоксидима
в воде, почве, зерне и соломе зерновыхколосовых культур
методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

     
     
Дата введения 2003-07-01

     
     
     УТВЕРЖДЕНЫ Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации Г.Г.Онищенко 16 марта 2003 г.
          
     

1. Вводная часть

     
     Фирма-производитель: Зенека (Великобритания).
     
     Торговое название: Грасп 80% ВДГ.
     
     Действующее вещество: тралкоксидим [2-1(этоксиимино) пропил]-3-гидрокси-5-мезитилциклогекс-2-енон (номенклатура ИЮПАК).
     
     Структурная формула:

     
     Эмпирическая формула: CHNO.
     
     Молекулярная масса: 329.
     
     Белый порошок без запаха.
     
     Температура плавления: 106 °С.
     
     Давление паров (20 °С): 4х10 Па.
     
     Коэффициент распределения н-октанол/вода (20 °С): 2,1.
     

     
     Растворимость в органических растворителях (г/л) (24 °С):
     

     
     Краткая токсикологическая характеристика. Острая пероральная токсичность для крыс LD=934-1324 мг/кг; острая дермальная токсичность для крыс LD>2000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность для крыс LC=3,5 мг/л воздуха.
     
     В России установлены следующие гигиенические нормативы:
     
     ПДК в воде - 0,008 мг/дм;
     
     ОДК в почве - 0,06 мг/кг;
     
     МДУ в зерне хлебных злаков - 0,02 мг/кг.
     
     Область применения. Грасп 80% в.д.г. - послевсходовый селективный системный гербицид для борьбы с сорняками в посевах пшеницы и ячменя.
          
     

2. Методика определения остаточных количеств тралкоксидима в воде,
почве, зерне и соломе зерновых колосовых культур
методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип методики  

     
     Методика основана на определении тралкоксидима методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором после экстракции вещества из воды хлороформом, из почвы и растительного материала ацетонитрилом, очистки экстрактов перераспределением в системе вода-хлороформ и на концентрирующих патронах-колонках Диапак-диол и Диапак-амин. Идентификация тралкоксидима проводится по времени удерживания, а количественное определение - методом абсолютной калибровки.
     

2.1.2. Избирательность метода  

     
     Методика специфична в присутствии пестицидов, применяемых на зерновых культурах.
     

2.1.3. Метрологическая характеристика метода  

     
     Метрологическая характеристика метода представлена в табл.1.
     
     

Таблица 1

     
Метрологические и статистические показатели (=0,95, =20)

     
     
2.2. Реактивы, растворы, материалы  

2.3. Приборы, аппаратура, посуда  

     
2.4. Отбор проб  

     
     Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79). Отобранные пробы зерна и соломы подсушивают до стандартной влажности и хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре при комнатной температуре. Для длительного хранения пробы почвы подсушивают при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут храниться в течение года. Пробы воды хранят при температуре не выше 4 °С в течение 2 дней, при температуре -18 °С в течение месяца. Перед анализом зерно и солому размалывают на мельнице, почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм.
     

2.5. Подготовка к определению  

     
2.5.1. Подготовка и очистка растворителей  

     
     Гексан сушат над хлоридом кальция, затем перегоняют над пентоксидом фосфора. Диэтиловый эфир сушат двумя порциями хлорида кальция, периодически встряхивая, затем перегоняют над хлоридом кальция.
     

2.5.2. Приготовление стандартных растворов  

     
     Взвешивают 100 мг тралкоксидима и растворяют его в ацетонитриле в мерной колбе на 100 мл, получая стандартный раствор N 1 с концентрацией тралкоксидима 1 мг/мл. Берут 1 мл этого раствора в мерную колбу на 100 мл и доводят до метки ацетонитрилом, получая стандартный раствор N 2. Стандартные растворы N 1 и 2 можно хранить в холодильнике в течение 3 месяцев.
     
     Рабочие стандартные растворы тралкоксидима концентрацией 2,5; 1,25; 0,5; 0,25; 0,1; 0,05 мкг/мл готовят из стандартного раствора N 2 методом последовательного разведения ацетонитрилом. Их используют для построения калибровочного графика и фортификации образцов (внесения в образцы для оценки полноты извлечения тралкоксидима). Эти стандартные растворы можно использовать в течение 7 дней при хранении в холодильнике.
     

2.5.3. Приготовление подвижной фазы   

     
     Для ВЭЖХ анализа тралкоксидима используют подвижную фазу, содержащую 80% ацетонитрила и 20% воды (по объему). Перед анализом фазу дегазируют, пропуская через нее газообразный гелий со скоростью 20 мл/мин в течение 5 мин и помещая сосуд с фазой в ультразвуковую ванну на 1 мин.
     

2.5.4. Построение калибровочного графика  

     
     Для построения калибровочного графика вводят в инжектор хроматографа последовательно 5 раз по 100 мкл каждого рабочего стандартного раствора, измеряют высоты или площади пиков, рассчитывают среднее значение высоты или их площади для каждой концентрации и строят график зависимости высоты или площади пика от концентрации тралкоксидима.
     

2.5.5. Кондиционирование патронов-колонок Диапак-диол и Диапак-амин  

     
     Патрон устанавливают на алонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 мл, который используют как емкость для элюента. Патрон промывают два раза 3 мл гексана.
     
     Промывку проводят под вакуумом непосредственно перед очисткой экстрактов образцов со скоростью не более 2 мл/мин, не допуская высыхания поверхности патрона.
     

2.5.6. Проверка хроматографического поведения тралкоксидима на концентрирующих патронах-колонках Диапак  

     
     2.5.6.1. Диапак-диол. Приливают в круглодонную колбу на 10 мл 1 мл стандартного раствора тралкоксидима в гексане концентрацией 1 мкг/мл, добавляют 3 мл смеси гексан-диэтиловый эфир (90:10) и наносят на кондиционированный патрон. Обмывают колбу 6 мл этой же смеси и также наносят на патрон. Элюирование проводят под вакуумом со скоростью не более 1 мл/мин. Элюат собирают в круглодонную испарительную колбу, упаривают его, остаток растворяют в 1 мл подвижной фазы для ВЭЖХ и анализируют на содержание тралкоксидима по п.2.7, которое должно составлять около 100% от внесенного количества.
     
     2.5.6.2. Диапак-амин. Наносят на кондиционированный патрон 1 мл стандартного раствора тралкоксидима в гексане концентрацией 1 мкг/мл и элюируют его 10 мл ацетона со скоростью 1 мл/мин. Элюат собирают в испарительную колбу, упаривают, остаток растворяют в 1 мл подвижной фазы для ВЭЖХ и анализируют на содержание тралкоксидима по п.2.7, которое должно составлять около 100% от внесенного количества.
     

2.6. Описание методики определения   

     
2.6.1. Вода  

     
     Образец предварительно отфильтрованной воды объемом 100 мл переносят в делительную воронку на 500 мл, добавляют 30 мл 0,01 М раствора тетрабората натрия и трижды экстрагируют хлороформом порциями по 30 мл, встряхивая каждый раз воронку в течение 2 мин. После полного разделения слоев нижнюю органическую фазу через воронку с прокаленным серно-кислым натрием сливают в испарительную круглодонную колбу. Объединенный хлороформовый экстракт упаривают на вакуумном роторном испарителе при 40 °С до объема примерно 1 мл и остатки раствора высушивают током азота. Сухой остаток растворяют в 5 мл подвижной фазы для ВЭЖХ и анализируют на содержание тралкоксидима по п.2.7.
     

2.6.2. Почва   

     
     2.6.2.1. Экстракция и предварительная очистка. В коническую плоскодонную колбу на 100 мл помещают навеску почвы 20 г, приливают 40 мл ацетонитрила и встряхивают в течение 45 мин. Экстракт фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр "синяя лента". К остатку почвы в колбе добавляют еще 40 мл ацетонитрила и процедуру экстракции повторяют. Почву на фильтре промывают 20 мл ацетонитрила. Из объединенного экстракта отбирают аликвоту 50 мл, эквивалентную 10 г почвы, и добавляют 15 мл деионизированной воды и раствор упаривают на вакуумном роторном испарителе при 40 °С до водного остатка. Водный остаток количественно переносят в делительную воронку на 100 мл, добавляют 20 мл хлороформа и встряхивают воронку в течение 1 мин. Нижнюю органическую фазу через воронку с прокаленным серно-кислым натрием сливают в испарительную круглодонную колбу. Процедуру экстракции хлороформом повторяют еще два раза. Объединенный хлороформовый экстракт упаривают на вакуумном роторном испарителе при 40 °С примерно до 1 мл и его остатки высушивают током азота. Дальнейшую очистку проводят по п.2.6.2.2.
     
     2.6.2.2. Очистка экстрактов на патронах-колонках Диапак. Сухой остаток растворяют в 4 мл смеси гексан-диэтиловый эфир (90:10) и наносят на кондиционированный патрон Диапак-диол. Затем 6 мл этой же смеси обмывают колбу и также наносят на патрон. Элюат собирают, наносят на кондиционированный патрон Диапак-амин и после пропускания через патрон отбрасывают. Тралкоксидим элюируют из патрона Диапак-амин 10 мл ацетона в круглодонную испарительную колбу. Ацетоновый раствор упаривают на вакуумном роторном испарителе при 40 °С до объема примерно 1 мл, которые высушивают током азота. Сухой остаток растворяют в 1 мл подвижной фазы для ВЭЖХ и анализируют по п.2.7.
     
     Нанесение растворов на патроны и элюирование проводят под вакуумом со скоростью не более 1 мл/мин.
     

2.6.3. Зерно и солома   

     
     2.6.3.1. Экстракция и предварительная очистка. В коническую колбу на 250 мл помещают измельченный образец зерна (10 г) или соломы (5 г). Приливают 50 мл (для соломы - 80 мл) ацетонитрила и встряхивают в течение 30 мин. Экстракт фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр "синяя лента". Процедуру экстракции повторяют еще раз и фильтруют экстракт через тот же фильтр. Растительные остатки на фильтре промывают 20 мл ацетонитрила. Экстракты объединяют, берут аликвоту - 60 мл для зерна и 90 мл для соломы, добавляют к ним 15 мл деионизированной воды и упаривают на вакуумном роторном испарителе при 40 °С до водного остатка. Далее остаток подвергают центрифугированию (2 °С, 20000 об./мин, 15 мин) и фильтруют через бумажный фильтр "синяя лента" в делительную воронку на 100 мл, добавляют 20 мл хлороформа и встряхивают воронку в течение 1 мин. Нижнюю органическую фазу через воронку с прокаленным серно-кислым натрием сливают в испарительную круглодонную колбу. Процедуру экстракции хлороформом повторяют еще два раза. Объединенный хлороформовый экстракт упаривают на вакуумном роторном испарителе при 40 °С примерно до 1 мл и его остатки высушивают током азота. Дальнейшую очистку проводят по п.2.6.2.2, а анализ на хроматографе по п.2.7.
     

2.7. Условия хроматографирования  

     
2.8. Обработка результатов анализа   

     
     Содержание тралкоксидима рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:
     

,

     
где  - содержание тралкоксидима в анализируемом объекте (мг/кг, мг/л);
     
      - высота пика образца (мм);
     
      - высота пика стандарта (мм);
     
      - концентрация стандартного раствора тралкоксидима (мкг/мл);
     
      - объем экстракта (мл);
     
      - масса или объем анализируемого образца (г, мл);
     
      - содержание тралкоксидима в аналитическом стандарте (%).
          
     

3. Требования техники безопасности

     
     Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями и токсичными веществами.
          
     

4. Контроль погрешности измерений

     
     Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95 "ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа".
          
     

5. Разработчики

     
     Калинин В.А., профессор, канд. с-х. наук, Горбатов В.С., вед. научн. сотр., канд. биол. наук, Бондарева Т.А., научн. сотр. Московская сельскохозяйственная академия им. К.А.Тимирязева. 127550, Москва, Тимирязевская ул., д.53/1, УНКЦ "Агроэкология пестицидов и агрохимикатов". Телефон/факс: 976-43-26.
     
     
     
Текст документа сверен по:
официальное издание
Определение остаточных количеств
пестицидов в пищевых продуктах,
сельскохозяйственном сырье и объектах
окружающей среды: Сборник методических указаний.
Выпуск 2. Часть 5. -
М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии
Роспотребнадзора, 2006