МУК 4.1.763-99

     
     
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

     
Газохроматографический метод количественного
определения ацетона в биосредах (моча)

     
     
Дата введения 1999-09-06

     
     УТВЕРЖДЕНЫ Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко 6 июля 1999 г.
     
     
     Методические указания разработаны в соответствии с требованиями ГОСТа 8.563-96 "Методики выполнения измерений" и ГОСТа Р 1.5-92 "Общие требования к построению, изложению, оформлению и содержанию стандартов". Методика анализа метрологически аттестована и обеспечивает определение ацетона в диапазоне концентраций 0,01-0,20 мкг/см.
     

     Диметилкетон (ацетон) - бесцветная жидкость со специфическим запахом.  - 56,24 °С,  - минус 95,35 °С. Ацетон растворим в воде и органических растворителях. Ацетон - наркотик, относится к 4 классу опасности.
     
     Общая погрешность метода определения ацетона - 16,5%.
     
     

Сущность метода

     
     Методика основана на предварительном выделении ацетона из биологического материала путем нагревания объекта и последующего газохроматографического анализа парогазовой фазы.
     
     Измерение концентрации ацетона выполняют методом газовой хроматографии с пламенно-ионизационным детектированием.
     
     Определению не мешают этанол, бензол и др. ароматические углеводороды, метилэтилкетон.
     
     Длительность анализа - 10 мин.
     
     

Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы

     
     При выполнении применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы. Допускается применение других типов средств измерений, вспомогательного оборудования и химреактивов с аналогичными метрологическими характеристиками.
     

     
Требования к безопасности

     
     Помещение для проведения измерений должно соответствовать требованиям "Пожарных норм проектирования зданий и сооружений" (СНиП ПА-5-700) и "Санитарных норм проектирования промышленных предприятий" (СН-245-71) и СНиП-74.
     
     При выполнении работ должны быть соблюдены меры противопожарной безопасности в соответствии с требованиями ГОСТа 12.1.004-85 и правила техники безопасности в соответствии с ГОСТом 12.1.007-76.
     
     При работе необходимо соблюдать "Правила по технике безопасности и производственной санитарии при работе в химических лабораториях", утверждены МЗ СССР 20.12.82 (М., 1981), и "Правила устройства и безопасной эксплуатации сосудов, работающих под давлением", утверждены Госгортехнадзором СССР 27.11.87 (М.: Недра, 1989).
     
     При работе с реактивом соблюдают требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТу 12.1.005-88.
     
     При выполнении измерений с использованием газового хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТом 12.1.019-79 и инструкции по эксплуатации прибора.
     
     

Требования к квалификации оператора

     
     К выполнению измерений допускаются лица, прошедшие специализацию по работе на газовом хроматографе.
     
     

Условия измерений

     
     При проведении процессов приготовления растворов и подготовки проб к анализу соблюдают следующие условия:
     
      температура воздуха - (20±5) °С;
     
      атмосферное давление 630-800 мм рт.ст.;
     
      влажность воздуха - не более 80% при температуре 25 °С.
     
     Выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендуемых технической документацией по прибору.
     
     

Подготовка к выполнению измерений

     
     Перед выполнением измерений проводят следующие работы: подготовка хроматографической колонки, приготовление стандартных смесей, установление градуировочной характеристики.
     

Приготовление стандартных смесей

     
     Для построения градуировочного графика собирают мочу, не содержащую определяемый компонент, и готовят серию рабочих стандартных растворов. Исходный стандартный раствор для градуировки: в колбу вместимостью 1000 см вводят микрошприцем 5 мм ацетона. Весовое содержание ацетона в исходной стандартной смеси составляет (с учетом плотности ацетона и содержания основного вещества) - 3,95 мкг/см. Срок хранения - 3 ч.
     

Подготовка хроматографической колонки

     
     Хроматографическую колонку перед заполнением неподвижной фазой промывают дистиллированной водой, ацетоном, высушивают в токе инертного газа. Заполнение хроматографической колонки насадкой проводят под вакуумом. Концы колонки закрывают стекловатой и, не подключая к детектору, кондиционируют в токе газа-носителя (гелия) с расходом 30 см/мин при температуре 200 °С в течение 18 ч. После охлаждения колонку подключают к детектору, записывают нулевую линию в рабочем режиме. При отсутствии мешающих влияний колонка готова к работе.
     

Установление градуировочной характеристики

     
     Градуировочную характеристику устанавливают методом абсолютной градуировки на градуировочных смесях ацетона. Она выражает зависимость площади пика на хроматограмме (мм) от массы ацетона (мкг) и строится по 5 сериям стандартных растворов для градуировки. Каждую серию, состоящую из 5 стандартных растворов, готовят в мерных колбах вместимостью 100 см. Для этого в каждую колбу вносят исходное вещество в соответствии с таблицей. Срок хранения - 3 ч.
     
     

Таблица 1

     
Стандартные смеси для установления градуировочной характеристики
при определении концентрации ацетона (фрагмент шкалы)

     
     
     В хроматографическую колонку через испаритель вводят по 5 см парогазовой пробы каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях:
     

     На полученной хроматограмме определяют площади пиков ацетона и по средним результатам из 5 серий строят градуировочную характеристику. Градуировку проверяют 1 раз в неделю и при смене партии реактивов.
     

Отбор проб

     
     Отбор проб мочи в объеме 100 см производится в тщательно вымытый стеклянный сосуд с притертой пробкой. Анализ мочи проводить сразу или хранить в холодильнике не более 12 ч после отбора пробы.
     
     

Выполнение измерений

     
     Во флакон из-под пенициллина помещают 5 см исследуемой биопробы. Флакон закрывают резиновой пробкой и ставят в металлический цилиндр с просверленными в стенках отверстиями и навинчивающейся крышкой. Цилиндр с флаконом погружают на 2/3 высоты в кипящую водяную баню (прилож. А). По истечении 5 мин отбирают шприцем из флакона 5 см парогазовой фазы и вводят ее в колонку хроматографа.
     
     

Вычисление результатов измерений

     
     На хроматограмме рассчитывают площадь пика и по градуировочной характеристике определяют концентрацию ацетона в биопробе.
     
     Результат измерения содержания компонента в биопробе определяется путем трехкратного замера с учетом среднего квадратичного отклонения.
     
     Результат анализа представляют в виде:
     

,

где  - среднее значение замеренных концентраций, мкг/см.
     
     

Внутренний оперативный контроль

     
     Внутренний оперативный контроль качества результатов контрольного химического анализа (сходимость, воспроизводимость, точность) осуществляют с целью получения оперативной информации о качестве анализов и принятия при необходимости оперативных мер по его повышению (МИ 2335-95).
     

10.1. Контроль сходимости выходных сигналов

     
     Контролируемым параметром является относительный размах выходных сигналов хроматографа при вводах трех параллельных проб градуировочного раствора. Контроль осуществляется при проведении градуировки, при периодическом контроле градуировочных коэффициентов, а также при выполнении измерений.
     
     Результат контроля признается положительным при выполнении условия:

%,

     
где  - площадь пика, мм;
     
      - среднее арифметическое значение площади пиков при вводе 3 параллельных проб градуировочного раствора.
     

Оперативный контроль точности

     
     Периодичность контроля погрешности измерений зависит от количества рабочих измерений за контролируемый период и определяется планами контроля.
     
     Образцами для контроля являются представительные пробы биосред, к которым делаются добавки в виде раствора. Отбирают 2 пробы и к одной из них делают добавку в виде раствора таким образом, чтобы их содержание увеличилось по сравнению с исходным на 50-150%. Каждую пробу анализируют в точном соответствии с прописью методики и получают результат анализа исходной рабочей пробы  и рабочей пробы с добавкой . Результаты анализа исходной рабочей пробы  и рабочей пробы с добавкой  получают не по возможности, а в одинаковых условиях, т.е. их получает один аналитик с использованием одного набора мерной посуды, одной партии реактивов и т.д.
     
     Результаты контроля признаются удовлетворительными, если выполняется условие:
     

,

     
где  - добавка к пробе в виде раствора с концентрацией, мкг/см;
     
      - норматив оперативного контроля погрешности, мкг/см.
     
     При внешнем контроле (=0,95) принимают
     

,

     
где  и  - характеристики погрешностей для исходной пробы и пробы с добавкой, мкг/см.     

.

          
     При внутрилабораторном контроле (=0,90) принимают, что
     

.

        
     При превышении оперативного контроля погрешности эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, и их устраняют.
     
     
     
Текст документа сверен по:
официальное издание
Определение химических соединений
в биологических средах: Сборник методических
указаний МУК 4.1.763-4.1.779-99. -
М.: Федеральный центр
госсанэпиднадзора Минздрава России, 2000