МУК 4.1.771-99

     
     
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Газохроматографическое определение концентраций
метилового, этилового, изопропилового, пропилового, изобутилового
и бутилового спиртов в моче

     
     
Дата введения 1999-09-06

     
     УТВЕРЖДЕНЫ Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко 6 июля 1999 г.
     
     
     Методические указания разработаны в соответствии с требованиями ГОСТа 8.563-96 "Методики выполнения измерений", ГОСТа Р 1.5-92 "Общие требования к построению, изложению, оформлению и содержанию стандартов". Методика анализа метрологически аттестована и обеспечивает определение метилового, этилового, изопропилового, пропилового, изобутилового и бутилового спиртов в моче в следующих диапазонах:
     

     Метиловый спирт (метанол, древесный спирт) - бесцветная жидкость с характерным запахом. Т - 64,51 °С, Т - минус 97,88 °С. Растворим в воде, этиловом спирте, эфире, ацетоне, бензоле. Сильный, преимущественно нервный и сосудистый яд с резко выраженным кумулятивным эффектом. Типичны поражения зрительного нерва и сетчатки глаза. Пары метилового спирта сильно раздражают оболочки глаз и дыхательных путей. Относится ко 2 классу опасности.
     

     Этиловый спирт (этанол, винный спирт) - бесцветная жидкость с характерным запахом. Т - 78,39 °С, Т - минус 114,15 °С. Смешивается в любых отношениях с водой, спиртами, эфиром, глицерином и другими растворителями. Оказывает наркотическое действие, класс опасности 4.
     

     Изопропиловый спирт (2-пропанол) - бесцветная жидкость с характерным спиртовым запахом. Т - 22,50 °С, Т - минус 89,5 °С. Смешивается в любых отношениях с водой, этиловым спиртом, эфиром; растворим в ацетоне; хорошо растворим в бензоле. Раздражает слизистые оболочки глаз и верхних дыхательных путей. Пары могут повредить сетчатку глаза и зрительный нерв. Относится к 4 классу опасности.
     

     Пропиловый спирт (пропанол) - бесцветная жидкость с характерным спиртовым запахом. Т - 97,2 °С, Т - минус 126,2 °С. Смешивается в любых отношениях с водой, этиловым спиртом, эфиром; растворим в ацетоне; хорошо растворим в бензоле. Пары раздражают слизистые глаз и верхних дыхательных путей. Пропиловый спирт относится к 4 классу опасности.
     

     Бутиловый спирт (1-бутанол) - бесцветная жидкость с характерным запахом. Т - 117,4 °С, Т - минус 89,53 °С. Смешивается в любых отношениях с этиловым спиртом, эфиром; хорошо растворим в ацетоне. Наркотик с раздражающим действием паров на слизистые оболочки глаз и верхних дыхательных путей. Относится ко 2 классу опасности.
     

     Изобутиловый спирт - бесцветная жидкость с характерным запахом. Т - 29 °С, коэффициент распределения масло/вода - 0,44. Смешивается в любых отношениях с этиловым спиртом, эфиром; хорошо растворим в ацетоне. Наркотик с раздражающим действием паров на слизистые оболочки глаз и верхних дыхательных путей. Относится ко 2 классу опасности.
     
     Методика обеспечивает выполнение измерений с суммарной погрешностью результата измерений при доверительной вероятности 0,95:
     

     
Сущность метода

     
     Методика основана на предварительном выделении спиртов из биологического материала путем нагревания объекта в герметичном объеме и последующего газохроматографического анализа равновесной паровой фазы над жидкой пробой.
     
     Измерение концентрации метилового, этилового, пропилового, изопропилового, бутилового и изобутилового спиртов выполняют методом газовой хроматографии с пламенно-ионизационным детектированием.
     
     Нижний предел измерения в объеме пробы:
     

     Определению не мешают ароматические углеводороды, спирты, альдегиды, карбоновые кислоты и другие органические соединения.
     
     Длительность анализа, включая подготовку пробы, - 40 мин.

Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы

     
     При выполнении анализа применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы.
     

Требования к безопасности

     
     Помещение для проведения измерений должно соответствовать требованиям "Пожарных норм проектирования зданий и сооружений" (СНиП ПА-5-700) и "Санитарных норм проектирования промышленных предприятий" (СН-245-71) и СНиП-74.
     
     При выполнении работ должны быть соблюдены меры противопожарной безопасности в соответствии с требованиями ГОСТа 12.1.004-85 и правила техники безопасности в соответствии с ГОСТом 12.1.007-76.
     
     При работе необходимо соблюдать "Правила по технике безопасности и производственной санитарии при работе в химических лабораториях", утверждены МЗ СССР 20.12.82 (М.,1981), и "Правила устройства и безопасной эксплуатации сосудов, работающих под давлением", утверждены Госгортехнадзором СССР 27.11.87 (М.: Недра,1989).
     
     При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТу 12.1.005-88.
     
     При выполнении измерений с использованием газового хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТом 12.1.019-79 и инструкции по эксплуатации прибора.
     
     

Требования к квалификации оператора

     
     К выполнению хроматографических измерений биологических проб допускаются лица, прошедшие обучение работе на жидкостном хроматографе.
     
     

Условия измерений

     
     При подготовке проб к анализу и приготовлении растворов соблюдают следующие условия:
     
      температура воздуха (20±10) °С;
     
      атмосферное давление 630-800 мм рт.ст.;
     
      влажность воздуха не более 80% при температуре 25 °С.
     
     Выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендуемых технической документацией по прибору.
     
     

Подготовка к выполнению измерений

     
     Перед выполнением измерений проводят следующие работы: подготовка хроматографической колонки, приготовление стандартных смесей, установление градуировочной характеристики.
     

Подготовка хроматографической колонки

     
     Хроматографическую колонку перед заполнением неподвижной фазой промывают дистиллированной водой, ацетоном, гексаном, высушивают в токе инертного газа. Заполнение хроматографической колонки насадкой проводят под вакуумом. Концы колонки закрывают стекловатой и, не подключая к детектору, кондиционируют в токе газа-носителя (гелия) с расходом 30 см/мин при температуре 150 °С в течение 18 ч. После охлаждения колонку подключают к детектору, записывают нулевую линию в рабочем режиме. При отсутствии мешающих влияний колонка готова к работе.
     

Приготовление стандартных смесей

     
     Исходный стандартный раствор для градуировки. В колбу на 1000 см вводят микрошприцем по 10 мм метилового, этилового, пропилового, изопропилового, бутилового и изобутилового спиртов и доводят водой до метки. Содержание спиртов в исходной стандартной смеси составляет (с учетом плотности и содержания основного вещества):
     

     Срок хранения исходного стандартного раствора в холодном месте - не более 2 суток.
     

Установление градуировочной характеристики

     
     Градуировочную характеристику устанавливают методом абсолютной градуировки на градуировочных смесях спиртов. Она выражает зависимость площади пика на хроматограмме (мм) от концентрации соответствующего спирта в моче (мкг/см) и строится по 5 сериям стандартных растворов для градуировки. Каждую серию, состоящую из 5 рабочих стандартных растворов, готовят в мерных колбах объемом 50 см. Для этого в каждую колбу вносят исходный раствор в соответствии с таблицей и доводят мочой, не содержащей спирты, до метки. Срок хранения растворов - 8 ч.
     
     

Таблица

     
Стандартные смеси для установления градуировочной характеристики при определении
концентрации метанола, этанола, изопропанола, пропанола, изобутанола
и бутанола в моче (фрагмент шкалы)

     
     
     10 см рабочего стандартного раствора переносят в герметичный сосуд (рис.1, прилож.А), закрывают его навинчивающейся крышкой с инертной прокладкой и добавляют через отверстие в крышке медицинским шприцем 1,0 см 30%-ного раствора хлорида натрия. Затем сосуд термостатируют на водяной бане при температуре 95-96 °С в течение 10 мин. 5 см равновесной паровой фазы вводят в колонку хроматографа и анализируют при следующем режиме работы прибора:
     

     На полученной хроматограмме определяют площади пиков соответствующих спиртов и по средним результатам из 5 серий строят градуировочную характеристику. Градуировку проверяют 1 раз в 3 месяца и при смене партии реактивов.
     

Отбор проб

     
     Для отбора проб мочи используют стеклянную посуду с притертой пробкой. Отбирают 20-30 см мочи и сразу анализируют или хранят в холодильнике не более 48 ч при температуре не выше 4 °С.
     
     

Выполнение измерений

     
     Для анализа 10 см мочи переносят пипеткой в сосуд, закрывают его инертной прокладкой и крышкой с отверстием в центре, добавляют медицинским шприцем (объемом 2,0 см) 1,0 см 30%-ного раствора хлорида натрия и термостатируют сосуд на водяной бане при температуре 95-96 °С в течение 10 мин. Затем отбирают подогретым стеклянным шприцем 5 см равновесной паровой фазы и вводят в колонку хроматографа при вышеуказанном режиме работы прибора.
     
     

Вычисление результатов измерений

     
     Рассчитывают площадь пика соответствующего спирта по формуле:
     

, мм,

где  - высота пика, мм;
     
      - ширина пика на половине высоты, мм.
     
     По градуировочному графику определяют концентрацию соответствующего спирта в моче (мкг/см).
     
     

Внутренний оперативный контроль

     
     Внутренний оперативный контроль качества результатов контрольного химического анализа (сходимость, воспроизводимость, точность) осуществляют с целью получения оперативной информации о качестве анализов и принятия при необходимости оперативных мер по его повышению (МИ 2335-95).
     

Оперативный контроль сходимости

     
     Контролируемым параметром является относительный размах выходных сигналов хроматографа при вводах трех параллельных проб градуировочного раствора. Контроль осуществляется при проведении градуировки, при периодическом контроле градуировочных коэффициентов, а также при выполнении измерений.
     
     Результат контроля признается положительным при выполнении условия:
     

%,

     
где  - площадь пика, мм;
     
      - среднее арифметическое значение площади пиков при вводе 3 параллельных проб градуировочного раствора.
     

Оперативный контроль точности

     
     Периодичность контроля погрешности измерений зависит от количества рабочих измерений за контролируемый период и определяется планами контроля.
     
     Образцами для контроля являются представительные пробы биосред, к которым делаются добавки в виде раствора. Отбирают 2 пробы и к одной из них делают добавку в виде раствора таким образом, чтобы их содержание увеличилось по сравнению с исходным на 50-150%. Каждую пробу анализируют в точном соответствии с прописью методики и получают результат анализа исходной рабочей пробы  и рабочей пробы с добавкой . Результаты анализа исходной рабочей пробы  и рабочей пробы с добавкой  получают не по возможности, а в одинаковых условиях, т.е. их получает один аналитик с использованием одного набора мерной посуды, одной партии реактивов и т.д.
     
     Результаты контроля признаются удовлетворительными, если выполняется условие:
     

,

     
где  - добавка к пробе в виде раствора с концентрацией мкг/см;
     
     - норматив оперативного контроля погрешности, мкг/см.
     
     При внешнем контроле (=0,95) принимают
     

*,

     
где  и  - характеристики погрешностей для исходной пробы и пробы с добавкой, мкг/см.
________________
     * Формула соответствует оригиналу. - Примечание .
     

 и .

     
     При внутрилабораторном контроле (=0,90) принимают, что
     

.

     
     При превышении оперативного контроля погрешности эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, и их устраняют.
     
     
     
Текст документа сверен по:
официальное издание
Определение химических соединений
в биологических средах: Сборник методических
указаний МУК 4.1.763-4.1.779-99. -
М.: Федеральный центр
госсанэпиднадзора Минздрава России, 2000