МУК 4.1.256-96

     
     
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

     

Спектрофотометрическое определение концентраций стрептодеказы
в воздухе рабочей зоны

     
     
Дата введения - с момента утверждения

     
     
     УТВЕРЖДЕНЫ и.о. Председателя Госкомсанэпиднадзора России - заместителем Главного государственного санитарного врача Российской Федерации Г.Г.Онищенко 8 июня 1996 года
     
     

          
      - 100 мол. % звеньев полиглюкина (ПГ);  - 24 мол. % окисленных звеньев ПГ;  - мол. % NH - групп стрептокиназы, модифицированной ПГ.
     
     Белый или с желтоватым оттенком лиофилизированный порошок или пористая масса, уплотненная в таблетку. Легко растворим в воде, растворе натрия хлорида 0,9% изотонического (ГФ, х, стр.756).
     
     В воздухе находится в виде аэрозоля.
     
     Проявляет сенсибилизирующие и аллергические свойства.
     
     ПДК в воздухе - 1 мг/м.
     

Характеристика метода

     
     Методика основана на использовании высокоспецифических антител к стрептодеказе, проведении реакции антиген-антитело с антителами, меченными ферментом-маркером пероксидазой, и спектрофотометрическом тестировании активности пероксидазы при длине волны 492 нм.
     
     Отбор проб проводят с концентрированием на фильтр.
     
     Нижний предел измерения концентрации в анализируемом растворе - 0,03 мкг.
     
     Диапазон изменяемых концентраций - от 0,12 до 1,2 мг/м.
     
     Нижний предел измерения в воздухе - 0,12 мг/м (при отборе 50 л воздуха).
     
     Измерению не мешают белки (бычий сывороточный альбумин, яичный альбумин), ферменты (липаза Pen. solitum, L - аспарагиназа Е. coli).
     
     Суммарная погрешность не превышает ±25%.
     
     Время выполнения измерений, включая отбор проб - 4 ч.
     

Приборы, аппаратура, посуда

     

Реактивы, растворы, материалы

     
     Приготовление 0,1 моль/л фосфатного буферного раствора рН 7,2±0,1. 35,5 г натрия фосфорнокислого двузамещенного растворяют в 1000 мл дистиллированной воды в мерной колбе, вместимостью 1000 мл.
     
     4 г натрия фосфорнокислого однозамещенного растворяют 250 мл воды в мерной колбе, вместимостью 250 мл.
     
     1000 мл раствора натрия фосфорнокислого двузамещенного и 250 мл раствора натрия фосфорнокислого однозамещенного смешивают в стакане, вместимостью 2000 мл.
     
     Раствор хранится в течение 2 месяцев в холодильнике.
     
     Приготовление буфера "А". 1000 мл фосфатного буферного раствора рН 7,2 смешивают с 8,47 г хлористого натрия. Раствор хранят в холодильнике в течение 2 месяцев.
     
     Твин-20 "Серва", ФРГ.
     
     Приготовление буфера "В". К 1000 мл раствора фосфатного буфера рН 7,2±0,1 прибавляют 29,2 г хлористого натрия и 1 мл твина-20. Раствор хранят в холодильнике в течение 2 месяцев.
     
     Приготовление 0,1 моль/л фосфатно-цитратного буферного раствора рН 5,0±0,1. В мерную колбу, вместимостью 1000 мл, вносят 7,3 г лимонной кислоты (моногидрат) и 9,47 г натрия фосфорнокислого однозамещенного безводного и доводят раствор до метки дистиллированной водой при перемешивании. Раствор хранят при температуре - 10 °С в течение 6 месяцев.
     

     
     Приготовление 0,04% раствора о-фенилендиамина. Навеску 10 г о-фенилендиамина растворяют в 24 мл фосфатноцитратного буфера в стакане, вместимостью 50 мл. Раствор готовят непосредственно перед измерением.
     

     
     Приготовление раствора субстратной смеси. К 24 мл раствора о-фенилендиамина прибавляют дозатором, вместимостью 20 мкл, 14 мкл концентрированной перекиси водорода. Смесь готовят непосредственно перед измерениями.
     

     
     Приготовление основного раствора стрептодеказы с концентрацией 0,6 мкг/мл. Точную навеску 25 мг (7,2% белка) стрептодеказы растворяют в 6 мл дистиллированной воды. Массовая концентрация стрептодеказы в полученном растворе составляет 0,30 мг/мл. Из полученного раствора отбирают 1 мл дозатором на 1 мл и вносят в мерную колбу, вместимостью 500 мл. Объем доводят до метки дистиллированной водой.
     
     Используют свежеприготовленный раствор.
     
     Приготовление раствора стрептодеказы с концентрацией 0,12 мкг/мл. 5 мл основного раствора стрептодеказы пипеткой, вместимостью 5 мл, переносят в мерную колбу, вместимостью 25 мл. Объем доводят до метки буфером "А". Используют свежеприготовленный раствор.
     

     
     Приготовление 4М раствора серной кислоты. К 8,5* дистиллированной воды, используя пипетку, вместимостью 1 мл, добавляют 0,5 мл концентрированной серной кислоты. Раствор хранят при комнатной температуре.
_______________
     * Текст соответствует оригиналу. - Примечнаие .     
     

     
     Приготовление раствора антисыворотки. Содержимое флакона с лиофилизированной антисывороткой к стрептодеказе растворяют в 5 мл буфера "В", используя пипетку, вместимостью 5 мл.
     
     Далее из полученного раствора отбирают 0,5 мл дозатором на 1 мл и переносят в мерную колбу, вместимостью 500 мл, доводят объем до метки буфером "В". Раствор готовят непосредственно перед употреблением.
     
     Подготовка сенсибилизированного планшета. Раствор стрептодеказы с концентрацией 0,12 мкг/мл заливают дозатором, вместимостью 0,2 мл по 0,2 мл во все лунки (кроме А1) полистиролового планшета для ИФА. Планшет закрывают крышкой и выдерживают 18 часов в холодильнике. Из лунок выливают раствор стрептодеказы и промывают 4 раза буфером "В" с помощью полуавтоматической промывалки.
     
     Сенсибилизированный таким образом планшет используют в анализе или запаивают в полиэтиленовый мешок и хранят в холодильнике в течение 3 месяцев.
     

     
     Приготовление раствора антивидового конъюгата. Содержимое ампулы с антивидовым конъюгатом растворяют в 20 мл буфера "В", используя пипетку, вместимостью 10 мл. Раствор готовят непосредственно перед употреблением.
     

Отбор пробы воздуха

     
     Воздух с объемным расходом 10 л/мин аспирируют через фильтр АФА-ВП-20, закрепленный в фильтродержателе. Для измерения 1/2 ПДК достаточно отобрать 50 л воздуха. Пробы хранят менее суток.
     

Подготовка к выполнению измерений

     
     Градуировочный растворы готовят согласно таблице. Хранят в холодильнике не более 3 суток.
     
     

Таблица

     
Шкала градуировочных растворов

     

Проведение анализа

     
     1. Во все промытые, не содержащие раствор лунки (кроме А1) предварительно сенсибилизированного планшета, заливают с помощью дозатора на 0,1 мл по 0,1 мл раствора антисыворотки, затем в лунки B1, C1 заливают по 0,1 мл буфера "В", в лунки 2-7 рядов А, В, С - по 0,1 мл градуировочных растворов. Для каждого стандартного раствора отводят по 3 лунки. Во всех лунках общий объем составляет 0,2 мл, лунка А1 остается пустой.
     
     Планшет закрывают крышкой и инкубируют 1,5 ч при температуре 37 °С.
     
     2. Выливают содержимое планшета и промывают его 4 раза буфером "В".
     
     3. Во все лунки (кроме А1) вносят по 0,2 мл раствора антивидового конъюгата, закрывают планшет крышкой и инкубируют 1,5 ч при температуре 37 °С.
     
     4. Четырехкратная промывка по п.2.
     
     5. Проведение ферментативной реакции.
     
     В каждую лунку вносят дозатором на 0,1 мл по 0,1 мл раствора с субстратной смесью. Инкубируют по секундомеру 10 мин. Затем в той же последовательности в лунки вносят дозатором на 0,2 мл по 0,075 мл раствора 4М серной кислоты для остановки реакции.
     
     6. Для измерения оптической плотности растворов в лунках планшет помещают в рамку считывателя АКИ.Ц.0,1. Измерение проводят при длине волны 492 нм, причем в качестве раствора сравнения используют раствор субстратной смеси в лунке А1.
     
     Строят градуировочный график. На масштабно-координатной бумаге по оси абсцисс откладывают концентрацию стрептодеказы в градуировочных растворах в единицах концентрации (мкг/мл), а по оси ординат - значение оптической плотности при длине волны 492 нм. Градуировочный график строят одновременно с проведением измерений в пробах.
     

Проведение измерения

     
     После отбора пробы воздуха фильтры АФА-ВП-20 помещают в стаканы, вместимостью 50 мл, и приливают 20 мл буфера "А", периодически встряхивая, выдерживают в течение 10 мин. Затем с помощью дозатора на 1 мл отбирают 1 мл раствора и переносят в мерную колбу, вместимостью 50 мл, объем доводят до метки буфером "В".
     
     Анализ проводят аналогично процедуре при построении калибровочной зависимости.
     
     Растворы могут храниться до проведения анализа в течение 2 суток в холодильнике.
     
     По градуировочному графику на основании измерения значений оптической плотности в растворах проб определяют соответствующие концентрации стрептодеказы в пробах (мкг/мл).
     

Расчет концентрации

     
     Концентрацию стрептодеказы () в воздухе (мг/м) вычисляют по формуле:
     

,

     
где  - концентрация стрептодеказы в анализируемом растворе, мкг;

      - общий объем анализируемого раствора, мл;
     
      - объем воздуха, отобранного для анализа и приведенного к стандартным условиям, л (см. приложение 1).
     
      - коэффициент десорбции вещества с фильтра, равный 0,85.
          
     Методические указания разработаны ВИНИТИАФ, г.С.-Петербург.
     
     
     
Текст документа сверен по:
официальное издание
Измерение концентраций вредных
веществ в воздухе рабочей зоны:
Сб. методических указаний. Вып.30. -
М.: Федеральный центр госсанэпиднадзора
Минздрава России, 2000