МУК 4.2.1776-03

     
     
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

     
     
4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

     
Метод микробиологического измерения концентрации клеток
Aspergillus awamori ВНИИгенетика 120/177 - продуцента глюкоамилазы
в воздухе рабочей зоны

     
     
Дата введения 2003-12-01

     
     
     1. РАЗРАБОТАНЫ: Российским государственным медицинским университетом (к.б.н. Н.И.Шеиной).
     
     2. УТВЕРЖДЕНЫ Первым заместителем министра здравоохранения Российской Федерации - Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко 24 октября 2003 г.
     
     3. ВВЕДЕНЫ В ДЕЙСТВИЕ с 1 декабря 2003 г.
     
     4. ВВЕДЕНЫ ВПЕРВЫЕ.
     
     

1. Общие положения и область применения

     
     Настоящие методические указания устанавливают методику проведения микробиологического количественного анализа концентрации клеток штамма Aspergillus awamori ВНИИгенетика 120/177 - продуцента глюкоамилазы в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 100 до 5000 клеток в 1 м воздуха.
     
     Методические указания разработаны в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 "ССБТ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования" и ГОСТ Р 8.563-96 "Методики выполнения измерений".
     
     Методические указания предназначены для применения в лабораториях предприятий, организаций и учреждений, аккредитованных в установленном порядке на право проведения микробиологических исследований.
     
     Методические указания одобрены и рекомендованы секцией "Гигиенические аспекты биотехнологии и микробного загрязнения окружающей среды" Проблемной комиссии "Научные основы гигиены окружающей среды".
     
     

2. Биологическая характеристика Aspergillus awamori ВНИИгенетика 120/177
и его гигиенический норматив

     
     На 5 день развития на сусло-агаре штамм образует крупные ровные круглые колонии, средний диаметр которых составляет 0,5-1,0 см, а максимальный - 1,5-3,0 см. Край колоний ровный. Колонии гомогенные, гладкие, плоские.
     
     При температуре 38-42 °С штамм-продуцент появляется на сусло-агаре в виде маленьких белых колоний уже на 1-2 дни. На 3-й день в среду выделяется оранжево-желтый пигмент, процесс спорообразования идет интенсивнее. Образование конидиеносцев с конидиями придает колониям глубокий интенсивно-серый цвет. Колонии становятся опущенными и приподнимаются над средой.
     
     Систематическое положение микроорганизма
     

     
     Штамм Aspergillus awamori 120/177 получен во ВНИИгенетика как мутант из A.awamori С529Д 466 и депонирован в ЦМПМ института. Штамм является продуцентом глюкоамилазы.
     
     Штамм-продуцент растет на жидких и агаризованных средах. Оптимальная температура роста 27-30 °С, рН среды 5,0-6,0, культивирование 7 суток. Для размножения используется агаризованная среда Чапека, сусло-агар 5-6 °Б, картофельно-сахарозный агар.
     
     Предельно допустимая концентрация (ПДК) в воздухе рабочей зоны - 2000 кл./м, А.
     
     

3. Пределы измерений

     
     Методика обеспечивает выполнение измерений количества клеток плесневого гриба в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 100 до 5000 клеток в 1 м воздуха при доверительной вероятности 0,95.
     
     

4. Метод измерений

     
     Метод основан на аспирации из воздуха клеток плесневого гриба на поверхность среды сусло-агар и подсчета выросших колоний по типичным культурально-морфологическим признакам и яркому оранжево-желтому окрашиванию субстрата на 3 сутки.
     
     

5. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

     
     При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства и материалы.
     

5.1. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы

     
5.2. Реактивы, растворы

6. Требования безопасности

     
     При выполнении измерений концентрации клеток штамма-продуцента в воздухе рабочей зоны соблюдают следующие требования.
     
     6.1. Правила техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.005-88.
     
     6.2. Электробезопасность при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-79 и инструкции по эксплуатации прибора.
     
     6.3. Руководство "Положение об организации работы по технике безопасности в микробиологической промышленности" (1980), "Инструкции по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности" (1977).
     
     6.4. Все виды работ с реактивами проводят только в вытяжном шкафу при работающей вентиляции, работа с биологическим материалом осуществляется в боксе, оборудованном бактерицидными лампами.
     
     

7. Требования к квалификации операторов

     
     К выполнению измерений и обработке их результатов допускают лиц с высшим или средним специальным образованием, прошедших соответствующую подготовку и имеющих навыки работы в области микробиологических исследований.
     
     

8. Условия измерений

     
     Процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха (20±5 °С), атмосферном давлении 630-800 мм рт.ст. и влажности воздуха не более 80%.
     
     

9. Проведение измерения

     
9.1. Условия отбора проб воздуха

     
     Для определения концентрации клеток плесневого гриба воздух аспирируют при помощи аппарата Кротова со скоростью 10 л/мин на поверхность среды сусло-агар. Время аспирации воздуха (1-10 мин) зависит от предполагаемой концентрации клеток штамма-продуцента.
     
     Аппарат Кротова перед каждым отбором пробы воздуха тщательно протирают спиртом. Особенно тщательно обрабатывают поверхность подвижного диска и внутреннюю стенку прибора; наружную и внутреннюю стенку крышки. На подвижной диск устанавливают подготовленную чашку Петри со средой, одновременно снимая с нее крышку. Прибор закрывают. Соприкосновение крышки прибора со средой недопустимо. После отбора пробы воздуха и остановки диска, прибор открывают, быстро снимают чашку Петри и закрывают крышкой от данной чашки. На дне чашки Петри стеклографом отмечают точку контроля, время аспирации и дату отбора пробы.
     

9.2. Выполнение анализа

     
     Метод предполагает учет количества типичных колоний, выросших на 3 сутки после посева проб воздуха по культурально-морфологическим признакам и яркой оранжево-желтой пигментации среды. Прямой метод позволяет учитывать на чашке до 200 колоний продуцента.
     
     Агаризованную среду сусло-агар расплавляют, остужают до 50-60 °С, добавляют молочную кислоту из расчета 2 мл на 0,5 л среды (для подавления посторонней бактериальной микрофлоры), тщательно перемешивают и разливают по 10 мл в стеклянные чашки Петри на горизонтальной поверхности.
     
     Чашки с застывшей средой помещают в термостат на сутки при температуре 37 °С, после чего проросшие чашки бракуют, стерильные чашки используют для контроля воздуха.
     
     После отбора проб воздуха чашки Петри помещают в термостат при температуре 38-42 °С (повышенная температура, способствующая более быстрому росту колоний и плодоношений рода Aspergillus). Через 2-3 суток производят подсчет выросших типичных колоний продуцента. При необходимости культуру подвергают микроскопированию.
     
     

10. Вычисление результатов измерения

     
     Расчет концентрации клеток продуцента в пересчете на 1 м воздуха производят по формуле:
     

,   кл./м,

     
где  - концентрация клеток продуцента в воздухе;
     
      - количество колоний продуцента, выросших на чашке;
     
     1000 - коэффициент пересчета на 1 м воздуха;
     
      - объем воздуха, л (произведение скорости на время аспирации).
     
     

11. Оформление результатов измерений

     
     Результаты измерений оформляют протоколом по форме.
     
     

Протокол N
количественного микробиологического анализа штамма-продуцента
Aspergillus awamori ВНИИгенетика 120/177 в воздухе рабочей зоны

Результаты микробиологического анализа

     
     
     Ответственный исполнитель
     
     Научный руководитель
     
     

Список литературы

     
     1. ГОСТ 12.1.005-88 "ССБТ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования".
     
     2. ГОСТ 8.563-96*. ГСИ "Методики выполнения измерений".
______________
     * Вероятно ошибка оригинала. Следует читать ГОСТ Р 8.563-96. ГСИ "Методики выполнения измерений". - Примечание .     
     
     3. Положение об организации работы по технике безопасности в микробиологической промышленности. - М., 1980. 27 с.
     
     4. Инструкции по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности. - М., 1977. 7 с.
     
     5. Влодавец В.В. К определению плесневых грибов рода Aspergillus в воздухе лечебных учреждений // Гиг. и сан., 1988, N 8, С.93-95.
     
     6. Бабьева И.П., Зенова Г.М. Биология почв. - М., МГУ. 122 с.



Текст документа сверен по:
официальное издание
Методические указания. -
М.: Федеральный центр госсанэпиднадзора
Минздрава России, 2004