МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
НА ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЭУПАРЕНА В ВОЗДУХЕ

     УТВЕРЖДЕНЫ Заместителем Главного государственного санитарного врача СССР А.И.3аиченко 6 июня 1979 г. N 2028-79
     
     

I. Общая часть

     1. Определение основано на хроматографировании эупарена и продукта его гидролиза в тонком слое силикагеля КСК, переводе их в бензолдиазониевую соль и проявлении последней альфа-нафтиламином.
     
     2. Чувствительность определения - 1,5 мкг в анализируемом объеме раствора.
     
     3. Определению не мешают другие фениламиды, такие как .....*, линурон, пропанид.
________________
     * Брак оригинала. - Примечание изготовителя базы данных.
     
     4. Предельно допустимая концентрация эупарена в воздухе - 0,7 мг/м.
     
     

II. Реактивы и аппаратура

     5. Применяемые реактивы и растворы.
     
     Бензол, х.ч., ГОСТ 5955-68.
     
     Ацетон, х.ч., ГОСТ 2603-71.
     
     Хлороформ, х.ч., ГОСТ 6160-54.
     
     Четыреххлористый углерод, ч., ГОСТ 5827-68.
     
     Метанол, х.ч., ГОСТ 6995-67.
     
     Диметилформамид, ч., ГОСТ 20289-74.
     
     Силикагель КСК, ГОСТ 3956-54.
     
     Натрий сернокислый безводный, ч.д.а., ГОСТ 4166-66.
     
     Натрий хлористый, х.ч., ГОСТ 4233-66.
     
     Натрий азотистокислый, ч.д.а., ГОСТ 4197-66.
     
     Кислота соляная, х.ч., ГОСТ 3118-67.
     
     Кислота серная, х.ч., ГОСТ 4204-66.
     
     Кальции хлористый, ч., ГОСТ 4460-66.
     
     1-нафтиламин, х.ч.
     
     Проявляющий реактив: 1 г альфа-нафтиамина* растворяется в 30 мл диметилформамида и 20 мл ацетона. Перед опрыскиванием смешивают с 4 ?..** соляной кислотой 1:1.
________________
     * Соответствует оригиналу;     
     ** Брак оригинала. - Примечание изготовителя базы данных.
     
     Стандартный ацетоновый раствор, содержащий 100 мкг эупарена в 1 мл. 5 мл этого раствора перед анализом доводят до 10 мл.
     
     Стандартный ацетоновый раствор, содержащий 100 мкг/мл N,N-диметил-N-фенил сернокислого диамида. 5 мл этого раствора перед анализом доводят ацетоном до 10 мл. N,N-диметил-N-фенил сернокислый диамид получают путем щелочного гидролиза эупарена.
     
     К навеске х.ч. эупарена (10-20 г) приливают 50-100 мл метанола и осторожно прибавляют 100-200 мл насыщенного раствора едкого натра. После полного растворения осадка смесь нагревают 2 часа с обратным холодильником на кипящей водяной бане, после чего холодильник снимают и метанол отгоняют. Содержимое колбы охлаждают и подкисляют соляной кислотой до кислой реакции (рН 2-4). Выпавший белый осадок отфильтровывают на воронке Бюхнера и промывают три раза хлороформом (по 20 мл), который сливают в отдельную колбу. В эту же колбу сливают и хлороформ (3 раза по 30-60 мм) после экстракции в делительной воронке метаболита из фильтрата. Хлороформный экстракт высушивают 20-40 г безводного сернокислого натрия, переносят в сухую колбу и выпаривают досуха на водяной бане. Сухой остаток перекристаллизовывают из бензола (порции не более 5 мл).
     
     6. Применяемые посуда и приборы.
     

     Весы аналитические.
     
     Весы технические.
     
     Сушильный шкаф.
     
     Мельница для размола силикагеля (кофемолка).
     
     Баня водяная.
     
     Сито капроновое (100 меш).
     
     Колбы мерные на 100 мл.
     
     Прибор для отгонки растворителей с набором грушевидных колб емкостью 50-150 мл.
     
     Водоструйный насос или аспиратор для создания вакуума при отгонке растворителя.
     
     Камера хроматографическая.
     
     Эксикаторы.
     
     Ступка с пестиком.
     
     Стеклянные пластинки 12х12 см.
     
     Электроаспиратор.
     
     Пульверизаторы стеклянные.
     
     Цилиндры мерные.
     
     Воронка Бюхнера.
     
     Воронки химические.
     
     Микропипетки.
     
     Воронки делительные на 200-250 мл.
     
     Капиллярные пипетки.
     
     Шотовские воронки N 2 или N 1.
     
     Стеклянные пластинки тщательно моют раствором соды, хромовой смесью, водой, органическим растворителем (эфир, спирт, ацетон). 14 г измельченного и просеянного через сито силикагеля смешивают в ступке с 1 г сернокислого кальция, предварительно просушенного и просеянного, добавляют 40 мл воды и в течение 15 минут тщательно размешивают пестиком в ступке.
     
     Полученную суспензию равномерно наносят на 6 пластинок (7 мл на одну пластинку), сушат при комнатной температуре в течение 17-18 часов, активируют путем прогрева в сушильном шкафу - температура 100-110 °С в течение 15-20 минут, хранят в эксикаторе над слоем серной кислоты.
     
     

III. Отбор пробы воздуха

     7. Воздух со скоростью 5 л/мин аспирируют черед фильтр АФА-ХА-18. Для анализа следует отобрать 50 л воздуха.
     
     

IV. Описание определения

     8. Препарат извлекают из фильтра бензолом (по 25 мл три раза). Объединенный экстракт упаривают в колбе под вакуумом при температуре бани не более 60 °С. Содержимое колбы после отгонки бензола растворяют в 0,2 мл ацетона и при помощи капиллярной пипетки наносят на пластинку, оставив справа 3 см для стандарта. Операцию проводят 3-4 раза, каждый раз наносят раствор в центр первого пятна так, чтобы диаметр его не превышал 1 см. Одновременно с пробой на пластинку наносят в одну точку стандартные растворы эупарена и его метаболита в количестве 0,1, 0,15, 0,2 мл, помещают в хроматографическую камеру с подвижным растворителем бензол-метанол (50:1). Дают подняться фронту растворителя на 10 см, извлекают пластинку из камеры и сушат 10 минут на воздухе в вытяжном шкафу, а потом 1,5-2 мин при температуре 100-105° в сушильном шкафу, после чего опрыскивают пластинку раствором серной кислоты и помещают в сушильный шкаф при температуре 100-110° на 10-15 минут. После этого пластинку переносят в эксикатор для диазотирования парами окислов азота (на 5 мин), которые получают путем добавления к насыпанному на дно эксикатора азотистокислому натрию (5-10 г) соляной кислоты (5-10 мл). Пластинки извлекают и оставляют на 10-15 мин на воздухе, затем опрыскивают раствором 1-нафтиламина. На белом фоне проявляются ярко-малиновые пятна с  0,85±0,05 (эупарен) и 0,4±0,05 (продукт гидролиза).
     
     Количественное определение производят путем сравнения площади пятна пробы и того стандарта, площадь которого наиболее близка по величине к площади пробы. Площади пятен замеряют планиметром или с помощью промасленной бумаги. Концентрацию эупарена в мг/м воздуха () вычисляют по формуле:
     

,

     
где  - количество препарата в стандарте, мкг;
     
      - площадь пятна пробы, мм;
     
      - площадь пятна стандарта, мм;
     
      - объем воздуха, л, отобранный для анализа и приведенный к стандартным условиям по формуле (см. приложение).