МУК 4.1.1466-03

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств этофумезата в воде, почве, ботве
и корнеплодах сахарной, столовой и кормовой свеклы
методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

     
     
Дата введения 2003-06-30

     
     
     1. ПОДГОТОВЛЕНЫ: Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф.Эрисмана (чл.-корр. РАМН, проф. В.Н.Ракитский, проф. Т.В.Юдина); Московской сельскохозяйственной академией им. К.А.Тимирязева (проф. В.А.Калинин, к. хим. н. А.В.Довгилевич); при участии Департамента госсанэпиднадзора Минздрава России (А.П.Веселов).
     
     2. РЕКОМЕНДОВАНЫ к утверждению Комиссией по госсанэпиднормированию при Минздраве России.
     
     3. УТВЕРЖДЕНЫ Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г.Онищенко 24 июня 2003 г.
     
     4. ВВЕДЕНЫ с 30 июня 2003 г.
     
     5. ВВЕДЕНЫ ВПЕРВЫЕ.
     
     

1. Вводная часть

     
     Фирма-производитель: Байер КропСайенс (Германия).
     
     Торговое название: Нортрон, НЦ 8438, Кемирон, Трамат.
     
     Действующее вещество: этофумезат.
     
     (+)-2-этокси-2,3-дигидро-3,3-диметилбензофуран-5-ил метан-сульфонат (ИЮПАК).
     
     (+)-2-этокси-2,3-дигидро-3,3-диметил-5-бензофуранил метан-сульфонат (С.А.).
     
     Структурная формула:          
     

          
     Эмпирическая формула: CHОS.
     
     Молекулярная масса: 286,3.
     
     Бесцветное кристаллическое вещество без запаха.
     
     Температура плавления: 70-72 °С.
     
     Давление паров при 25 °С: 0,12-0,65 мПа.
     
     Коэффициент распределения н-октанол/вода: .
     
     Растворимость (г/л) при 25 °С: ацетон, дихлорметан, диметилсульфоксид, этилацетат - более 600, толуол - 300-600, метанол 120-150, этанол - 60-75, гексан - 4,7, вода - 0,05.
     
     Стабильность к гидролизу: стабилен при pH 7 и 9, но разлагается сильными щелочами и кислотами (DT=30 дней (pH 1) и 10 дней (pH 13).
     
     Разрушается при облучении водного раствора солнечным светом: DT=31 час.
     
     В почве сохраняется достаточно длительное время: DT колеблется от 10 до 122 дней в лабораторных и от 84 до 407 дней в полевых условиях. Вещество умеренно сорбируется почвами, локализуется в верхнем 30 см слое почвы и не вымывается в грунтовые воды.
     
     Краткая токсикологическая характеристика
     
     Острая пероральная токсичность (LD) для крыс - более 5000 мг/кг; острая дермальная токсичность (LD) для крыс - более 2000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LC) для крыс - более 3,97 мг/дм воздуха. Этофумезат не оказывает раздражающего действия на слизистые оболочки глаз и кожу кроликов. LC для рыб - 12-20 мг/л (96 час).
     
     Препарат малотоксичен для рыб, пчел, птиц и диких животных.
     
     Гигиенические нормативы: ОДК в почве - 0,2 мг/кг; ПДК в воде водоемов - 0,005 мг/дм; МДУ в свекле столовой, кормовой и сахарной - 0,1 мг/кг; ВМДУ в табаке - 1 мг/кг.
     
     Область применения препарата
     
     Этофумезат - системный гербицид, поглощается корнями и в меньшей степени листьями растений. Применяется для борьбы с однолетними злаковыми и широколистными сорными растениями в посевах сахарной, столовой и кормовой свеклы при норме расхода 0,5-2,0 кг/га путем довсходового внесения или опрыскивания вегетирующих растений. Часто применяется в смеси с препаратами контактного или остаточного действия.
     
     

2. Методика определения остаточных количеств этофумезата в воде, почве, ботве и корнеплодах сахарной, столовой и кормовой свеклы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

     
2.1. Основные положения

     
2.1.1. Принцип метода

     
     Метод основан на определении этофумезата с помощью обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором после извлечения вещества из воды гексаном, из почвы и растительного материала водным ацетоном при ультразвуковой обработке, очистки экстрактов перераспределением в системе несмешивающихся растворителей, а также на колонке с основным оксидом алюминия.
     
     Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.
     

2.1.2. Избирательность метода

     
     В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых в интенсивной технологии выращивания сахарной, столовой и кормовой свеклы.
     

2.1.3. Метрологическая характеристика метода

     
     
Таблица

Метрологическая характеристика метода

     
     
2.2. Реактивы, растворы и материалы

         
2.3 Приборы, аппаратура, посуда

 _______________
     * Соответствует оригиналу. - Примечание .
         

2.4. Отбор проб

     
     Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79).
     
     Отобранные пробы почвы, ботвы и корнеплодов свеклы хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике не более суток. Для длительного хранения пробы почвы доводят до воздушно-сухого состояния и хранят в холодильнике при температуре не выше 4 °С в течение 3 месяцев; образцы ботвы и корнеплодов свеклы хранят до анализа в морозильной камере при температуре -18 °С. Пробы воды хранят при температуре не выше 4 °С в течение 2 дней, при температуре -18 °С в течение месяца.
     
     Перед анализом сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм, а ботву и корнеплоды измельчают.
          

2.5. Подготовка к определению

     
2.5.1. Подготовка и очистка реактивов и растворителей

     
     Органические растворители перед началом работы очищают, сушат и перегоняют в соответствии с типовыми методиками. Гексан и хлористый метилен встряхивают с небольшими порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока свежая порция кислоты не перестанет окрашиваться. Затем растворители последовательно промывают водой, 2% раствором гидроксида натрия и снова водой, после чего сушат над гидроксидом натрия и перегоняют.
     
     Ацетон перегоняют над перманганатом калия и поташом (на 1 л ацетона 10 г KMnO и 2 г KСО).
     
     Ацетонитрил сушат над пентоксидом фосфора и перегоняют; отогнанный растворитель повторно перегоняют над углекислым калием.
     
     Диэтиловый эфир (1 л) предварительно встряхивают с 20 мл свежеприготовленного раствора железного купороса (30 г сульфата железа в 55 мл воды с добавлением 1,5 г концентрированной серной кислоты). Затем диэтиловый эфир последовательно промывают 0,5% раствором перманганата калия, 5% раствором гидроксида натрия и водой, после чего сушат над хлористым кальцием и перегоняют.
     

2.5.2. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ

     
     Отмеряют 700 мл ацетонитрила, переносят в мерную колбу емкостью 1000 мл, добавляют 300 мл бидистиллированной воды, перемешивают, фильтруют и дегазируют.
     

2.5.3. Кондиционирование колонки

     
     Промыть колонку для ВЭЖХ смесью ацетонитрил-вода (70:30, по объему) в течение 30 мин при скорости подачи растворителя 1 мл/мин. Включить детектор и подождать стабилизации базовой линии (5-15 мин).
     

2.5.4. Приготовление стандартных растворов

     
     Основной стандартный раствор этофумезата с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 0,010 г вещества, содержащего 99,9% д.в., в ацетонитриле в мерной колбе на 100 мл. Раствор хранят в холодильнике не более месяца.
     
     Рабочие стандартные растворы с концентрациями 0,1; 0,2; 0,5 и 1,0 мкг/мл готовят из основного стандартного раствора этофумезата соответствующим последовательным разведением подвижной фазой для ВЭЖХ (п.2.5.2). Рабочие растворы хранят в холодильнике при температуре не выше 4 °С не более 7 дней.
     
     При изучении полноты открывания этофумезата в модельных матрицах используются ацетонитрильные растворы вещества.
     

2.5.5. Построение калибровочного графика

     
     Для построения калибровочного графика в инжектор хроматографа вводят по 50 мкл рабочего стандартного раствора этофумезата с концентрацией 0,1; 0,2; 0,5 и 1,0 мкг/мл. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений и находят среднее значение высоты хроматографического пика для каждой концентрации. Строят калибровочный график зависимости высоты хроматографического пика в мм от концентрации этофумезата в растворе, в мкг/мл.
     

2.5.6. Подготовка колонки с оксидом алюминия для очистки экстракта

     
     В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 1,8 см вставляют тампон из стекловаты, закрывают кран и приливают около 10 мл гексана. Затем в колонку вносят суспензию 10 г основного оксида алюминия I степени активности по Брокману в 20 мл гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку промывают 20 мл гексана со скоростью 1-2 капли в секунду, после чего она готова к работе.
     

2.5.7. Проверка хроматографического поведения этофумезата
на колонке с оксидом алюминия

     
     В круглодонную колбу емкостью 10 мл отбирают 0,1 мл стандартного раствора этофумезата с концентрацией 10 мкг/мл. Отдувают растворитель током теплого воздуха, остаток растворяют в 3 мл смеси гексан-хлористый метилен (1:1, по объему) и наносят на хроматографическую колонку (п.2.5.6). Промывают колонку 40 мл хлористого метилена и затем 30 мл смеси хлористый метилен-диэтиловый эфир (70:30, по объему) со скоростью 1-2 капли в секунду. Отбирают фракции по 10 мл каждая, упаривают, остаток растворяют в 1 мл подвижной фазы для ВЭЖХ (п.2.5.2) и анализируют на содержание этофумезата по п.2.7.
     
     Фракции, содержащие этофумезат, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 2,5 мл подвижной фазы для ВЭЖХ и вновь анализируют по п.2.7. Рассчитывают содержание этофумезата в элюате, определяют полноту вымывания вещества из колонки и необходимый для очистки экстракта объем элюента.
     
     Примечание: Профиль вымывания этофумезата может меняться при использовании новой партии сорбента и растворителей.
     
     

2.6. Описание определения

     
2.6.1. Экстракция этофумезата

     
     2.6.1.1. Вода. 100 мл предварительно отфильтрованной воды помещают в делительную воронку емкостью 250 мл и трижды экстрагируют гексаном порциями по 30 мл при энергичном встряхивании в течение 1 мин. Объединенную органическую фазу пропускают через слой безводного сульфата натрия и упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30 °С. Сухой остаток растворяют в 2,5 мл подвижной фазы для ВЭЖХ (п.2.5.2) и анализируют на содержание этофумезата по п.2.7.
     
     2.6.1.2. Почва. Навеску (25 г) воздушно-сухой почвы помещают в коническую колбу на 250 мл, приливают 100 мл смеси ацетон-вода (80:20, по объему) и помещают в ультразвуковую баню на 5 мин. Суспензию фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Остаток на фильтре промывают 50 мл смеси ацетон-вода (80:20, по объему). Из объединенного экстракта отбирают аликвоту раствора (около 12 мл), эквивалентную 2,5 г почвы. Дальнейшую очистку экстракта проводят по пп.2.6.2 и 2.6.3.
     
     2.6.1.3. Ботва и корнеплоды свеклы. К навеске (25 г) измельченного растительного материала приливают 100 мл смеси ацетон-вода (80:20, по объему) и гомогенизируют 5 мин при 10000 об/мин. Суспензию фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу на 250 мл. Остаток на фильтре промывают 50 мл смеси ацетон-вода (80:20, по объему). Из объединенного экстракта отбирают аликвоту раствора, эквивалентную соответственно 5 г корнеплодов или 2,5 г ботвы. Дальнейшую очистку экстракта проводят по пп.2.6.2 и 2.6.3.
     

2.6.2. Очистка экстракта

     
     Аликвоту почвенного (из п.2.6.1.2) или растительного (из п.2.6.1.3) экстракта упаривают до водной фазы на роторном испарителе при температуре 40 °С. Водный остаток переносят в делительную воронку емкостью 100 мл, приливают 25 мл бидистиллированной воды и 30 мл гексана и воронку встряхивают в течение 1 мин. После разделения слоев отделяют гексановую фракцию, а водную фазу экстрагируют гексаном еще дважды (30+20 мл). Объединенный гексановый экстракт пропускают через стеклянный фильтр, заполненный безводным сульфатом натрия, и затем упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30 °С. Дальнейшую очистку экстракта проводят по п.2.6.3.
     

2.6.3. Очистка на колонке с оксидом алюминия

     
     Остаток в колбе, полученный при упаривании очищенных по п.2.6.2 экстрактов растительного материала или почвы, количественно переносят тремя 1-мл порциями смеси гексан-хлористый метилен (1:1, по объему) в кондиционированную хроматографическую колонку (п.2.5.6). Промывают колонку 40 мл хлористого метилена, которые отбрасывают. Этофумезат элюируют 30 мл смеси хлористый метилен-диэтиловый эфир (70:30, по объему), собирая элюат в грушевидную колбу емкостью 50 мл. Раствор упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30 °С. Сухие остатки почвы, ботвы и корнеплодов свеклы растворяют в 2,5 мл подвижной фазы для ВЭЖХ (п.2.5.2) и анализируют по п.2.7.     
     

2.7. Условия хроматографирования

     
     Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором Altex (США) или аналогичный.
     
     Колонка стальная длиной 15 см, внутренним диаметром 4 мм, содержащая Kromasil 100А - С18 зернением 5 мкм.
     

     
     Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 5,0 мкг/мл, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ.     
     

2.8. Обработка результатов анализа

     
     Содержание этофумезата рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:
     

,

     
где  - содержание этофумезата в пробе, мг/кг или мг/дм;

     
      - высота пика образца, мм;
     
      - высота пика стандарта, мм;
     
      - концентрация стандартного раствора, мкг/мл;
     
      - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл;
     
      - масса или объем анализируемой части образца, г или мл (для воды - 100 мл; для почвы и ботвы - 2,5 г; для корнеплодов - 5 г).
     
     

3. Требования техники безопасности

     
     Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами.
     
     

4. Контроль погрешности измерений

     
     Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95. ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа.
            
     
     

Текст документа сверен по:
официальное издание
М.: Федеральный центр госсанэпиднадзора
Минздрава России, 2004