почта Моя жизнь помощь регистрация вход
Краснодар:
погода
декабря
5
четверг,
Вход в систему
Логин:
Пароль: забыли?

Использовать мою учётную запись:

Курсы

  • USD ЦБ 03.12 30.8099 -0.0387
  • EUR ЦБ 03.12 41.4824 -0.0244

Индексы

  • DJIA 03.12 12019.4 -0.01
  • NASD 03.12 2626.93 0.03
  • RTS 03.12 1545.57 -0.07

  отправить на печать


    МУК 4.1.770-99



4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Количественное определение формальдегида в крови
методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

    

Дата введения 1999-09-06

    
    
    УТВЕРЖДЕНЫ Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко 6 июля 1999 г.
    
    
    Методические указания разработаны в соответствии с требованиями ГОСТа 8.563-96 "Методики выполнения измерений", ГОСТа Р 1.5-92 "Общие требования к построению, изложению, оформлению и содержанию стандартов". Методика анализа аттестована и обеспечивает определение формальдегида в диапазоне концентраций 0,05-3,0 мкг/см.
    

НСНО

Мол. масса - 30,03

    
    Формальдегид (муравьиный альдегид, метаналь) - газ с резким запахом. 35-40%-ный водный раствор формальдегида называется формалином или формолем. Растворы выделяют газообразный формальдегид при комнатной температуре. Т - минус 19,3 °С, Т - минус 118,3 °С. Формальдегид растворим в воде и органических растворителях (бензол, толуол, ацетон, этанол, этилацетат и др.). Формальдегид - раздражающий газ, вызывает дегенеративные процессы в паренхиматозных органах, сенсибилизирует кожу, действует на ЦНС. Относится ко 2 классу опасности.
    
    Содержание формальдегида в крови контрольной группы - мкг/см.
    
    Методика обеспечивает выполнение измерений с суммарной погрешностью результата измерений 20,0% при доверительной вероятности 0,95.
    
    

Сущность метода

    
    Методика основана на предварительном переводе формальдегида в 2,4-динитрофенилгидразон формальдегида, экстракции продукта дериватизации из биологического материала гексаном, упаривании гексанового экстракта, растворении упаренного остатка в ацетонитриле и анализе на жидкостном хроматографе.
    
    Измерение концентрации формальдегида выполняют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с использованием УФ-детектора.
    
    Определению не мешают метанол, этанол, уксусный альдегид, ацетон, муравьиная кислота и другие карбонильные соединения.
    
    Длительность анализа, включая подготовку пробы, - 50 мин.
    
    

Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы

    
    При выполнении анализа применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы. Допускается применение других типов средств измерений, вспомогательного оборудования и химреактивов с аналогичными метрологическими характеристиками.
    

Средства измерений

Жидкостный хроматограф с насосом высокого давления (ЧССР) и ультрафиолетовым детектором LCD 2563 (ЧССР)


Весы лабораторные ВЛР-200 аналитические

ТУ 25-06113-79

Разновесы Г-210

ГОСТ 73208-82*

_____________
    * Номер ГОСТ соответствует оригиналу. - Примечание .  


Термометр лабораторный шкальный ТЛ-2, пределы 0-100 °С, цена деления 1 °С

ТУ 25-2021-003-88

Секундомер "Агат"

ГОСТ 5072-792.2*

_____________
    * Номер ГОСТ соответствует оригиналу. - Примечание .       


Микрошприцы МШ-10

ТУ 5Е2.833.106

Лупа измерительная

ГОСТ 25706-83

Линейка металлическая измерительная, цена деления 1 мм

ГОСТ 17435-72

Цилиндр мерный вместимостью 50 см

ГОСТ 1770-74

Пипетки градуированные вместимостью 1, 5 и 10 см

ГОСТ 20292-74*

_____________
    * Действуют ГОСТ 29169-91, ГОСТ 29227-91, ГОСТ 29228-91, ГОСТ 29229-91. - Примечание .     


Пробирки центрифужные мерные вместимостью 10 см


Колбы мерные вместимостью 50, 100 см

ГОСТ 1770-74

Стандартные образцы:


Формальдегид в воде с концентрацией 1,0 мг/см
    

ГСО 6263-91.2.1

Вспомогательные устройства

Колонка из кварцевого стекла длиной 15 см и внутренним диаметром 3,3 мм, заполненная сорбентом Separon С 18 с размером частиц 5 мкм


Центрифуга СМ-4 (2750 об/мин)


Дистиллятор

ТУ 61-1-721-79

Сушильный шкаф ШСС-80 П УХЛ 4.2

ТУ 16.531.743-83

ИК-лампа



Дефлегматор длиной 300 мм

ГОСТ 9425-60

Холодильник шариковый ХШ-300 (6 шар.)

ГОСТ 1770-74

Холодильник прямой ХПТ-3-300

ГОСТ 1770-74

Воронка Шотта (пор 16)

ГОСТ 25336

Воронки делительные вместимостью 250 см

ГОСТ 23932-79

Бюксы вместимостью 10 см с притертой крышкой

ГОСТ 25336-82

Стакан термостойкий вместимостью 2 дм

ГОСТ 25336-82

Колба для перегонки круглодонная вместимостью 2 дм

ГОСТ 25336-82

Реактивы

Гексан, х.ч., очищенный для хроматографии

ГОСТ 6-09-4521-77*    

_____________
    * Номер ГОСТ соответствует оригиналу. - Примечание .  


Ацетонитрил, ч., очищенный для хроматографии

ТУ 6-09-3534-87

Вода дистиллированная 2,4-динитрофенилгидразин, ч., очищенный перекристаллизацией из ацетонитрила, чистота не менее 99,0%.

ГОСТ 6709-72

2,4-динитрофенилгидразон формальдегида, перекристаллизованный из метанола или этанола, чистота не менее 99,0%

ТУ 6-09-2394-77

Кислота соляная (плотность 1,19), х.ч.

ГОСТ 3118-77

Перманганат калия, ч.

ГОСТ 20490-75

Калий двухромовокислый, ч.д.а.     

ГОСТ 4220-75



Требования к безопасности

    
    Помещение для проведения измерений должно соответствовать требованиям "Пожарных норм проектирования зданий и сооружений" (СНиП ПА-5-700) и "Санитарных норм проектирования промышленных предприятий" (СН-245-71*) и СНиП-74.
________________
    * На территории Российской Федерации действует СП 2.2.1.1312-03. -Примечание .
    
    При выполнении работ должны быть соблюдены меры противопожарной безопасности в соответствии с требованиями ГОСТа 12.1.004-85 и правила техники безопасности в соответствии с ГОСТом 12.1.007-76.
    
    При работе необходимо соблюдать "Правила по технике безопасности и производственной санитарии при работе в химических лабораториях", утверждены МЗ СССР 20.12.82 (М.,1981), и "Правила устройства и безопасной эксплуатации сосудов, работающих под давлением", утверждены Госгортехнадзором СССР 27.11.87 (М.: Недра, 1989).
    
    При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТу 12.1.005-88.
    
    При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТом 12.1.019-79 и инструкции по эксплуатации прибора.
    
    

Требования к квалификации оператора

    
    К выполнению хроматографических измерений биологических проб допускаются лица, прошедшие обучение работе на жидкостном хроматографе.
    
    

Условия измерений

    
    При подготовке проб к анализу и приготовлении растворов соблюдают следующие условия:
    
     температура воздуха (20±10) °С;
    
     атмосферное давление 630-800 мм рт.ст.;
    
     влажность воздуха - не более 80% при температуре 25 °С.
    
    Выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендуемых технической документацией по прибору.
    
    

Подготовка к выполнению измерений

    
    Перед выполнением измерений проводят следующие работы: подготовка посуды и растворителей, приготовление растворов, подготовка хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики.
    

Подготовка посуды

    
    Используемую посуду необходимо тщательно вымыть хромовой смесью, тщательно ополоснуть водопроводной и дистиллированной водой и просушить при температуре 120 °С.
    

Подготовка растворителей

    Очистка ацетонитрила от примесей. В колбу, вместимостью 2 дм, помещают 1 дм ацетонитрила и 20 г КМnO, кипятят с обратным холодильником в течение 1 ч, затем перегоняют с дефлегматором, отбирая фракции по 200 см. Когда в колбе останется около 200 см продукта, перегонку прекращают. Остаток можно смешивать с новой порцией растворителя. Первую фракцию отбрасывают, а остальные проверяют на поглощение в УФ-области.
    

Приготовление растворов

    Хромовая смесь. В термостойкий стакан, вместимостью 2 дм, насыпают 50 г хромовокислого калия, осторожно приливают по палочке частями, тщательно перемешивая, 1 дм концентрированной серной кислоты.
    
    Элюент для хроматографии. 50 см очищенного ацетонитрила смешивают с 50 см дистиллированной воды. Подвижную фазу фильтруют через воронку Шотта (пор 16) и дегазируют барботированием гелия или азота в течение 5-10 мин со скоростью 50-60 об/мин.
    
    Соляная кислота, 2 моль/дм. 163,0 см концентрированной HCl (плотность 1,19 г/см) вносят в мерную колбу вместимостью 1 дм, доводят объем до метки дистиллированной водой и тщательно перемешивают.
    
    2,4-динитрофенилгидразин, 0,2%-ный раствор в 2М соляной кислоте. 0,2 г 2,4-динитрофенилгидразина вносят в мерную колбу вместимостью 100 см и доводят до метки 2М раствором соляной кислоты.
    
    Исходный раствор формальдегида для калибровки (раствор А). 1 см ГСО формальдегида с концентрацией 1,0 мг/см переносят в мерную колбу вместимостью 100 см и доводят дистиллированной водой до метки. Срок хранения раствора - 36 ч.
    
    Рабочий раствор для градуировки УФ-детектора. В мерную колбу вместимостью 100 см вносят 10 см раствора А и доводят дистиллированной водой до метки (раствор Б). Срок хранения раствора - 36 ч.
    
    Идентификация хроматографического пика 2,4-динитрофенилгидразона формальдегида. Готовят раствор 2,4-динитрофенилгидразона формальдегида в ацетонитриле с концентрацией 0,01-0,02 мг/см, вводят в колонку хроматографа 1-2 мм раствора. Снимают хроматограмму в условиях хроматографического анализа и определяют время удерживания 2,4-динитрофенилгидразона формальдегида.
    

Подготовка хроматографической колонки

    
    Колонку устанавливают на хроматограф и подают элюирующую жидкость (ацетонитрил : вода = 1:1) со скоростью 1 см/мин до установления равновесия колонки, которое определяют по стабильности нулевой линии детектора.
    

Установление градуировочной характеристики

    
    Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика на хроматограмме от концентрации формальдегида в крови, устанавливают по пяти сериям растворов для градуировки. Каждую серию, состоящую из шести растворов, готовят из растворов А и Б.
    
    Растворы для установления градуировочной характеристики готовят в мерных колбах вместимостью 50 см. Для этого в каждую колбу вносят раствор А (или раствор Б) в соответствии с таблицей, доводят объем до метки цельной кровью, не содержащей формальдегид, и тщательно перемешивают. Растворы готовят непосредственно перед определением.
    
    

Таблица

    
Растворы для установления градуировочной характеристики
при определении концентрации формальдегида в крови

    

Номер раствора

1

2

3

4

5

6

Объем раствора А
(конц. 10 мкг/см), см

-

-

0,25

0,50

1,00

1,50

Объем раствора Б
(конц. 1 мкг/см), см

0,25

0,50

-

-

-

-

Массовая концентрация формальдегида, мкг/см

0,05

0,10

0,50

1,00

2,00

3,00

    
    
    2 см каждого рабочего раствора помещают в делительную воронку, добавляют 40 см дистиллированной воды, 2 см 0,2%-ного раствора 2,4-динитрофенилгидразина в 2М соляной кислоте, 2 капли концентрированной соляной кислоты, 5 см гексана и экстрагируют 15 мин. После расслоения гексана и крови верхний слой (гексановый) переносят в центрифужную пробирку и центрифугируют 1-2 мин со скоростью 2750 об/мин, затем 1,5 см гексана переносят в бюкс и выпаривают досуха под ИК-лампой. Высушенный остаток растворяют в 0,4 см ацетонитрила и вводят в хроматограф аликвотную часть (10 мкл). Проводят по пять параллельных вводов обработанных экстрактов каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях:
    

подвижная фаза

ацетонитрил : вода = 1:1

скорость движения элюента

0,6 см/мин,

скорость диаграммной ленты

0,3 см/мин,

длина волны УФ-детектора

365 нм,

шкала детектора

2,

время удерживания:


2,4-динитрофенилгидразина

4 мин 20 с,

2,4-динитрофенилгидразона формальдегида

5 мин 50 с.

    
    По средним для каждой точки значениям аналитического сигнала (площади пика) строят градуировочную характеристику , где - площадь пика, мм (или усл. ед.); - концентрация градуировочного раствора, мкг/см. По установленной градуировочной характеристике и по значению аналитического сигнала пробы определяют концентрацию формальдегида в исследуемом образце.
    

Отбор проб

    
    Для отбора проб крови используют чистую посуду объемом 10 см. Кровь отбирают из вены в количестве 2 см. Срок хранения пробы крови в холодильнике - не более 48 ч.
    
    

Выполнение измерений

    
    2 см анализируемой пробы помещают в делительную воронку, добавляют 40 см дистиллированной воды, 2,0 см 0,2%-ного раствора 2,4-динитрофенилгидразина в 2М соляной кислоте, 2 капли концентрированной соляной кислоты, 5 см гексана и экстрагируют 15 мин. После расслоения жидкостей верхний слой (гексановый) переносят в центрифужную пробирку и центрифугируют 1-2 мин со скоростью 2750 об/мин, затем 1,5 см гексана переносят в бюкс и выпаривают досуха под ИК-лампой. Высушенный остаток растворяют в 0,4 см ацетонитрила и вводят в хроматограф аликвотную часть (10 мм). Анализ проводят при вышеуказанных условиях работы хроматографа. По установленной градуировочной характеристике и по значению аналитического сигнала пробы определяют концентрацию формальдегида в исследуемом образце.
    
    

Вычисление результатов измерения

    
    Вычисляют значение площади хроматографического пика 2,4-динитрофенилгидразона формальдегида по формуле:
    

, мм,

    
где - высота пика, мм;
    
     - ширина пика на половине высоты, мм.
    
    Из градуировочных характеристик по значению площади хроматографического пика 2,4-динитрофенилгидразона формальдегида находят массовую концентрацию формальдегида в крови, мкг/см.
    
    

Внутренний оперативный контроль

    
    Внутренний оперативный контроль качества результатов контрольного химического анализа (сходимость, воспроизводимость, точность) осуществляют с целью получения оперативной информации о качестве анализов и принятия при необходимости оперативных мер по его повышению (МИ 2335-95).
    

Оперативный контроль сходимости

    
    Периодичность контроля сходимости измерений зависит от количества рабочих измерений (2 параллельные пробы). Отбирают 2 пробы крови и каждую из них анализируют в точном соответствии с прописью методики.
    
    Результаты признаются удовлетворительными, если выполняется условие:
    

,

    
где и - результаты анализа 1 и 2 проб;
    
     - допустимое расхождение между двумя результатами одной и той же пробы (=55%);
    
     - среднее значение между двумя определениями.
    

Оперативный контроль точности

    
    Периодичность контроля погрешности измерений зависит от количества рабочих измерений за контролируемый период и определяется планами контроля.
    
    Образцами для контроля являются представительные пробы биосред, к которым делаются добавки в виде раствора. Отбирают 2 пробы и к одной из них делают добавку в виде раствора таким образом, чтобы их содержание увеличилось по сравнению с исходным на 50-150%. Каждую пробу анализируют в точном соответствии с прописью методики и получают результат анализа исходной рабочей пробы и рабочей пробы с добавкой . Результаты анализа исходной рабочей пробы и рабочей пробы с добавкой получают не по возможности, а в одинаковых условиях, т.е. их получает один аналитик с использованием одного набора мерной посуды, одной партии реактивов и т.д.
    
    Результаты контроля признаются удовлетворительными, если выполняется условие:
    

,

где - добавка к пробе в виде раствора с концентрацией мкг/см;
    
     - норматив оперативного контроля погрешности, мкг/см.
    
    При внешнем контроле (=0,95) принимают
    

*,

    
где и - характеристики погрешностей для исходной пробы и пробы с добавкой, мкг/см.
________________
    * Формула соответствует оригиналу. - Примечание .
    

и .

    
    При внутрилабораторном контроле (=0,90) принимают, что
    

.

         
    При превышении оперативного контроля погрешности эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, и их устраняют.
    
    
    
Текст документа сверен по:
официальное издание
Определение химических соединений
в биологических средах: Сборник методических
указаний МУК 4.1.763-4.1.779-99. -
М.: Федеральный центр
госсанэпиднадзора Минздрава России, 2000

  отправить на печать

Личный кабинет:

доступно после авторизации

Календарь налогоплательщика:

ПнВтСрЧтПтСбВс
01
02 03 04 05 06 07 08
09 10 11 12 13 14 15
16 17 18 19 20 21 22
23 24 25 26 27 28 29
30 31

Заказать прокат автомобилей в Краснодаре со скидкой 15% можно через сайт нашего партнера – компанию Автодар. http://www.avtodar.ru/

RuFox.ru - голосования онлайн
добавить голосование