МУК 4.2.1089-02

     
     
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ УСТАНОВКИ ОБЕЗЗАРАЖИВАНИЯ
 ВОЗДУХА УОВ "ПОТОК 150-М-01" И КОНТРОЛЬ МИКРОБНОЙ
ОБСЕМЕНЕННОСТИ ВОЗДУХА ПРИ ЕЕ РАБОТЕ

Дата введения 2002-03-01

     
     
     УТВЕРЖДЕНЫ Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации Г.Г.Онищенко 4 января 2002 г.
     
     

1. Общие положения

     
     Настоящие методические указания предназначены для использования установки для обеззараживания воздуха УОВ "Поток 150-М-01" в лечебно-профилактических учреждениях, в т.ч. операционных, перевязочных, реанимационных, родильных залах, инфекционных боксах и туберкулезных больницах (отделениях), а также фармацевтических и пищевых производствах, производствах изделий медицинского назначения, аптеках, лабораториях, в помещениях жилых и административных зданий, в овощехранилищах, а также в других субъектах хозяйственной деятельности вне зависимости от подчиненности и форм собственности. Допускается применение других установок и оборудования, работающих на таком же принципе и имеющих технические характеристики не хуже вышеуказанной установки.
     
     

2. Нормативные ссылки

     
     2.1. Закон Российской Федерации "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения" от 30.03.99 N 52-ФЗ.
     
     2.2. постановлением Правительства Российской Федерации от 24.07.00 N 554.
     
     2.3. постановлением Правительства Российской Федерации от 24.07.00 N 554.
     
     

3. Область применения

     
     Установка обеззараживания воздуха УОВ "Поток 150-М-01" (далее - установка) предназначена для обеззараживания, дезинфекции и тонкой фильтрации воздуха помещений, а также для снижения микробной обсемененности различных поверхностей.
     
     Установка используется в качестве бактерицидного фильтра воздуха в операционных, реанимационных, послеоперационных палатах интенсивной терапии, палатах для больных с ожогами кожи, лабораториях и других помещениях.
     
     Установка эксплуатируется в присутствии, а также при отсутствии людей.
     
     Принцип действия установки "Поток 150-М-01" основан на воздействии постоянными электрическими полями заданной ориентации и напряженности на микроорганизмы, находящиеся в обрабатываемом воздушном потоке, что приводит к их инактивации.
     
     Обработка воздушного потока в установке осуществляется в 2 этапа.
     
     В зоне инактивации (первый этап) осуществляется комбинированное многократное воздействие на микроорганизмы резко изменяющихся по величине напряженности и градиенту постоянных электрических полей и ионов противоположных знаков, приводящих к повреждению или полному разрушению микробных клеток.
     
     В зоне фильтрации (второй этап) осуществляется улавливание обломков разрушенных микробных клеток и находящегося в обрабатываемом воздушном потоке твердого аэрозоля на электростатическом осадителе.
     
     Ионный состав воздуха после обработки практически не изменяется.
     
     Установка зарегистрирована как изделие медицинского назначения Минздравом России (Удостоверение N 29/18061295/0888-00 от 11.09.00), имеет Гигиеническое заключение N 77.ФЦ.31.945Л.1564.1.00 от 28.01.00, Сертификат соответствия N РОСС R.U. АЯ 46. В. 44161 от 22.03.00 и разрешена к применению в медицинской практике, а также в иных помещениях, требующих особой чистоты воздуха.
     
     

4. Рекомендации по применению

     
     4.1. Установка позволяет проводить обеззараживание и тонкую фильтрацию воздуха в присутствии людей, т.к. при ее работе не меняются параметры микроклимата, напряженность электростатического и интенсивность электрического полей, уровень ионизации воздуха. При прохождении воздуха через установку обеспечивается его стерилизация.
     
     Применение УОВ "Поток 150-М-01" в закрытом помещении не наносит вреда здоровью людей.
     
     Для помещений с предельно допустимым уровнем шума 50 дБ рекомендуется использовать следующий график работы установки "Поток 150-М-01" во время 8-часового рабочего дня: включение установки на 3 часа, выключение на 30 минут и т.д. При этом эквивалентный уровень шума на рабочем месте в течение рабочего дня, рассчитанный по методике, изложенной в руководстве 2.2.755-99 составит не более 48 дБ. В остальных помещениях нет ограничений по использованию установки в течение рабочего дня. В других случаях ограничений по использованию установки нет.
     
     Максимальное время непрерывной работы установки 24 часа, после чего должен быть сделан перерыв не менее чем на 1 час.
     
     Размещать установку рекомендуется на высоте не менее 50 см от пола таким образом, чтобы входящая и выходящая решетки находились на расстоянии не менее 30 см от стены или каких-либо предметов, препятствующих свободному проходу воздуха. Расположение установки должно обеспечивать наилучший режим циркуляции воздуха в помещении.
     
     Установка может работать в двух режимах: 1 - нормальном и 2 - режиме повышенной фильтрации.
     
     Рекомендуемые варианты использования установки УОВ "Поток 150-М-01" с учетом требований к качеству воздушной среды различных помещений представлены в табл.1.
     
     

Таблица 1

     
Использование установки "Поток 150-М-01" в помещениях
(в соответствии с требованиями существующих нормативных документов)

     
     
     Для поддержания достигнутого уровня стерильности в течение заданного времени необходимо, чтобы установка работала непрерывно.
     
     При эксплуатации установки в инфекционных боксах и туберкулезных больницах (отделениях) необходимо соблюдать правила безопасности. После влажной уборки помещения или при переносе установки в другой бокс, или перед началом работы с другим пациентом, в целях предотвращения переноса патогенной микрофлоры, необходимо обработать любыми дезинфицирующими растворами поверхность установки и предфильтр, который помещается в дезинфицирующее средство в соответствии с рекомендациями по его применению. Материал, из которого изготовлен предфильтр, устойчив к воздействию любых дезинфицирующих средств и не требует специальных условий обеззараживания.
     
     С помощью установки может быть создана локальная "чистая" рабочая зона (например, операционный стол), выходная решетка должна быть направлена на обрабатываемый объект. Расстояние от выходной решетки до обрабатываемого объекта должно быть не менее 30 см. Использование "перекрестных" воздушных потоков от двух или более установок позволяет повысить степень чистоты в рабочей зоне.
     
     Рекомендуется для достижения наибольшего асептического эффекта проводить влажную уборку помещений с применением моющих и дезинфицирующих средств (в соответствии с действующими нормативными документами) при включенной установке.
     
     В период эксплуатации установки должны выполняться указания по подготовке установки к работе, правила эксплуатации и технического обслуживания, изложенные в руководстве по эксплуатации, прилагаемом к каждому изделию.
     
     4.2. Для определения оптимального варианта расположения установки в помещении и проверки эффективности ее работы контрольные пробы воздуха следует отбирать следующим образом.
     
     При работе установки в помещении, в котором производятся работы, контролируется содержание общего количества микроорганизмов в 1 м воздуха в каждой из рекомендованных ниже точек:
     
     - в помещении площадью до 15 м - проба в точке 1 (рис.1);
     
     - в помещениях площадью более 15 м - пробы в точках 1, 2, 3, 4, 5;
     
     - в узких длинных помещениях (с отношением ширины к длине >1:5) пробы берутся в точках 1, 2, 3, 4 и т.д. на расстоянии не более 5 м друг от друга (рис.2).
     
     

Рис.1

Рис.2

     
     
     После подсчета числа колоний микроорганизмов, выросших на поверхности питательной среды, определяется соответствие полученных значений нормативам обсемененности воздуха по каждому замеру в отдельности.
     
     

5. Методы отбора проб воздуха для микробиологического анализа

     
     Для отбора проб воздуха в помещении с целью определения содержания общего количества микроорганизмов, Staphylococcus aureus, грамотрицательных потенциально патогенных бактерий, дрожжей, дрожжеподобных и плесневых грибов, микобактерий туберкулеза и другой микрофлоры в 1 м используются аспирационные приборы типа импакторов и центрифужных пробоотборников ПУ-1Б, "Флора-100", прибор для бактериологического анализа воздуха модель 818 (аппарат Кротова) или любые другие пробоотборники, разрешенные Минздравом России для применения. Применение седиментационного метода не рекомендуется.
     
     

6. Методы анализа

     
     6.1. Определение общего микробного числа
     
     Для определения общего количества микроорганизмов прокачивают 100 дм воздуха. Отбор проб проводят на 2%-ный питательный агар. Посевы инкубируют в термостате при температуре (37±1) °С 24 часа и 24 часа - при комнатной температуре. После инкубации производят подсчет выросших колоний и делают перерасчет на 1 м воздуха.
     
     6.2. Определение содержания Staphylococcus aureus
     
     Отбирают 250 дм воздуха на желточно-солевой агар (ЖСА). Посевы инкубируют при температуре (37±1) °С в течение 48 часов или 24 часов в термостате при (37±1) °С и 24 часов при комнатной температуре. Подозрительные колонии подлежат дальнейшему исследованию с изучением тинкториальных (окраска по Граму), морфологических и биохимических свойств.
     
     При наличии в мазке характерных грамположительных кокков из оставшейся части колонии для накопления материала делают высев на мясо-пептонный агар (МПА).
     
     Тесты для дальнейшей идентификации приведены в табл.2.
     
     

Таблица 2

     
Тесты для идентификации

     
     
     После идентификации производят перерасчет полученных результатов на 1 м воздуха.
     
     6.3. Определение содержания дрожжей, дрожжеподобных и плесневых грибов
     
     Для определения количества дрожжей, дрожжеподобных и плесневых грибов отбор проб производят пропуская 250 дм воздуха на чашки со средой Сабуро. Посевы инкубируют в термостате при температуре (28±1) °С в течение 72-96 часов. Подсчитывают количество выросших колоний и производят перерасчет на 1 м воздуха.
     
     6.4. Определение содержания грамотрицательных потенциально патогенных бактерий
     
     Бактериологическому контролю подлежит воздух следующих помещений: операционных, перевязочных, палат, отделений реанимации и интенсивной терапии, а также при необходимости и по эпидемиологическим показаниям в других помещениях.
     
     Отбор проб производят на модифицированную среду Эндо, пропуская 500-1000 дм воздуха. Отбор воздуха в помещениях стационара проводят на уровне дыхания лежачего больного.
     
     Дальнейшие исследования необходимо проводить в соответствии с методическими рекомендациями "Определение грамотрицательных потенциально патогенных бактерий-возбудителей внутрибольничных инфекций" Минздрава РСФСР от 03.06.86.
     
     6.5. Определение содержания микобактерий туберкулеза (МБТ)
     
     Для определения количества МБТ производят отбор проб, пропуская 250 дм воздуха на чашки с питательной средой Финн-П. Посевы инкубируют в термостате при температуре (37±1) °С в течение 28 суток. Подсчитывают количество выросших колоний и производят перерасчет на 1 м воздуха.
     
     

7. Оборудование, питательные среды и реактивы, расходные материалы

     
     7.1. Оборудование
     

     
     Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками и оборудования с техническими характеристиками не хуже вышеуказанных.
     
     7.2. Питательные среды и реактивы
     
     7.2.1. Питательный агар готовят из сухого препарата промышленного производства по способу, указанному на этикетке.
     
     Питательный агар запрещается выдерживать в расплавленном состоянии более 8 часов.
     

     
     7.2.2. Желточно-солевой агар.
     
     Готовят с добавлением к 100 см мясопептонного агара, расплавленного до (45-50) °С, 9,5 г натрия хлористого и 10 см яично-желточной эмульсии. Взвесь перемешивают до полной гомогенизации компонентов и разливают в чашки Петри. Хранят при температуре (4-10) °С не более 5 суток.
     

Приготовление яично-желточной эмульсии

     Свежее диетическое куриное яйцо со сроком хранения не более 7 суток без трещин и дефектов скорлупы тщательно отмывают в теплой проточной воде с помощью ручных щеток и щелочного мыла, затем оставляют на 30 минут в мыльном растворе. Тщательно промывают в проточной воде и погружают в 70%-ный этиловый спирт на 30 минут, помещают в стерильную чашку Петри, стерильным инструментом пробивают с противоположных сторон яйца два отверстия. Через одно отверстие полностью удаляют белок, а затем, увеличив отверстие, выливают желток в стерильную колбу с 50 см физиологического раствора, содержимое встряхивают до получения однородной массы. Хранят при температуре 4 °С не более 72 часов.
     
     7.2.3. Среда Эндо модифицированная
     
     Среду готовят из сухого препарата промышленного производства по способу, указанному на этикетке. В готовую охлажденную до 60 °С среду добавляют 1,25 см 0,01%-ного водного раствора кристаллического фиолетового из расчета на 100 см среды для ингибиции грамположительных микроорганизмов. Разливают в чашки Петри по 15-18 см.
     
     7.2.4. Среда Сабуро
     

     
     Все ингредиенты растворяют в воде, нагревают до полного растворения всех компонентов, устанавливают рН=5,8+0,2, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, разливают во флаконы и стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 15 минут. Хранят при температуре (4-10) °С не более 14 суток.
     
     7.2.5. Реакция плазмокоагуляции ставится в соответствии с "Наставлением по применению плазмы кроличьей", выпускаемой предприятиями по производству бактерийных препаратов.
     
     7.2.6. Среды для идентификации стафилококков с углеводами маннитом и мальтозой (среды Гисса) готовят из сухих препаратов промышленного производства по способу, указанному на этикетке.
     
     7.2.7. Маннитно-солевой агар
      

     
     Все компоненты растворяют в воде, вносят 2,5 см 1%-ного раствора фенолового красного, устанавливают рН=(7,6±0,2), кипятят 1 мин, прибавляют замоченный заранее агар, нагревают до полного расплавления, фильтруют через ватно-марлевый фильтр. Стерилизуют под давлением при температуре (121±1) °С в течение 15 минут. Хранят при температуре (4-10) °С не более 14 суток.
     
     7.2.8. Реакция хлопьеобразования
     
     На предметное стекло наносят каплю исследуемой культуры. Параллельно для контроля культуру растирают также в капле физиологического раствора. При наличии в контроле равномерной мути, а в плазме - хлопьев реакцию считают положительной. Хлопьеобразование можно также наблюдать при постановке реакции коагуляции.
     
     7.2.9. Изотонический 0,85%-ный раствор хлористого натрия (физиологический раствор)
     
     0,85 г хлористого натрия (NaCl) растворяют в 100 см дистиллированной воды и стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 15 минут. Хранят при комнатной температуре не более 14 суток.
     
     7.2.10. Среда Финн-И
     
     Среда Финн-И рекомендована в нашей стране как вторая стандартная среда для выделения микобактерий. Она отличается от среды Левенштейна-Йенсена тем, что вместо L-аспарагина в ней используется глутамат натрия и подбор солей рассчитан таким образом, что конечная кислотность среды (рН=6,3-6,5) имеет более низкое значение и большую стабильность. Эти свойства обусловливают более высокую эффективность среды при засеве материала, обработанного щелочными детергентами.
     
     Рост микобактерий на этой среде появляется на несколько (5-7) дней раньше, чем на среде Левенштейна-Йенсена, а процент выделения культур на 6-8% выше.
     

     
     Вышеперечисленные ингредиенты растворяют в дистиллированной воде в указанной последовательности при слабом подогревании (не доводя до кипения) на водяной бане. Кислотность не корригируют. Стерилизуют в автоклаве 30 минут при 1 атмосфере (121±1) °С. Срок хранения раствора составляет 3-4 недели.
     

     
     В стерильных условиях растворяют в стерильной дистиллированной воде малахитовый зеленый, поместив раствор в термостат при температуре (37±1) °С на 1-2 часа. Приготовленный раствор не подлежит длительному хранению и должен заменяться свежим при появлении преципитата или изменении окраски.
     

Яичная масса

     
     Подготовка яиц проводится по п.7.2.2. Затем в стерильном боксе разбивают яйца стерильным ножом в стерильную посуду, доводя общий объем яичной массы до 1 дм (для этого требуется в среднем 20-25 яиц в зависимости от их величины). Тщательно взбивают стерильным венчиком или в стерильном миксере.
     

Приготовление среды

     
     В большую стерильную емкость, соблюдая правила стерильности, помещают следующие растворы:
     
     Раствор минеральных солей 600,0 см
     
     Гомогенизированная яичная масса 1000,0 см
     
     Тщательно перемешивают и фильтруют через 4-слойный стерильный марлевый фильтр.
     
     Добавляют 20 см раствора малахитового зеленого и в течение не более 15 минут разливают в пробирки приблизительно по 5 см, следя за тем, чтобы в растворе не сформировался осадок.
     

Свертывание среды

     
     Для свертывания среды используются специальные аппараты-свертыватели "АСИС". Пробирки с разлитой в них средой помещают в специальные штативы с подобранным углом наклона для формирования косяка среды. Штативы устанавливают в свертыватель и проводят коагуляцию при 85 °С в течение 30 минут. Так как приготовление питательной среды проводится в условиях соблюдения стерильности, свертывание является не стерилизующей, а лишь коагулирующей процедурой.
     
     Качество приготовленной яичной среды зависит от соблюдения температурного и временного режимов коагуляции. Обесцвечивание среды, наличие пузырьков или углублений на поверхности среды свидетельствует о нарушении режима свертывания. Повторное свертывание также ухудшает качество среды. Среды с нарушенным режимом свертывания подлежат удалению.
     

Проверка на стерильность

     
     После свертывания каждая вновь приготовленная партия среды подвергается контролю на стерильность. Для этого она помещается в термостат и выдерживается в нем 2-3 суток при (37±1) °С.
     

Хранение

     
     Приготовленная партия среды должна иметь дату изготовления и сохраняться в холодильнике при 4 °С с тщательно закрытыми пробками для предотвращения усыхания. Срок хранения среды не должен превышать 4 недель.
     
     7.2.11. Набор реактивов для окраски по Граму.
     
     7.2.11.1. Вода дистиллированная. Технические условия ГОСТ 6709.
     
     7.2.11.2. Натрий хлористый (ч., х.ч., ч.д.а.) ГОСТ 4233. Допускается применение других питательных сред и химических реактивов по качеству не ниже вышеуказанных.
     

     
     Допускается применение других расходных материалов по качеству не хуже вышеуказанных.
     
     

Приложение 1

     
Допустимые уровни бактериальной обсемененности воздуха в операционных

     
     
Приложение 2

     
Допустимые уровни бактериальной обсемененности воздуха
в некоторых помещениях стационаров

     
     
Приложение 3

     
Допустимые уровни бактериальной обсемененности воздуха
в некоторых помещениях акушерских стационаров

     
     
Приложение 4

     
Допустимые уровни бактериальной обсемененности
воздуха в асептических отделениях

     
     
Приложение 5

     
Допустимые уровни бактериальной обсемененности воздуха
в некоторых помещениях аптек

     
     
Приложение 6

     
Допустимые уровни количества микроорганизмов
 в производственных помещениях (по классам чистоты)