МУК 4.1.768-99

    
    
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

    
Методика количественного определения
экзогенного фенола в биосредах (моча)

    
    
Дата введения 1999-09-06

    
    
    УТВЕРЖДЕНО Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко 6 июля 1999 г.
    
    
    Методические указания разработаны в соответствии с требованиями ГОСТа 8.563-96 "Методики выполнения измерений" и ГОСТа Р 1.5-92. Методика анализа метрологически аттестована и обеспечивает определение фенола в диапазоне концентраций 0,1-1,2 мкг/см.
    

    Фенол - бесцветные кристаллы с характерным запахом. Т - 181,75 °С, Т - 40,9 °С. Фенол растворим в воде и органических растворителях. Фенол относится ко 2 классу опасности.
    
    Методика обеспечивает выполнение измерений с суммарной погрешностью результата измерений 12,6% при доверительной вероятности 0,95.
    

Сущность метода

    
    Метод основан на перегонке фенола с водяным паром и фотометрическом определении по азокрасителю, образующемуся при взаимодействии фенола с диазотированным паранитроанилином.
    
    Определению мешают крезолы.
    
    Нижний предел измерения в объеме пробы - 0,05 мкг.
    
    Длительность анализа - 30 мин.
    
    

Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы

    
    При выполнении применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы.
    

Требования к безопасности

    
    Помещение для проведения измерений должно соответствовать требованиям "Пожарных норм проектирования зданий и сооружений" (СНиП ПА-5-700) и "Санитарных норм проектирования промышленных предприятий" (СН-245-71) и СП и П-74.
    
    При выполнении работ должны быть соблюдены меры npoтивопожарной безопасности в соответствии с требованиями ГОСТа 12.1.004-85 и правила техники безопасности в соответствии ГОСТом 12.1.007-76.
    
    При работе необходимо соблюдать "Правила по технике безопасности и производственной санитарии при работе в химических лабораториях", утверждены МЗ СССР 20.12.82 (М.,1981), и "Правила устройства и безопасной эксплуатации сосудов, работающих под давлением", утверждены Госгортехнадзором СССР 27.11.87 (М.: Недра, 1989).
    
    При работе с реактивом соблюдают требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТу 12.1.005-88.
    
    При выполнении измерений с использованием спектрофотометра соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТом 12.1.019-79 и инструкции по эксплуатации прибора.
    
    

Требования к квалификации оператора

    
    К выполнению измерений допускаются лица, имеющие квалификацию не ниже инженера-химика и опыт работы на спектрофотометре.
    
    

Условия измерений

    
    При проведении процессов приготовления растворов и подготовки проб к анализу соблюдают следующие условия:
    
     температура воздуха (20±5) °С;
    
     атмосферное давление 630-800 мм рт.ст.;
    
     влажность воздуха - не более 80% при температуре 25 °С.
    
    Выполнение измерений на спектрофотометре проводят в условиях, рекомендуемых технической документацией по прибору.
    
    

Подготовка к выполнению измерений

    
    Перед выполнением измерений проводят следующие работы: приготовление растворов, установление градуировочной характеристики, отбор проб.
    

Приготовление растворов

    
    Соляная кислота, 4%-ный раствор. 10,0 см концентрированной соляной кислоты (=1,19 г/см) добавляют к 100,0 см дистиллированной воды.
    
    Нитрит натрия, 25%-ный раствор. 25 г нитрита натрия растворяют в 100 см дистиллированной воды.
    
    Паранитроанилин, 0,1%-ный раствор. 0,1 г паранитроанилина, предварительно высушенного при температуре 60 °С в течение 2 ч, растворяют в 4%-ном растворе соляной кислоты в мерной колбе вместимостью 100 см. Перед употреблением раствор охлаждают до 0-5 °С.
    
    Диазотированный паранитроанилин. 12,5 см охлажденного paствора паранитроанилина приливают в мерную колбу вместимостью 50 см, прибавляют постепенно 2,5 см раствора нитрита натрия и через несколько минут доводят объем до 50 см дистиллированной водой. Диазотирование паранитроанилина следует проводить в вытяжном шкафу.
    
    Щавелевая кислота, 10%-ный раствор. 10 г щавелевой кислоты растворяют в 100 см дистиллированной воды.
    
    Исходный раствор для градуировочной характеристики, 1 мг/см. В мерную колбу вместимостью 50 см помещают 20-30 см дистиллированной воды и точную навеску свежеперегнанного фенола 50 мг и доводят объем до 50 см дистиллированной водой.
    
    Рабочий раствор для установления градуировочной характеристики с содержанием фенола 10 мкг/см готовится путем разбавления перед отгонкой.
    

Установление градуировочной характеристики

    
    Градуировочную характеристику, выражающую зависимость оптической плотности от концентрации фенола в пробе, устанавливают по 3 сериям растворов.
    
    Растворы для градуировки готовят в мерных колбах вместимостью 100 см. Для этого в каждую колбу вносят раствор согласно таблице.
    
    

Таблица

    
Стандартные смеси для установления градуировочной характеристики при определении
концентрации фенола (фрагмент шкалы)

    
    
    Для установления градуировочной характеристики в колбу для перегонки помещают 5 см стандартного раствора, добавляют щавелевую кислоту до кислой реакции среды по лакмусовой бумаге и проводят перегонку с водяным паром. Отгоняют 10 см пробы. К отгону объемом 5 см добавляют 0,04 г карбоната натрия и тщательно перемешивают, затем добавляют 0,4 см диазотированного паранитроанилина и через 20 мин замеряют оптическую плотность на спектрофотометре в кюветах с расстоянием между рабочими гранями 10 мм при 494 нм.
    

Отбор проб

    
    Отбор проб мочи в объеме 100 см производится в тщательно вымытый стеклянный сосуд с притертой пробкой. Анализ мочи проводить сразу или хранить в холодильнике не более 12 ч после отбора пробы.
    
    

Выполнение измерений

    
    Для анализа берут 5 см мочи, наливают в колбу для перегонки, добавляют щавелевую кислоту до кислой реакции среды по лакмусовой бумаге и ведут перегонку с водяным паром. Из полученного отгона отбирают 5 см пробы, добавляют 0,04 г карбоната натрия и тщательно перемешивают, затем добавляют 0,4 см раствора диазотированного паранитроанилина. Содержимое пробирки вновь энергично встряхивают и через 20 мин замеряют оптическую плотность растворов в кюветах с расстоянием между рабочими гранями 10 мм при 494 нм.
    
    

Вычисление результатов измерений

    
    Концентрацию () фенола в моче (мкг/см) вычисляют по формуле:
    

,

    
где - концентрация вещества по градуировочному графику, мкг/см;
    
    - объем мочи, взятой для перегонки, см.
    
    - объем перегнанной пробы, мм.
    
    

Внутренний оперативный контроль

    Внутренний оперативный контроль качества результатов контрольного химического анализа (сходимость, воспроизводимость, точность) осуществляют с целью получения оперативной информации о качестве анализов и принятия при необходимости оперативных мер по его повышению (МИ 2335-95).
    

Оперативный контроль сходимости

    
    Периодичность контроля сходимости измерений зависит от количества рабочих измерений (2 параллельные пробы). Отбирают 2 пробы мочи и каждую из них анализируют в соответствии с прописью методики.
    
    Результаты признаются удовлетворительными, если выполняется условие:
    

,

    
где и - результаты анализа 1 и 2 проб;

     - допустимое расхождение между двумя результатами одной и той же пробы (=35%);
    
     - среднее значение между двумя определениями.
    

Оперативный контроль точности

    
    Периодичность контроля погрешности измерений зависит от количества рабочих измерений за контролируемый период и определяется планами контроля.
    
    Образцами для контроля являются представительные пробы биосред, к которым делаются добавки в виде раствора. Отбирают 2 пробы и к одной из них делают добавку в виде раствора таким образом, чтобы их содержание увеличилось по сравнению с исходным на 50-150%. Каждую пробу анализируют в точном соответствии с прописью методики и получают результат анализа исходной рабочей пробы и рабочей пробы с добавкой . Результаты анализа исходной рабочей пробы и рабочей пробы с добавкой получают не по возможности, а в одинаковых условиях, т.е. их получает один аналитик с использованием одного набора мерной посуды, одной партии реактивов и т.д.
    
    Результаты контроля признаются удовлетворительными, если выполняется условие:
    

,

где - добавка к пробе в виде раствора с концентрацией мкг/см;
    
     - норматив оперативного контроля погрешности, мкг/см.
    
    При внешнем контроле (=0,95) принимают
    

,

    
где и - характеристики погрешностей для исходной пробы и пробы с добавкой, мкг/см.
    

и .

    
    При внутрилабораторном контроле (=0,90) принимают, что
         

.

    
    При превышении оперативного контроля погрешности эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, и их устраняют.
    
    
    
Текст документа сверен по:
официальное издание
Определение химических соединений
в биологических средах: Сборник методических
указаний МУК 4.1.763-4.1.779-99. -
М.: Федеральный центр
госсанэпиднадзора Минздрава России, 2000