МУК 4.1.1222-03

    
    
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

    
    
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

    
Измерения концентраций кломазона в ботве и корнеплодах
сахарной свеклы, корнеплодах моркови и клубнях картофеля
методом газожидкостной хроматографии
(дополнение к N 5006-89 от 8 июня 1989 г.)

    
    
Дата введения 2003-07-01

    
    
    УТВЕРЖДЕНЫ Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации Г.Г.Онищенко 16 марта 2003 г.
    
    

1. Вводная часть

    
    Фирма производитель: ФМС ЕВРОПА Н.В.
    
    Торговое название: КОММАНД, ВР.
    
    Действующее вещество: кломазон (ISO).
    
    Действующее вещество: 2-(2-хлоробензил)-4,4-диметил-1,2-оксазолидин-3-он (IUPAC).
    
    Структурная формула:
    

              
    Эмпирическая формула: CHClNO.
    
    Молекулярная масса: 239,7.
    
    Вязкая светло-коричневая жидкость с рыбным запахом.
    
    Плотность 1,192 при 20 °С.
    
    Давление паров при 25 °С 19,2 мПа.
    
    Растворимость в воде 1,1 г/л.
    
    Растворимость в органических растворителях (г/л, 20 °С): хорошо растворим в ацетоне, ацетонитриле, хлороформе, цикогексаноне, гексане, гептане, хлористом метилене, метаноле, диметилформамиде, толуоле, диоксане и других органических растворителях.
    
    Кломазон устойчив при хранении. При комнатной температуре может храниться без потерь в течение года, при 50 °С - в течение 3 месяцев. В водных растворах период полураспада при солнечном свете более 30 дней.
    
    Гигиенические нормативы. ВМДУ моркови, свеклы сахарной - 0,1 мг/кг.
    
    Область применения препарата: Селективный системный гербицид, используемый для борьбы со злаковыми и некоторыми двудольными сорными растениями на посевах сои при довсходовом или предпосевном внесении с заделкой в почву, а также в смеси с другими гербицидами применяется на других культурах - рапсе, картофеле, бобовых, хлопчатнике.
    
    

2. Методика измерения концентраций кломазона в ботве и корнеплодах
сахарной свеклы, корнеплодах моркови и клубнях картофеля
методом газожидкостной хроматографии

    
2.1. Основные положения

    
2.1.1. Принцип методики

    
    Методика основана на определении кломазона с помощью газожидкостной хроматографии с использованием термоионного детектора после извлечения гербицида из проб гексаном, очистке экстрактов на колонке с флорисилом и концентрировании.
    

2.1.2. Избирательность метода

    
    В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых для борьбы с сорной растительностью, защиты овощных и масличных культур от вредителей и болезней (хлор- и фосфорорганические пестициды, амиды, тио- и дитиокарбаматы, синтетические пиретроиды). Избирательность метода обеспечивается очисткой экстрактов анализируемых проб, а также сочетанием селективного детектора и условиями хроматографирования.
    

2.1.3. Метрологическая характеристика метода

    
    Метрологическая характеристика метода представлена в табл.
    
    

Таблица

Метрологическая характеристика метода

    
    
    Минимально детектируемое количество кломазона в хроматографируемом объеме - 0,5 нг.
    
    Граница суммарной погрешности измерения - 10%.
    
    Линейный динамический диапазон детектирования - 0,5-5 нг.
    
    

2.2. Реактивы, растворы и материалы

    
2.3. Приборы, аппаратура, посуда

    
2.4. Отбор и подготовка проб

    
    Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21 августа 1979 г. N 2051-79.
    
    Для длительного хранения пробы замораживаются и хранятся при температуре -18 °С.
    
    Корнеплоды и клубни картофеля, не размораживая, измельчают на терке, зеленую массу растений - ножницами.
    
    

2.5. Подготовка к определению

    
2.5.1. Подготовка и кондиционирование колонок для газожидкостной хроматографии

    
    Готовую насадку (5% PS-400 или 3% OV-17 на хромосорбе 750) засыпают в стеклянную колонку, уплотняют под вакуумом, колонку устанавливают в термостат хроматографа, не подсоединяя к детектору, и выдерживают при температуре 260 °С в течение 10-12 ч.
    

2.5.2. Подготовка растворителей

    
    Растворители, используемые для анализа, специальной подготовки не требуют.
    
    Рекомендуется проверить чистоту применяемых растворителей. Для этого 100 мл растворителя испаряют при помощи вакуумного ротационного испарителя при температуре 40 °С досуха, обмывают стенки колбы 2 мл растворителя и хроматографируют полученный раствор. При обнаружении примесей, которые могут мешать определению, растворители очищают общепринятыми методами.
    

2.5.3. Приготовление растворов

    
    Раствор гексан-этилацетат в соотношении 95:5 по объему. В мерную колбу на 1 л наливают 50 мл этилацетата и доводят объем до метки гексаном.
    
    Раствор гексан-этилацетат в соотношении 90:10 по объему. В мерную колбу на 1 л наливают 100 мл этилацетата и доводят объем до метки гексаном.
    

2.5.4. Приготовление стандартных растворов

    
    Взвешивают 100 мг аналитического стандарта кломазона, переносят в мерную колбу объемом 100 мл, доводят объем до метки гексаном (основной стандартный раствор N 1 с концентрацией 1 мг/мл).
    
    Методом последовательного разбавления стандартного раствора N 1 гексаном готовят рабочие стандартные растворы с концентрациями 0,25, 0,5, 1, 2,5 мкг/мл, которые используются при определении степени извлечения и построения калибровочного графика.
    
    Основные и рабочие стандартные растворы устойчивы при хранении в холодильнике при температуре 4 °С в течение трех месяцев.
    

2.5.5. Подготовка флорисила (супелкосила) и хроматографических колонок для очистки экстрактов

    
    Флорисил (супелкосил) прокаливают в муфельной печи при температуре 350-400 °С в течение не менее 16 ч. Остужают в эксикаторе. Сорбент помещают в плоскодонную колбу, добавляют 3% дистиллированной воды (по весу) и встряхивают содержимое колбы на механическом встряхивателе в течение 2 ч. Оставляют стоять на 48 ч, периодически встряхивая содержимое колбы (2 раза в сутки по 30 мин).
    
    В нижнюю часть колонки для очистки экстрактов помещают тампон из стекловаты. Заполняют колонку на гексаном. Навеску флорисила или супелкосила (10 г) смешивают в химическом стакане с 15-20 мл гексана. Заполняют колонку суспензией флорисила (супелкосила) в гексане. Уровень растворителя над флорисилом должен составлять 10-15 мм. Промывают колонку последовательно 30 мл этилацетата и 50 мл гексана.
    
    Для каждой приготовленной партии флорисила (супелкосила) проверяют объем удерживания кломазона на хроматографической колонке.
    

2.5.6. Определение объема удерживания кломазона на хроматографической колонке

    
    Уровень растворителя в хроматографической колонке с флорисилом понижают почти до верхнего слоя сорбента. При помощи стеклянной или автоматической пипетки вносят 1 мл раствора кломазона в гексане концентрацией 10 мкг/мл. Дают раствору впитаться, приоткрывая кран колонки и осторожно сливая растворитель, так чтобы слой растворителя над верхним краем сорбента составлял 0,3 см. Промывают колонку 100 мл смеси гексана с этилацетатом в соотношении 95:5. Элюат отбрасывают. Элюируют кломазон из колонки смесью гексан - этилацетат в соотношении 9:1 со скоростью 2 мл/мин. Отбирают фракции объемом 10 мл в мерные цилиндры на 10 мл. Всего отбирают 6-7 фракций. Из цилиндров растворы переливают в круглодонные колбы на 50 мл (каждую фракцию помещают в отдельную колбу). Каждый цилиндр ополаскивают 1-2 мл гексана, который также вносят в соответствующую колбу. Выпаривают растворитель в каждой колбе на вакуумном ротационном испарителе при температуре бани не более 40 °С до объема примерно 1 мл. Переносят экстракты в мерные пробирки со шлифом. Стенки колб обмывают 0,7-0,8 мл гексана, который также переносят в соответствующие пробирки. Доводят объем раствора гексана в каждой пробирке точно до 2 мл и хроматографируют. Суммарный объем фракций, в которых обнаружен кломазон, представляет собой объем растворителя, который необходим для элюирования кломазона из колонки.
    

2.5.7. Построение калибровочного графика

    
    Рабочие стандартные растворы кломазона с концентрацией 0,25, 0,5, 1, 2,5 мкг/мл хроматографируют, а затем на основании данных хроматографирования рабочих стандартных растворов строят калибровочный график, откладывая на оси ординат площади (высоты) пиков, на оси абсцисс - концентрацию кломазона.
    
    Осуществляют не менее 5 параллельных измерений для каждой концентрации. Находят среднее значение высоты (площади) пика для каждой концентрации. Строят градуировочный график зависимости высоты в мм (мв) или площади (мм (мв·с) хроматографического пика от концентрации кломазона в растворе, мкг/мл.
    

2.5.8. Подготовка приборов и средств измерения

    
    Установка и подготовка всех приборов и средств измерения производится в соответствии с требованиями стандартов и технической документации.
    
    

2.6. Описание измерения

    
2.6.1. Экстракция

    
    Навеску измельченной пробы картофеля, моркови, корнеплодов сахарной свеклы (20 г) или ботвы сахарной свеклы (10 г) помещают в коническую колбу емкостью 500 мл, добавляют в нее 100 мл гексана и встряхивают на механическом встряхивателе в течение 30 мин. Содержимое колбы фильтруют в круглодонную колбу методом декантации через фильтр "белая лента" со слоем безводного сульфата натрия высотой 1-2 см. Экстракцию повторяют дважды используя 100 и 50 мл гексана. Осадок на фильтре промывают тремя порциями гексана по 20 мл. Объединенный экстракт упаривают до объема 2-3 мл на вакуумном ротационном испарителе при температуре бани не выше 40 °С. Далее проводят очистку пробы на колонке с флорисилом по п.2.6.2.

2.6.2. Очистка на колонке с флорисилом (супелкосилом)

    
    Перед внесением пробы уровень растворителя в колонке понижают почти до верхнего края сорбента. Пипеткой количественно переносят анализируемую пробу из колбы в колонку и дают ей впитаться. Колбу ополаскивают двумя порциями гексана по 2 мл, которые также вносят в колонку. Дают раствору впитаться, приоткрывая кран колонки и осторожно сливая растворитель, так чтобы слой растворителя над верхним краем сорбента составлял 0,3 см. Промывают колонку 100 мл смеси гексана с этилацетатом в соотношении 95:5. Растворитель отбрасывают. Элюируют кломазон из колонки 50 мл смеси гексан - этилацетат в соотношении 9:1 со скоростью 2 мл/мин. Элюат собирают в круглодонную колбу на 100 мл. Выпаривают растворитель на вакуумном ротационном испарителе при температуре бани не более 40 °С до объема примерно 1 мл. Переносят экстракт в мерную пробирку со шлифом. Стенки колб обмывают 0,7-0,8 мл гексана, который также переносят в пробирку. Доводят объем раствора гексана в мерной пробирке точно до 2 мл и хроматографируют по п.2.7.
    
    

2.7. Условия хроматографирования

    
    Газовый хроматограф, снабженный термоионным детектором (PYE-UNICAM серии 200, Цвет серии 500 или аналогичные).
    
    Основной вариант.
    
    Носитель - хромосорб 750 (100-120 меш). Неподвижная фаза - 5%PS-400.
    
    Колонка стеклянная, длиной 1,8 м и внутренним диаметром 2 мм.
    
    Газ-носитель - гелий или азот.
    
    Скорость потока: гелий (азот) - 25 см/мин; водород - 35 см/мин; воздух - 300 см/мин.
    
    Температура: термостата колонок 190 °С; термостата испарителя 250 °С; термостата детектора 300 °С.
    
    Время удерживания кломазона 3,6±0,1 мин.
    
    Альтернативный вариант.
    
    Носитель - хромосорб 750 (100-120 меш). Неподвижная фаза - 3%OV-17.
    
    Колонка стеклянная, длиной 2 м и внутренним диаметром 2 мм.
    
    Скорость потока: гелий (азот) - 20 см/мин; водород - 30 см/мин; воздух - 300 см/мин. Температура: термостата колонок 190; термостата испарителя 250 °С; термостата детектора 300 °С.
    
    При этих условиях хроматографирования время удерживания кломазона 5,4±0,2 мин.
    
    Вводимый в хроматограф объем пробы - 2 мкл.
    
    Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют среднюю высоту пика.
    
    Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией кломазона 2,5 мкг/мл разбавляют.
    
    

2.8. Обработка результатов анализа

    
    Содержание кломазона в пробах () вычисляют по формуле:
    

,

    
где - концентрация стандартного раствора кломазона, мкг/мл;
    
     - объем анализируемой пробы, подготовленной для хроматографического анализа, мл;
    
     - объем раствора анализируемой пробы, вводимого в хроматограф, мкл;
    
     - объем стандартного раствора, вводимого в хроматограф, мкл;
    
     - масса пробы, отобранной для анализа, г;
    
     - площадь пика кломазона в пробе (мв·с или мм) или высота пика (мв или мм);
    
     - площадь пика кломазона в стандартном растворе (мв·с или мм) или высота пика (мв или мм).
    
    

3. Требования техники безопасности

    
    Необходимо соблюдать все требования безопасности, рекомендуемые при работе с растворителями, токсичными и легковоспламеняющимися веществами, а также правила устройства, техники безопасности, производственной санитарии и личной гигиены при работе в химических лабораториях.
    
    

4. Контроль погрешности измерений

    
    Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95. ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа.
    
    

5. Разработчики

    
    Долженко В.И. (Всероссийский НИИ защиты растений, г.Санкт-Петербург-Пушкин), Басова Ю.Г., Сабуров Г.Г., Маслаков С.Е. (Санкт-Петербургский НИИ лесного хозяйства, г.Санкт-Петербург).
    
    
    
Текст документа сверен по:
официальное издание
Определение остаточных количеств пестицидов
в пищевых продуктах, сельскохозяйственном
сырье и объектах окружающей среды:
Сборник методических указаний. Вып.2. Ч.3. -
М.: Федеральный центр гигиены и
эпидемиологии Роспотребнадзора, 2005