МУК 4.1.1489-03

    
    
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ


4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

    
Определение массовой доли битрекса (денатоний бензоата)
в этиловом спирте и спиртосодержащей продукции
из всех видов сырья методами спектрофотометрии
и тонкослойной хроматографии

    
    
Дата введения 2003-06-30

    
    
    1. РАЗРАБОТАНЫ Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф.Эрисмана Минздрава России (Т.В.Юдина, Н.Е.Федорова, С.И.Волчек, В.Н.Волкова).
    
    2. РЕКОМЕНДОВАНЫ к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Минздрава России.
    
    3. УТВЕРЖДЕНЫ 29 июня 2003 г. и введены 30 июня 2003 г. Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации Г.Г.Онищенко.
    
    4. ВВЕДЕНЫ ВПЕРВЫЕ.
    
    

1. Введение

    
    Настоящий документ устанавливает метод спектрофотометрии (СФ) и тонкослойной хроматографии (ТСХ) для определения массовой концентрации битрекса (денатоний бензоата) в этиловом спирте и спиртосодержащей продукции из всех видов сырья в диапазонах соответственно 0,00025% масс. -0,00125% масс. и 0,00025% масс. -0,0025% масс.
    
    Денатоний бензоат - Битрекс.
    
    Химическое наименование: N-[2-((2,6-Диметилфенил)амино)-2-ок-соэтил]-N,N-диэтилбензолметанаммонийбензоат.
    

2. Характеристика погрешности измерений

    
    Методика обеспечивает выполнение измерений с погрешностью (), не превышающей ±15% (спектрофотометрический метод) и ±20% (метод ТСХ), при доверительной вероятности 0,95.
    
    

3. Метод измерений

    
    Спектрофотометрический метод основан на образовании извлекаемых бензолом окрашенных в желтый цвет продуктов реакции битрекса с бромфеноловым синим в кислой среде.
    
    Определению не мешают диэтилфталат, алифатические спирты.
    
    Определению мешают четвертичные соли аммония, алкалоиды, окрашенные вещества.
    
    Нижний предел измерения в анализируемой пробе 0,0001% масс.
    
    Метод тонкослойной хроматографии основан на разделении веществ в тонком слое силикагеля с последующим обнаружением зон локализации битрекса модифицированным реактивом Драгендорфа.
    
    Нижний предел измерения в хроматографируемом объеме пробы - 5 мкг.
    
    Измерению не мешают диэтиловый эфир, уксусный и кротоновый альдегиды, ацетон, алифатические спирты, диэтилфталат.
    
    

4. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

4.1. Средства измерений

    Допускается использование средств измерений с аналогичными или лучшими метрологическими характеристиками.
    

4.2. Реактивы

4.3. Вспомогательные устройства и материалы

    
    Допускается применение другого оборудования и хроматографических пластинок с аналогичными техническими характеристиками, обеспечивающих аналогичное разделение.
    
    

5. Требования безопасности

    
    При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на прибор.
    
    Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.686-98* "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны". Организация обучения работников безопасности труда осуществляется по ГОСТ 12.0.004.
_____________________
    * На территории РФ действуют  "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны" (ГН 2.2.5.1313-03).- Примечание .      
         
    

6. Требования к квалификации оператора

    
    К выполнению измерений и обработке их результатов допускают специалиста, имеющего высшее или среднее специальное химическое образование или опыт работы в химической лаборатории, прошедшего обучение, освоившего метод в процессе тренировки и уложившегося в нормативы оперативного контроля при выполнении процедур контроля погрешности.
    
    

7. Условия выполнения измерений

    
    При выполнении измерений в лаборатории должны быть соблюдены следующие условия:
    

8. Подготовка к выполнению измерений

8.1. Метод спектрофотометрии
    
8.1.1. Приготовление 0,04%-ного раствора бромфенолого синего

    
    Раствор индикатора готовят в день проведения анализа. Навеску красителя массой 40 м г помещают в мерную колбу вместимостью 100 см, вносят 1 см 0,01 н раствора едкого натра, доводят объем до метки водой.
    

8.1.2. Приготовление рабочих стандартных растворов  для градуировки прибора

    
    Рабочие стандартные растворы битрекса с массовыми концентрациями 0,0001; 0,0002; 0,0003; 0,0004 и 0,0005% масс. готовят из основного стандартного 1%-ного раствора битрекса соответствующим разбавлением водой.
    

8.1.3. Установление градуировочной характеристики

    
    В пять делительных воронок вносят по 50 см каждого из стандартных растворов битрекса с массовыми концентрациями 0,0001; 0,0002; 0,0003; 0,0004 и 0,0005%, добавляют 0,5 см 4 н раствора соляной кислоты, 2 см 0,04%-ного раствора бромфенолого синего и 10 см бензола.
    
    Реакционную смесь в воронке встряхивают 2 мин, дают расслоиться (20-30 с), затем снова энергично встряхивают и выдерживают несколько минут до полного разделения смеси. Верхний бензольный слой переносят в колориметрическую пробирку и фотометрируют в кювете толщиной поглощающего слоя 10 мм при длине волны 410 нм относительно контрольной пробы, которую готовят одновременно и аналогично стандартным пробам, используя вместо стандартного раствора 50 см дистиллированной воды.
    
    Строят градуировочный график N 1 зависимости оптической плотности (ед. ОП) от концентрации битрекса в растворе (% масс.).
    

8.2. Метод ТСХ
    
8.2.1. Приготовление проявляющего реактива

    
    Основной раствор. Навеску нитрата висмута массой 0,17 г помещают в мерную колбу вместимостью 100 см, растворяют в 22 см ледяной уксусной кислоты, добавляют 10 см 40%-ного раствора йодистого калия, доводят объем в колбе до метки дистиллированной водой. Раствор при хранении в холодильнике пригоден к употреблению в течение 2 недель.
    
    Рабочий раствор. К 10 см основного раствора прибавляют 1 см 80%-ной ортофосфорной кислоты, 10 см этилового спирта и 5 см 20%-ного двухлористого бария.
    
    Раствор готовят перед употреблением.
    

8.2.2. Приготовление подвижной фазы для ТСХ

    
    В колбу вместимостью 150 см вносят 37 см 25%-ного раствора аммиака и 84 см н-пропанола, перемешивают. Смесь наливают в хроматографическую камеру слоем не более 6-8 мм за 30 мин до начала хроматографирования.
    

8.2.3. Приготовление рабочих стандартных растворов битрекса

    
    Рабочие стандартные растворы битрекса с массовыми концентрациями 0,00125; 0,0025; 0,005; 0,0075 и 0,0125% масс. готовят из основного стандартного 1%-ного раствора битрекса соответствующим разбавлением этиловым спиртом.
    

8.3. Отбор проб

    
    Отбор проб проводится в соответствии с ГОСТ 5964-93.
    
    

9. Выполнение измерений

9.1. Метод спектрофотометрии

    
    Пробу анализируемого спирта массой 20 г* помещают в фарфоровую чашку и выпаривают на масляной бане при температуре не выше 105 °С почти досуха. Остаток растворяют в 50 см воды, переносят в делительную воронку и анализируют по п.8.1.3.
____________________
    * Масса спирта, взятого для анализа, может быть увеличена или уменьшена, если полученные величины оптической плотности выходят за пределы градуировочного графика.
    
    Концентрацию битрекса в растворе определяют по градуировочному графику N 1.
    

9.2. Метод ТСХ

    
    Пробу анализируемого спирта массой 2,0 г, взвешенную в бюксе, помещают в центрифужную пробирку, отдувают потоком теплого воздуха до объема около 0,5 см и количественно наносят на хроматографическую пластинку "Силуфол". Рядом наносят по 0,5 см стандартных растворов битрекса с концентрацией 0,00125; 0,0025; 0,005; 0,0075 и 0,0125% масс. Пластинку помещают в камеру для хроматографирования, содержащую смесь н-пропанол-25%-ный аммиак (84:37, по объему). После развития хроматограммы пластинку вынимают из камеры, оставляют под тягой до испарения растворителей, затем обрабатывают из пульверизатора проявляющим реактивом. Битрекс проявляется на пластинке в виде оранжевых пятен на светло-желтом фоне, темнеющем до глубокого коричневого в течение 10-15 мин, что обусловлено присутствием крахмала в закрепленном слое силикагеля пластинок "Силуфол". Rf=0,68±0,05.
    
    Содержание битрекса в пятне определяют визуально сравнением площади интенсивности пятен анализируемого раствора и стандартов или рассчитывая площадь пятен с использованием миллиметровой бумаги.
    
    Допустимо построение градуировочной характеристики зависимости площади пятна (в мм) от содержания битрекса в анализируемом растворе (в % масс.)
    
    

10. Обработка и оформление результатов измерений

10.1. Метод спектрофотометрии

    
    Массовую концентрацию битрекса в пробе (% масс.) определяют методом абсолютной калибровки по формуле:
    

, где

    
     - концентрация битрекса в растворе, % масс.;
    
     - концентрация битрекса в растворе, найденная по градуировочному графику, % масс.;
    
     - коэффициент, равный отношению массы, добавленной к сухому остатку воды, к массе взятого для анализа спирта (=2,5).
    

10.2. Метод ТСХ

    
    Массовую концентрацию битрекса в пробе (% масс.) оценивают путем сравнения площади и интенсивности окраски пятен анализируемой пробы и серии стандартов и рассчитывают по формуле:
    

, где

    
     - концентрация битрекса в анализируемом растворе, % масс.;
    
     - концентрация битрекса в стандартном растворе, площадь и интенсивность пятна которого соответствует анализируемому, % масс.;
    
     - коэффициент концентрирования пробы (=0,2).
    
    За окончательный результат анализа принимается среднее арифметическое () результатов двух параллельных определений, допустимые расхождения между которыми не должны превышать ±20%.
    
    Указывается значение погрешности результата (% масс.):
    

, где

    
     - граница допускаемой погрешности измерения массовой концентрации битрекса (п.2), %.
    
    Результат измерения должен заканчиваться тем же десятичным разрядом, что и погрешность. Результаты измерений оформляются записью в журнале и удостоверяются специалистом, проводившим измерения.
    
    

11. Контроль погрешности измерений

    
    Внутренний оперативный контроль (ВОК) качества результатов измерений проводят в соответствии с требованиями ГОСТ Р 8.563-96 и МИ 2335-95.
    

11.1. Контроль погрешности измерений

    
    Внутренний оперативный контроль погрешности измерений проводят в лаборатории до и после проведения серии измерений рабочих проб. Образцами для контроля служат градуировочные стандартные растворы битрекса с массовыми концентрациями 0,0001; 0,0002; 0,0003; 0,0004 и 0,0005% масс. (метод спектрофотометрии) или 0,00125; 0,0025; 0,005; 0,0075 и 0,0125% масс. (метод ТСХ). Процедура контроля состоит в приготовлении растворов по п.п.8.1.2 или 8.2.3, определении содержания битрекса в образцах по п.п.9.1 или 9.2.
    
    Измерения считают соответствующими нормативу оперативного контроля погрешности, если выполняется условие:
    

, где

    
     - норматив оперативного контроля погрешности, равный 15% (метод спектрофотометрии) или 20% (метод ТСХ);
    
     - результат определения концентрации битрекса, % масс.;
    
     - содержание битрекса в контрольном растворе, % масс.
    
    При превышении норматива оперативного контроля погрешности эксперимент повторяют. При повторном превышении норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, и устраняют их.
    
    Результаты контрольных измерений заносят в рабочий журнал.
    

11.2. Контроль сходимости результатов параллельных измерений

    
    Внутренний оперативный контроль сходимости результатов параллельных определений осуществляют в процессе измерений по размаху результатов.
    
    Решение об удовлетворительной сходимости принимают при выполнении условия:
    

, где

    
     и - результаты двух параллельных определений концентрации битрекса, % масс.;
    
     - среднее арифметическое и , % масс;
    
     - норматив оперативного контроля воспроизводимости измерений, равный 20%.
    
    При превышении норматива оперативного контроля сходимости проводят два дополнительных измерения, отбрасывают наибольший и наименьший результат и проводят повторный контроль сходимости. При превышении норматива измерения приостанавливают, выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, и устраняют их.
    
    Результаты измерений заносят в рабочий журнал.
    
    

12. Разработчики

    
    Юдина Т.В., Федорова Н.Е., Волчек С.И., Волкова В.Н. (ФНЦГ им. Ф.Ф.Эрисмана).
    
    
Текст документа сверен по:
официальное издание
Сб. методических указаний. МУК 4.1.1486-4.1.1499-03. -  
М.: Федеральный центр госсанэпиднадзора
Минздрава России, 2004