- USD ЦБ 03.12 30.8099 -0.0387
- EUR ЦБ 03.12 41.4824 -0.0244
Краснодар:
|
погода |
ГОСТ 28504-90
Группа М29
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР
ШКУРКИ МЕХОВЫЕ И ОВЧИНА ШУБНАЯ НЕВЫДЕЛАННЫЕ
Методы определения структурной поврежденности
и бактериальной зараженности кожевой ткани
Undressed fur skins and woolskins.
Methods for determination of structure damage and bacterial infection of flesh side
ОКСТУ 9800
Срок действия с 01.01.92
до 01.01.97*
________________________________
* Ограничение срока действия снято
по протоколу N 7-95 Межгосударственного Совета
по стандартизации, метрологии и сертификации
(ИУС N 11, 1995 год). - Примечание .
ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ
1. РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Государственным комитетом легкой промышленности при Госплане СССР
РАЗРАБОТЧИКИ
А.Н.Беседин, д-р техн. наук; М.А.Васильева, канд. техн. наук; Л.П.Плюснина, канд. техн. наук; И.Н.Коробейникова, канд. техн. наук; Э.И.Степанова; Т.В.Казакевич; Л.А.Рычкова
2. УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по управлению качеством продукции и стандартам от 30.03.90 N 731
3. Срок первой проверки - 1994 г. Периодичность проверки - 5 лет
4. ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
5. ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ
Обозначение НТД, на который дана ссылка |
Номер пункта |
|||
2.1 |
||||
2.1 |
||||
2.1 |
||||
2.1 |
||||
2.1 |
||||
2.1 |
||||
2.1 |
||||
2.1 |
||||
ГОСТ 6672-75 |
2.1 |
|||
2.1 |
||||
ГОСТ 7852-76 |
2.1 |
|||
2.1 |
||||
2.1 |
||||
ГОСТ 9284-75 |
2.1 |
|||
2.1 |
||||
2.1 |
||||
ГОСТ 10778-83 |
2.1 |
|||
2.1 |
||||
ГОСТ 13830-84 |
2.1 |
|||
2.1 |
||||
ГОСТ 20292-74 |
2.1 |
|||
ГОСТ 24104-88 |
2.1 |
|||
2.1 |
||||
ТУ 3-3.154-80 |
2.1 |
|||
ТУ 6-09-4185-76 |
2.1 |
|||
ТУ 6-14-937-78 |
2.1 |
|||
ТУ 64-1-2950-77 |
2.1 |
|||
ТУ 81-05-80-75 |
2.1 |
|||
ТУ 16-681.032-84 |
2.1 |
Настоящий стандарт распространяется на невыделанные меховые шкурки и шубную овчину и устанавливает методы определения структурной поврежденности и бактериальной зараженности кожевой ткани меховых шкурок и шубной овчины всех способов консервирования с помощью исследований под микроскопом окрашенных гистологических срезов кожевой ткани и качественных реакций на водной вытяжке кожевой ткани.
Применение методов предусматривается на стадии научно-исследовательских и предварительных испытаний. Применение метода качественных реакций на водной вытяжке из кожевой ткани применяется при разногласиях в оценке качества сырья, поступившего на предприятия меховой промышленности.
1. МЕТОД ОТБОРА ОБРАЗЦОВ
1.1. Для определения структурной поврежденности и бактериальной зараженности кожевой ткани от производственной партии отбирают не менее 10 шкурок методом систематического отбора: первую шкурку отбирают произвольно, а последующие - через одинаковое число шкурок, равное частному от деления объема партии на объем выборки.
1.2. Из каждой отобранной шкурки в огузочной части или у основания задней лапки вырезают образцы размером 20х10 мм.
Для приготовления водной вытяжки кожевой ткани допускается отбор образцов в виде полосок, вырезанных по периметру шкурки.
1.3. При наличии на поверхности отобранных шкурок признаков поражения ее микроорганизмами образцы для анализов отбирают с пораженного и непораженного участков.
2. АППАРАТУРА, МАТЕРИАЛЫ И РЕАКТИВЫ
Для проведения анализов должны применяться:
микротом замораживающий МЗ-2 по ТУ 64-1-2950;
микроскоп световой биологический Биолам Р по ТУ 3-3.154;
электрошкаф сушильный лабораторный по ТУ 16-681.032;
весы лабораторные по ГОСТ 24104;
термометр лабораторный;
стекла предметные для микропрепаратов по ГОСТ 9284;
стекла покровные для микропрепаратов по ГОСТ 6672;
бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026;
колбы вместимостью 100 см по ГОСТ 25336;
шпатель по ГОСТ 10778;
игла гистологическая препаровальная прямая;
пробки резиновые по ГОСТ 7852;
вата по ГОСТ 5556;
воронки стеклянные по ГОСТ 25336;
пробирки стеклянные по ГОСТ 25336;
пипетка вместимостью 2 см по ГОСТ 20292;
ступка и пестик фарфоровые по ГОСТ 9147;
мензурка вместимостью 500 см по ГОСТ 1770;
формалин технический по ГОСТ 1625, раствор с массовой долей 4%;
соль поваренная пищевая по ГОСТ 13830;
эозин по ТУ 6-09-4185, водный раствор с массовой долей 0,1%
спирт этиловый ректификованный технический по ГОСТ 18300, раствор с объемной долей 96% и 70%;
метиленовый голубой по ТУ 6-14-937, водный и спиртовой раствор с массовой долей 1%;
бура по ГОСТ 8429;
кислота уксусная по ГОСТ 61;
ацетон по ГОСТ 2603;
ксилол по ГОСТ 9949;
толуол по ГОСТ 5789;
вода дистиллированная по ГОСТ 6709;
бальзам кедровый сибирский по ТУ 81-05-80;
крахмал растворимый по ГОСТ 10163, раствор с массовой долей 0,5%;
калий йодистый по ГОСТ 4232;
йод по ГОСТ 4159.
3. ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ
3.1. С образцов, отобранных по п.1.2, состригают волосяной покров.
3.2. Подготовка к проведению микроскопического анализа
3.2.1. Раствор формалина с массовой долей 4% готовят следующим образом: 4 г формалина с массовой долей 40% растворяют в 100 см водопроводной воды с добавлением 5 г поваренной соли на 100 см
раствора формалина.
3.2.2. Раствор этилового спирта с объемной долей 70% готовят следующим образом: к 70 см этилового спирта с объемной долей 96% добавляют 26 см
дистиллированной воды.
3.2.3. Водный раствор эозина с массовой долей 0,1% готовят следующим образом: 0,1 г эозина растворяют в 100 см дистиллированной воды при температуре (20±2) °С.
3.2.4. Спиртовой раствор метиленового голубого с массовой долей 1% (раствор N 1) готовят следующим образом: 1 г метиленового голубого растворяют в 100 см этилового спирта с объемной долей 70% при температуре (20±2) °С.
3.2.5. Раствор метиленового голубого с бурой с массовой долей метиленового голубого 1% (раствор N 2) готовят следующим образом: 2 г буры растворяют в 100 см дистиллированной воды, подогретой до (80±2) °С, после чего добавляют 1 г метиленового голубого. Раствор выдерживают в помещении не менее месяца после приготовления при температуре не ниже (20±2) °С.
3.2.6. Смесь красителей для окрашивания срезов готовят следующим образом: к 10 см раствора N 1 (п.3.2.4) добавляют 2-3 капли раствора N 2 (п.3.2.5) и 10 см
дистиллированной воды.
3.2.7. Обезвоживающие срезы растворы, состоящие из ацетона, ксилола или толуола, готовят в следующих соотношениях:
раствор N 3 - к 95 частям ацетона добавляют 5 частей ксилола или толуола;
раствор N 4 - к 70 частям ацетона добавляют 30 частей ксилола или толуола;
раствор N 5 - к 30 частям ацетона добавляют 70 частей ксилола или толуола.
3.2.8. Раствор кедрового сибирского бальзама готовят следующим образом: для получения густого раствора консистенции сиропа куски сухой смолы заливают растворителем (ксилолом или толуолом) с таким расчетом, чтобы он покрывал смолу. После растворения смолы выбирают раствор желательной консистенции или дают немного испариться растворителю, или добавляют еще сухой смолы. Растворение ускоряется при проведении процесса в сушильном электрошкафу при температуре 50-60 ° C.
3.2.9. Обводнение кожевой ткани образцов, отобранных от консервированных шкурок, проводится в водопроводной воде с добавлением 3-5 г поваренной соли на 100 см воды при температуре воды (30±2) °С в течение 2 ч или при температуре воды (20±2) °С в течение 5-6 ч при периодическом перемешивании. Объем воды должен быть не менее 400 см
на 10 образцов.
3.2.10. Фиксация кожевой ткани образцов проводится в растворе формалина с массовой долей 4%. Продолжительность фиксации не менее 2 ч при температуре раствора формалина (30±2) °С или 12-24 ч при температуре раствора (20±2) °С. Объем фиксирующего раствора должен быть не менее 150 см на 5 образцов.
3.2.11. После фиксации образцы кожевой ткани промывают в проточной воде не менее 1 ч.
3.2.12. Приготовление срезов с плоскостью сечения по ходу корней волос проводят на замораживающем микротоме. Толщина среза должна быть не более 40-60 мк. Срезы помещают в чашечки с дистиллированной водой.
3.2.13. Полученные срезы окрашивают в смеси красителей, приготовленной по п.3.2.6, при температуре (20±2) °С в течение 5-10 мин.
После окраски срезы промывают в течение 1-2 мин дистиллированной водой, дифференцируют быстрым погружением в подкисленной воде (2-4 капли уксусной кислоты на 20 см дистиллированной воды) и дважды промывают в дистиллированной воде в течение 1-2 мин.
3.2.14. Окрашивание срезов в водном растворе эозина с массовой долей 0,1% проводят в течение 2-3 мин с последующим промыванием в дистиллированной воде в течение 1-2 мин.
3.2.15. Обезвоживание срезов проводят в растворах, приготовленных по п.3.2.7, последовательно перенося срезы через растворы N 3, 4 и 5.
Перенос срезов в указанные растворы и в последующий раствор чистого ксилола или толуола проводят на шпателе так, чтобы срез был полностью расправлен.
Перед погружением в раствор N 3 со среза осторожно удаляют излишек воды фильтровальной бумагой. После погружения срез сразу же вынимают и переносят в раствор N 4, где его оставляют на 5-6 мин, затем срез переносят в раствор N 5 на 10-15 мин. При загрязнении растворы заменяют новыми.
3.2.16. Просветление срезов проводят в чистом ксилоле или толуоле в течение 8-10 мин.
3.2.17. Окрашенные и обезвоженные срезы осторожно переносят с помощью шпателя и препаровальной иглы на предметное стекло, на поверхность среза наносят каплю кедрового бальзама и помещают под покровное стекло.
3.3. Подготовка к проведению анализа с помощью качественных реакций на водной вытяжке кожевой ткани.
3.3.1. От каждого образца, отобранного по п.1.2, берут навеску массой 1 г, взвешенную с погрешностью не более 0,1 г.
3.3.2. Водную вытяжку кожевой ткани с массовой долей 10% готовят следующим образом: навеску кожевой ткани из образцов, приготовленных по п.3.3.1, массой 10 г взвешивают с погрешностью не более 0,1 г, ополаскивают дистиллированной водой для снятия загрязнений с поверхности, измельчают и помещают в колбу вместимостью 100 см.
В колбу пипеткой вливают 100 см кипяченой дистиллированной воды, охлажденной до температуры (20±2) °С, закрывают пробкой, хорошо взбалтывают и оставляют в покое на 1 ч. Затем содержимое колбы взбалтывают и фильтруют через вату в сухую колбу.
3.3.3. Водный раствор метиленового голубого с массовой долей 1% готовят следующим образом: 1 г метиленового голубого растворяют в 100 см дистиллированной воды при температуре (20±2) °С.
3.3.4. Раствор крахмала с массовой долей 0,5% готовят следующим образом: 0,5 г крахмала размешивают в 20 см дистиллированной воды при температуре (20±2) °С, затем при постоянном перемешивании добавляют полученный раствор к 80 см
кипящей воды. Раствор кипятят 2-3 мин.
3.3.5. Раствор Люголя готовят следующим образом: в ступку вместимостью 50 см помещают 1 г кристаллического йода и 2 г йодистого калия, смесь растирают пестиком в небольшом количестве воды, переносят в мензурку вместимостью 500 см
и доводят общий объем водой до 300 см
.
4. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
4.1. Проведение микроскопического анализа.
4.1.1. Приготовленные по п.3.2.17 препараты помещают на предметный столик микроскопа.
Изучение препаратов проводят сначала при малом увеличении (объектив 10, окуляр 7
; 10
), позволяющем получить представление об общем характере структуры, затем при большом увеличении микроскопа (объективы 20
; 40
; 90
; окуляр 7
; 10
; 15
).
4.1.2. За критерий оценки структурной поврежденности и бактериальной зараженности кожевой ткани меховых шкурок и шубной овчины приняты показатели: сохранность структурных компонентов кожевой ткани; способность к избирательному окрашиванию отдельных структур с выявлением клеточного строения; отсутствие или наличие бактерий в толще кожевой ткани.
Нарушение сохранности структурных компонентов кожевой ткани меховых шкурок и шубной овчины может быть вызвано воздействием на нее автолиза, бактерий, высоких температур, химических веществ, а в шкурках с интенсивно развитыми жировыми включениями - продуктов окисления жировых и тучных клеток, вызывающих образование жировой гари, а также пустот и щелей.
4.1.3. При окрашивании срезов метиленовым голубым с бурой и эозином ядра клеточных структур бактерии окрашиваются интенсивно в сине-фиолетовый цвет, но бактерии значительно уступают по своим размерам клеточным ядрам. Коллагеновые волокна сосочкового и сетчатого слоев окрашиваются в розовый цвет.
4.1.4. Для характеристики степени структурной поврежденности и бактериальной зараженности кожевой ткани меховых шкурок приняты четыре градации:
структурные повреждения и бактериальная зараженность отсутствуют;
слабая степень поврежденности и бактериальной зараженности;
средняя степень поврежденности и бактериальной зараженности;
сильная степень поврежденности и бактериальной зараженности.
4.1.4.1. Нормальными (структурные повреждения и бактериальная зараженность отсутствуют) считаются шкурки, у которых наблюдается полная сохранность микроструктуры с четким выявлением ядер клеток. Коллагеновые пучки с четкими контурами и равномерной окраской. Плотный контакт эпидермиса с дермой. Внутреннее корневое влагалище волосяного фолликула интенсивно окрашено в сине-фиолетовый цвет со слабым выявлением границ составляющих его веретенообразных клеток. Кожевая ткань не содержит бактерий или они имеются только на мездровой поверхности шкуры.
4.1.4.2. К шкуркам со слабой степенью поврежденности и бактериальной зараженности относятся такие, у которых окраска ядер клеточных структур несколько ослаблена. Коллагеновые пучки с четкими контурами и равномерной окраской. Плотный контакт эпидермиса с дермой. В отдельных волосяных фолликулах могут быть первые признаки повреждения внутреннего корневого влагалища, выражающиеся в появлении промежутков между составляющими его веретенообразными клетками, т.е. в нарушении их спаянности. В нижней части сетчатого слоя кожевой ткани наблюдаются единичные бактерии.
4.1.4.3. К шкуркам со средней степенью поврежденности и бактериальной зараженности относятся такие, у которых окраска ядер клеточных структур резко ослаблена. Эпидермис с признаками потери связи его с дермой (отслоен). В отдельных волосяных фолликулах четко выражены повреждения (нарушение луковицы, распад оболочки внутреннего корневого влагалища на веретенообразные клетки). В сетчатом слое наблюдаются набухшие коллагеновые пучки с нечеткими размытыми контурами (первые признаки желатинизации коллагена).
Бактерии проникают глубоко в сосочковый и сетчатый слои кожевой ткани, образуя небольшие скопления.
4.1.4.4. К шкуркам с сильной степенью поврежденности и бактериальной зараженности относятся такие, у которых окраска ядер клеточных структур практически отсутствует. Подавляющее число волосяных фолликул с глубокими разрушениями (распад оболочек и луковиц). Эпидермис отслоен или полностью отсутствует. Наблюдается сильная желатинизация и растворение коллагеновых пучков, особенно на границе сосочкового и сетчатого слоев.
Возможно окрашивание коллагеновых пучков на отдельных участках в сине-фиолетовый цвет (явление базофилии). Иногда коллагеновые пучки могут быть сплавлены в специфические образования неправильной формы с наличием пустот между ними. Кожевая ткань пронизана бактериями.
К сильно поврежденным относятся также шкурки, в которых разрушения указанной степени захватывают или корни волос, или коллаген дермы.
4.2. Проведение анализа с помощью качественных реакций на водной вытяжке кожевой ткани
4.2.1. В четыре пробирки (N 1; 2; 3; 4) наливают по 2 см дистиллированной воды и по 2 капли раствора Люголя, взбалтывают, затем в пробирки N 1 и 2 добавляют по 2 капли водного раствора крахмала с массовой долей 0,5% (окраска раствора в пробирке становится синяя), другие две пробирки N 3 и 4 - по 1 капле водного раствора метиленового голубого с массовой долей 1% (окраска раствора в пробирке становится коричневато-бурая).
Затем в пробирки N 2 и 4 добавляют по 2 см водной вытяжки кожевой ткани, приготовленной по п.3.3.2, а в пробирки N 1 и 3 по 2 см
дистиллированной воды.
Растворы в пробирках N 1 и 3 являются контрольными.
4.2.2. Степень структурной поврежденности и бактериальной зараженности кожевой ткани невыделанных меховых шкурок и шубной овчины по качественным реакциям адсорбции йода с метиленовым голубым и крахмалом определяют по изменению во времени окраски раствора с метиленовым голубым в сравнении с контрольным раствором от коричнево-бурого до синего, с крахмалом - по обесцвечиванию первоначального синего раствора.
4.2.3. Время протекания реакций (изменение окраски или исчезновение ее) зависит от степени структурной поврежденности и бактериальной зараженности кожевой ткани шкур, из которых приготовлена водная вытяжка кожевой ткани.
4.2.4. В водных вытяжках, приготовленных из шкур со слабой степенью поврежденности и бактериальной зараженности, незначительные изменения в окраске или состоянии раствора наблюдаются через 0,5-1 ч.
В водных вытяжках, приготовленных из шкур со средней степенью поврежденности и бактериальной зараженности, реакции протекают через 10-30 мин. В водных вытяжках, приготовленных из шкур с сильной степенью поврежденности и бактериальной зараженности, реакции протекают через 1-10 мин, в отдельных случаях изменение окраски растворов наблюдается мгновенно, после добавления в пробирки с реактивами водной вытяжки кожевой ткани.
Текст документа сверен по:
официальное издание
М.: Издательство стандартов, 1990