МУК 4.1.1229-03  

     
     
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

     
     
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

     
Определение остаточных количеств тетраконазола
в воде, почве, зеленой массе, зерне и соломе зерновых культур
методом газожидкостной хроматографии

     
     
Дата введения 2003-07-01

     
     
     УТВЕРЖДЕНЫ Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации Г.Г.Онищенко 16 марта 2003 г.
          
     

1. Вводная часть

     
     Торговое наименование: Эминент.
     
     Фирма-производитель: Томен Корпорейшн (Япония).
     
     Действующее вещество: тетраконазол.
     
     (RS)-2-(2,4-дихлорфенил)-3-(1Н-1,2,4-триазол-1-ил) пропил-1,1,2,2-тетрафторэтиловый эфир.
     
     Структурная формула:
          

          
     Молекулярная масса: 372,1.
     
     Эмпирическая формула: CHCIFNO.
     
     Химически чистый тетраконазол представляет собой бесцветную вязкую жидкость, разлагается при 240 °С; давление паров 0,18 мРа, показатель преломления 1,432 (20 °С).
     
     Коэффициент распределения в системе н-октанол-вода =3/56 (20 °С).
     
     Растворимость: в воде 156 мг/л (рН 7; 20 °С); хорошо растворим в 1,2-дихлорэтане, ацетоне, метаноле.
     
     Стабилен в разбавленных водных растворах с рН 5-9.
     
     Область применения: фунгицид широкого спектра действия.
     
     Гигиенические нормативы:
     
     ОДК в почве - 0,4 мг/кг;
     
     ПДК в воде водоемов - 0,01 мг/дм;
     
     МДУ в зерне хлебных злаков - 0,2 мг/кг.
     
     

2. Методика определения остаточных количеств тетраконазола в воде, почве,
зерне и соломе зерновых культур методом газожидкостной хроматографии

     
2.1. Основные положения  

     
2.1.1. Принцип метода  

     
     Методика основана на определении тетраконазола методом газожидкостной хроматографии с использованием электронозахватного детектора (ДЭЗ или ДПР) после его извлечения из образцов органическим растворителем, очистке путем перераспределения между двумя жидкими фазами и колоночной хроматографии на флорисиле. Идентификация тетраконазола проводится по времени удерживания, количественное определение - методом абсолютной градуировки.
     

2.1.2. Метрологическая характеристика метода  

     
     Метрологическая характеристика метода представлена в табл.1.
     
     

Таблица 1

     
Метрологическая характеристика метода

     
     
2.1.3. Избирательность метода  

     
     Присутствие других пестицидов, близких по химическому строению и области применения, определению не мешает.
     

2.2. Реактивы и материалы   

     
2.3. Приборы и посуда  

2.4. Отбор проб  

     
     Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79). Отобранные пробы зеленых растений хранят в полиэтиленовой таре в холодильнике при 0-4 °С в течение недели, в морозильной камере при -18 °С в течение 6 месяцев. Пробы зерна и соломы для определения остатков в урожае хранят в бумажной или тканевой упаковке при комнатной температуре. Для длительного хранения пробы почвы подсушиваются при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут храниться в течение года. Перед анализом сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм, зерно и солому измельчают на лабораторной мельнице.
     

2.5. Подготовка к определению

2.5.1. Кондиционирование колонки  

     
     Готовую насадку (5% SE-30 или ХЕ-60 на хроматоне N-Super) засыпают в стеклянную колонку, уплотняют под вакуумом, колонку устанавливают в термостате хроматографа, не подсоединяя к детектору, и кондиционируют в токе азота при температуре 250 °С в течение 8-10 часов.
     

2.5.2. Приготовление стандартного и градуировочных растворов

     
     Берут точную навеску тетраконазола и растворяют в ацетоне таким образом, чтобы получить стандартный раствор с концентрацией 1 мг/мл. Стандартный раствор можно хранить в холодильнике при температуре 0-4 °С в течение 6 месяцев.
     
     Градуировочные растворы в гексане с концентрациями 0,001, 0,0005, 0,0002, 0,0001 и 0,00005 мг/мл готовят из стандартного раствора методом последовательного разбавления по объему. Градуировочные растворы хранятся в холодильнике в течение 1 месяца.
     

2.5.3. Построение градуировочного графика  

     
     Для построения градуировочного графика в хроматограф вводят по 1 мкл каждого из градуировочных растворов (3 параллельных определения для каждой концентрации, не менее 4-х точек по диапазону измеряемых концентраций), измеряют высоты или площади пиков и строят график зависимости среднего значения высоты или площади пика от концентрации тетраконазола в градуировочном растворе (мкг/мл).
     

2.6. Проведение определения  

     
2.6.1. Определение тетраконазола в воде  

     
     В делительную воронку емкостью 250 мл помещают пробу воды объемом 100 мл, добавляют 1-2 г хлористого натрия и экстрагируют тетраконазол 50 мл дихлорметана дважды, встряхивая воронку каждый раз не менее 3-х мин. После полного разделения слоев отделяют нижний органический слой, пропуская его через безводный серно-кислый натрий (не менее 30 г), предварительно промытый дихлорметаном. Объединенный экстракт упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре не выше 35 °С.
     
     Сухой остаток растворяют в 2 мл смеси гексан-ацетон (9:1) и проводят очистку экстракта на колонке с флорисилом.
     
     Колонку готовят следующим образом: в нижнюю часть колонки помещают тампон из обезжиренной ваты, к 8 г флорисила добавляют 15 мл смеси гексан-ацетон (9:1) и заполняют колонку этой суспензией. После осаждения флорисила (уровень растворителя над столбиком флорисила 15-20 мм) в колонку добавляют безводный сульфат натрия слоем 10 мм. Перед внесением пробы колонку промывают 20 мл той же смеси гексан-ацетон и понижают уровень растворителя до верхнего слоя сорбента. Экстракт количественно переносят в колонку, обмывая дважды колбу 1-2 мл смеси гексан-ацетон. Элюируют тетраконазол той же смесью гексан-ацетон (9:1), отбрасывая первую фракцию 20 мл и собирая последующие 50 мл.
     
     Растворитель выпаривают досуха на ротационном испарителе при температуре не выше 35 °С. Сухой остаток растворяют 1 мл этилацетата и вводят в хроматограф 1 или 2 мкл полученного раствора.
     

2.6.2. Определение тетраконазола в почве  

     
     Образец сухой почвы массой 50 г помещают в коническую колбу с притертой пробкой, добавляют 15 мл дистиллированной воды, встряхивают и оставляют на сутки. На следующий день в колбу добавляют 100 мл смеси метиловый спирт-вода (9:1 по объему) и экстрагируют тетраконазол на ультразвуковой бане в течение 30 мин. Затем фильтруют через бумажный фильтр в круглодонную колбу емкостью 500 мл. Экстракцию повторяют еще 2 раза по 5 мин, используя по 50 мл той же смеси. (При анализе почв с содержанием гумуса более 2,5% количество экстракций увеличивают.) Колбу ополаскивают 20 мл смеси и добавляют к объединенному водно-спиртовому экстракту. Метиловый спирт отгоняют на ротационном испарителе при температуре не выше 35 °С. К остатку добавляют дистиллированную воду до объема 100 мл, вносят 1-2 г хлористого натрия и переносят водный экстракт в делительную воронку.
     
     Далее подготовку пробы к газохроматографическому анализу проводят так же, как для водных образцов (см. п.2.6.1). При элюировании тетраконазола из колонки с флорисилом первую фракцию 30 мл отбрасывают, последующие 70 мл собирают. После выпаривания растворителя досуха сухой остаток растворяют в 1 мл этилацетата и 1-2 мкл раствора вводят в хроматограф.
     

2.6.3. Определение тетраконазола в зеленой массе, соломе и зерне зерновых культур  

     
     Навеску зеленых растений или соломы 10 г измельчают (или мелко нарезают), зерна 10 г измельчают с помощью лабораторной мельницы, помещают в коническую колбу и заливают 50-100 мл раствора ацетон-вода (50:50) таким образом, чтобы проба была полностью покрыта раствором, и экстрагируют тетраконазол на ультразвуковой установке в течение 15 мин (или оставляют на ночь). Водно-ацетоновый экстракт фильтруют через бумажный фильтр. Остаток на фильтре промывают дважды водным ацетоном порциями по 25 мл. Объединенный фильтрат помещают в делительную воронку и производят очистку переэкстракцией в н-гексан, добавляя хлористый натрий из расчета 1 г на 50 мл раствора. Тетраконазол экстрагируют н-гексаном трижды порциями по 25-30 мл. Объединенные гексановые экстракты фильтруют через бумажный фильтр и сушат над безводным сульфатом натрия. Полученный экстракт упаривают на ротационном испарителе или под вакуумом на водяной бане при температуре 40 °С досуха. Остаток растворяют в 1-10 мл гексана.
     
     При определении остатков в урожае, когда измерение концентрации проводят на высоких шкалах чувствительности хроматографа, может потребоваться дополнительная очистка экстракта. В этом случае проводят очистку на колонке с флорисилом так же, как в п.2.6.1.
     
     Вводят в хроматограф 1 мкл очищенного экстракта.
     

2.6.4. Условия хроматографирования  

     
     
2.6.5. Обработка результатов анализа  

     
     Количественное определение проводили методом абсолютной градуировки, содержание тетраконазола в образце воды, почвы или растений (, мг/кг) вычисляли по формуле:
     

,

     
где  - высота (площадь) пика тетраконазола в стандартном растворе, мм;
     
      - высота (площадь) пика тетраконазола в анализируемой пробе, мм;
     
      - объем пробы, подготовленной для хроматографического анализа, мл;
     
      - навеска анализируемого образца, г;
     
      - концентрация стандартного раствора тетраконазола, мкг/мл;
     
      - коэффициент извлечения тетраконазола, определяемый в предварительном опыте по внесению тетраконазола в контрольный образец.
     
     Содержание остаточных количеств тетраконазола в анализируемом образце вычисляют как среднее из 3-х параллельных определений.
          
     

3. Требования техники безопасности

     При проведении работы необходимо соблюдать требования инструкции "Основные правила безопасной работы в химической лаборатории", общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, а также инструкций по эксплуатации газового хроматографа и электрооборудования до 400 В.
          
     

4. Контроль погрешности измерений
 

     Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95 "ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа".
          
     

5. Разработчики

     
     Блинова Т.Ф., Цибульская И.А., Долженко В.И. Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений.
     
     
     
Текст документа сверен по:
официальное издание
Определение остаточных количеств
пестицидов в пищевых продуктах,
сельскохозяйственном сырье и объектах
окружающей среды: Сборник методических указаний.
Выпуск 2. Часть 5. -
М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии
Роспотребнадзора, 2006