МУК 4.1.768-99

     
     
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

     
Методика количественного определения
экзогенного фенола в биосредах (моча)

     
     
Дата введения 1999-09-06

     
     
     УТВЕРЖДЕНО Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко 6 июля 1999 г.
     
     
     Методические указания разработаны в соответствии с требованиями ГОСТа 8.563-96 "Методики выполнения измерений" и ГОСТа Р 1.5-92. Методика анализа метрологически аттестована и обеспечивает определение фенола в диапазоне концентраций 0,1-1,2 мкг/см.
     

     Фенол - бесцветные кристаллы с характерным запахом. Т - 181,75 °С, Т - 40,9 °С. Фенол растворим в воде и органических растворителях. Фенол относится ко 2 классу опасности.
     
     Методика обеспечивает выполнение измерений с суммарной погрешностью результата измерений 12,6% при доверительной вероятности 0,95.
     

Сущность метода

     
     Метод основан на перегонке фенола с водяным паром и фотометрическом определении по азокрасителю, образующемуся при взаимодействии фенола с диазотированным паранитроанилином.
     
     Определению мешают крезолы.
     
     Нижний предел измерения в объеме пробы - 0,05 мкг.
     
     Длительность анализа - 30 мин.
     
     

Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы

     
     При выполнении применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы.
     

Требования к безопасности

     
     Помещение для проведения измерений должно соответствовать требованиям "Пожарных норм проектирования зданий и сооружений" (СНиП ПА-5-700) и "Санитарных норм проектирования промышленных предприятий" (СН-245-71) и СП и П-74.
     
     При выполнении работ должны быть соблюдены меры npoтивопожарной безопасности в соответствии с требованиями ГОСТа 12.1.004-85 и правила техники безопасности в соответствии ГОСТом 12.1.007-76.
     
     При работе необходимо соблюдать "Правила по технике безопасности и производственной санитарии при работе в химических лабораториях", утверждены МЗ СССР 20.12.82 (М.,1981), и "Правила устройства и безопасной эксплуатации сосудов, работающих под давлением", утверждены Госгортехнадзором СССР 27.11.87 (М.: Недра, 1989).
     
     При работе с реактивом соблюдают требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТу 12.1.005-88.
     
     При выполнении измерений с использованием спектрофотометра соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТом 12.1.019-79 и инструкции по эксплуатации прибора.
     
     

Требования к квалификации оператора

     
     К выполнению измерений допускаются лица, имеющие квалификацию не ниже инженера-химика и опыт работы на спектрофотометре.
     
     

Условия измерений

     
     При проведении процессов приготовления растворов и подготовки проб к анализу соблюдают следующие условия:
     
      температура воздуха (20±5) °С;
     
      атмосферное давление 630-800 мм рт.ст.;
     
      влажность воздуха - не более 80% при температуре 25 °С.
     
     Выполнение измерений на спектрофотометре проводят в условиях, рекомендуемых технической документацией по прибору.
     
     

Подготовка к выполнению измерений

     
     Перед выполнением измерений проводят следующие работы: приготовление растворов, установление градуировочной характеристики, отбор проб.
     

Приготовление растворов

     
     Соляная кислота, 4%-ный раствор. 10,0 см концентрированной соляной кислоты (=1,19 г/см) добавляют к 100,0 см дистиллированной воды.
     
     Нитрит натрия, 25%-ный раствор. 25 г нитрита натрия растворяют в 100 см дистиллированной воды.
     
     Паранитроанилин, 0,1%-ный раствор. 0,1 г паранитроанилина, предварительно высушенного при температуре 60 °С в течение 2 ч, растворяют в 4%-ном растворе соляной кислоты в мерной колбе вместимостью 100 см. Перед употреблением раствор охлаждают до 0-5 °С.
     
     Диазотированный паранитроанилин. 12,5 см охлажденного paствора паранитроанилина приливают в мерную колбу вместимостью 50 см, прибавляют постепенно 2,5 см раствора нитрита натрия и через несколько минут доводят объем до 50 см дистиллированной водой. Диазотирование паранитроанилина следует проводить в вытяжном шкафу.
     
     Щавелевая кислота, 10%-ный раствор. 10 г щавелевой кислоты растворяют в 100 см дистиллированной воды.
     
     Исходный раствор для градуировочной характеристики, 1 мг/см. В мерную колбу вместимостью 50 см помещают 20-30 см дистиллированной воды и точную навеску свежеперегнанного фенола 50 мг и доводят объем до 50 см дистиллированной водой.
     
     Рабочий раствор для установления градуировочной характеристики с содержанием фенола 10 мкг/см готовится путем разбавления перед отгонкой.
     

Установление градуировочной характеристики

     
     Градуировочную характеристику, выражающую зависимость оптической плотности от концентрации фенола в пробе, устанавливают по 3 сериям растворов.
     
     Растворы для градуировки готовят в мерных колбах вместимостью 100 см. Для этого в каждую колбу вносят раствор согласно таблице.
     
     

Таблица

     
Стандартные смеси для установления градуировочной характеристики при определении
концентрации фенола (фрагмент шкалы)

     
     
     Для установления градуировочной характеристики в колбу для перегонки помещают 5 см стандартного раствора, добавляют щавелевую кислоту до кислой реакции среды по лакмусовой бумаге и проводят перегонку с водяным паром. Отгоняют 10 см пробы. К отгону объемом 5 см добавляют 0,04 г карбоната натрия и тщательно перемешивают, затем добавляют 0,4 см диазотированного паранитроанилина и через 20 мин замеряют оптическую плотность на спектрофотометре в кюветах с расстоянием между рабочими гранями 10 мм при 494 нм.
     

Отбор проб

     
     Отбор проб мочи в объеме 100 см производится в тщательно вымытый стеклянный сосуд с притертой пробкой. Анализ мочи проводить сразу или хранить в холодильнике не более 12 ч после отбора пробы.
     
     

Выполнение измерений

     
     Для анализа берут 5 см мочи, наливают в колбу для перегонки, добавляют щавелевую кислоту до кислой реакции среды по лакмусовой бумаге и ведут перегонку с водяным паром. Из полученного отгона отбирают 5 см пробы, добавляют 0,04 г карбоната натрия и тщательно перемешивают, затем добавляют 0,4 см раствора диазотированного паранитроанилина. Содержимое пробирки вновь энергично встряхивают и через 20 мин замеряют оптическую плотность растворов в кюветах с расстоянием между рабочими гранями 10 мм при 494 нм.
     
     

Вычисление результатов измерений

     
     Концентрацию () фенола в моче (мкг/см) вычисляют по формуле:
     

,

     
где  - концентрация вещества по градуировочному графику, мкг/см;
     
      - объем мочи, взятой для перегонки, см.
     
      - объем перегнанной пробы, мм.
     
     

Внутренний оперативный контроль

     Внутренний оперативный контроль качества результатов контрольного химического анализа (сходимость, воспроизводимость, точность) осуществляют с целью получения оперативной информации о качестве анализов и принятия при необходимости оперативных мер по его повышению (МИ 2335-95).
     

Оперативный контроль сходимости

     
     Периодичность контроля сходимости измерений зависит от количества рабочих измерений (2 параллельные пробы). Отбирают 2 пробы мочи и каждую из них анализируют в соответствии с прописью методики.
     
     Результаты признаются удовлетворительными, если выполняется условие:
     

,

     
где  и  - результаты анализа 1 и 2 проб;

      - допустимое расхождение между двумя результатами одной и той же пробы (=35%);
     
      - среднее значение между двумя определениями.
     

Оперативный контроль точности

     
     Периодичность контроля погрешности измерений зависит от количества рабочих измерений за контролируемый период и определяется планами контроля.
     
     Образцами для контроля являются представительные пробы биосред, к которым делаются добавки в виде раствора. Отбирают 2 пробы и к одной из них делают добавку в виде раствора таким образом, чтобы их содержание увеличилось по сравнению с исходным на 50-150%. Каждую пробу анализируют в точном соответствии с прописью методики и получают результат анализа исходной рабочей пробы  и рабочей пробы с добавкой . Результаты анализа исходной рабочей пробы  и рабочей пробы с добавкой  получают не по возможности, а в одинаковых условиях, т.е. их получает один аналитик с использованием одного набора мерной посуды, одной партии реактивов и т.д.
     
     Результаты контроля признаются удовлетворительными, если выполняется условие:
     

,

где  - добавка к пробе в виде раствора с концентрацией мкг/см;
     
      - норматив оперативного контроля погрешности, мкг/см.
     
     При внешнем контроле (=0,95) принимают
     

,

     
где  и  - характеристики погрешностей для исходной пробы и пробы с добавкой, мкг/см.
     

 и .

     
     При внутрилабораторном контроле (=0,90) принимают, что
          

.

     
     При превышении оперативного контроля погрешности эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, и их устраняют.
     
     
     
Текст документа сверен по:
официальное издание
Определение химических соединений
в биологических средах: Сборник методических
указаний МУК 4.1.763-4.1.779-99. -
М.: Федеральный центр
госсанэпиднадзора Минздрава России, 2000