МУК 4.1.1214-03

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

     
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Измерение остаточных количеств Азоксистробина (ICIA 5504) и его геометрического изомера (R-230310) в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

     
     
Дата введения 2003-07-01

     
     
     1. Подготовлены: Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф.Эрисмана (чл.-кор. РАМН, проф. В.Н.Ракитский, проф. Т.В.Юдина); Московской сельскохозяйственной академией им. К.А.Тимирязева (проф. В.А.Калинин, к.хим.н. Довгилевич А.В.); при участии Департамента госсанэпиднадзора Минздрава России (А.П.Веселов). Разработчики методик указаны в конце каждой из них.
     
     2. Методические указания рекомендованы к утверждению Комиссией по госсанэпиднормированию при Минздраве России.
     
     3. УТВЕРЖДЕНЫ Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г.Онищенко 16 марта 2003 г.
     
     4. ВВЕДЕНЫ с 1 июля 2003 г.
     
     5. ВВЕДЕНЫ ВПЕРВЫЕ.
     

1. Вводная часть

     
     Фирма-производитель: Сингента АГ, Швейцария.
     
     Торговое название: Амистар Ф, СК (250 г/л), ICIA 5504, AZ5504.
     
     Название действующего вещества по ИСО: Азоксистробин.
     
     Название действующего вещества по ИСО:
     
     метил (Е)-2-{2-[6-(2-циано-фенокси)пиримидин-4-илокси]фенил}-3-метоксиакрилат.
     
     Структурная формула:
     
     

     
     
     Эмпирическая формула: СНNO.

     
     Молекулярная масса: 403,4.
     
     Химически чистый Азоксистробин представляет собой бесцветное кристаллическое вещество без запаха.
     
     Давление паров 1,1х10.
     
     Температура плавления 166 °С.
     
     Коэффициент распределения н-октанол-вода: Ko/w =440, lg P o/w =2,64.
     
     Растворимость в воде зависит от кислотности среды и составляет при 25 °С 6,2 (рН 5,2), 6,7 (рН 7,0), 5,9 (рН 9,2) мг/л.
     
     Растворимость в органических растворителях (г/л при 20 °С): ацетон - 86, ацетонитрил - 340, гексан - 0,057, дихлорметан - 400, метанол - 20, толуол - 55, этилацетат - 130, н-октанол - 1,40.
     
     Азоксистробин стабилен в водных растворах при рН 3-10 при комнатной температуре, в т.ч. при концентрациях менее 1 мкг/кг.
     
     Период полураспада в почве в полевых условиях от 3 до 39 дней. Основным путем разложения вещества в почве является фотолиз с образованием геометрического Z-изомера.
     
     Краткая гигиеническая характеристика: Азоксистробин относится к малоопасным веществам по острой оральной (ЛД /крысы/ свыше 5000 мг/кг) и дермальной (ЛД /крысы/ свыше 2000 мг/кг) токсичности, но умеренно опасным по ингаляционной (ЛД /крысы/ 0,698-0,962 мг/кг) токсичности. Не обладает побочными токсикологическими эффектами, может вызвать слабое раздражение при попадании на кожу и слизистую оболочку глаз.
     
     ОБУВ в воздухе рабочей зоны - 1,0 мг/м;
     
     Область применения: Азоксистробин - фунгицид из группы стробилуринов системного и контактного действия с длительным защитным эффектом. Высокоэффективен против возбудителей ложной и настоящей мучнистой росы, в т.ч. против рас возбудителя, устойчивых к Металаксилу и производным триазола. Зарегистрирован в России и странах СНГ в качестве фунгицида на томатах и огурцах открытого и защищенного грунта с нормой расхода 25% суспензионного концентрата 0,4-0,6 л/га, а также на виноградниках с нормой расхода 0,6-0,8 л/га при 1-2 кратной обработке. Проходит регистрационные испытания на зерновых колосовых культурах с нормой расхода при двукратной обработке посевов с нормой расхода до 1,0 л препарата на гектар.
     
     R-230310 - Z-геометрический изомер Азоксистробина.
     
     Название действующего вещества по ИСО: метил (Z)-2-{2-[6-(2-цианофенокси)-пиримидин-4-илокси]фенил}-3-метоксиакрилат.
     
     Структурная формула:
     
     

     
     
     R-230310 представляет собой кристаллический порошок желтого цвета.
     
     Физико-химические свойства близки к таковым Азоксистробина.
     
     Основной метаболит в процессе фотолиза основного вещества.
     
     Данные по токсикологии вещества фирмой не представлены.
     

2. Методика определения Азоксистробина (ICIA 5504) и его геометрического изомера (R-230310) в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

     
2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

     
     Методика основана на определении веществ методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием ультрафиолетового детектора.
     
     Отбор проб воздуха осуществляется концентрированном аэрозоля на бумажные фильтры "синяя лента". Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.
     

2.1.2. Избирательность метода

     
     В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии компонентов препаративной формы, а также пестицидов, применяемых при возделывании овощных культур и винограда.
     

2.1.3. Метрологическая характеристика метода (=0,95)

     
     Число параллельных определений - 6.
     
     Предел обнаружения в хроматографируемом объеме - 0,2 нг (измерение по п.2.7.1); 5 нг (измерение по п.2.7.2).
     
     Предел обнаружения в воздухе - 0,002 мг/м (при отборе 10 л воздуха, измерение по п.2.7.1) и 0,013 мг/м (при отборе 75 л воздуха, измерение по п.2.7.2).
     
     Диапазон определяемых концентраций - 0,002-0,02 мг/м (измерение по п.2.7.1); 0,013-0,39 мг/м (измерение по п.2.7.2).
     
     Среднее значение определения - 93,6% (для азоксистробина), 92,6% (для R-230310).
     
     Стандартное отклонение (S) - 6,00% (для азоксистробина), 5,64% (для R-230310).
     
     Относительное стандартное отклонение (DS) - 2,45% (для азоксистробина), 2,30% (для R-230310).
     
     Доверительный интервал среднего - 6,30% (для азоксистробина), 5,91% (для R-230310).
     
     Суммарная погрешность измерения не превышает 23%.
     

2.2. Реактивы, растворы, материалы

2.3. Приборы, аппаратура, посуда

2.4. Отбор проб

     
     Отбор проб воздуха рабочей зоны следует осуществлять в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 "ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны".
     
     Воздух со скоростью 5 л/мин пропускают через фильтр "синяя лента", помещенный в фильтродержатель.
     
     Для измерения концентрации вещества по п.2.7.1 на уровне 0,002 мг/м следует отобрать 10 л воздуха, по п.2.7.2 на уровне 0,013 мг/м - 75 л воздуха.
     
     Отобранные пробы можно хранить при комнатной температуре в течение 10 дней, в холодильнике - в течение месяца.
     

2.5. Подготовка к определению

2.5.1. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ (измерение по п.п.2.7.1.1 и 2.7.2)

     
     В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 500 мл ацетонитрила и доливают до метки бидистиллированной водой, перемешивают, фильтруют и дегазируют.
     

2.5.2. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ (измерение по п.2.7.1.2)

     
     В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 400 мл ацетонитрила и доливают до метки бидистиллированной водой, перемешивают, фильтруют и дегазируют.
     

2.5.3. Подготовка подвижной фазы для растворения образцов и приготовления стандартных растворов

     
     В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 250 мл ацетонитрила и доливают до метки бидистиллированной водой, перемешивают, фильтруют и дегазируют.
     

2.5.4. Кондиционирование колонки

     
     Промыть колонку для ВЭЖХ соответствующей подвижной фазой в течение 30 мин при скорости подачи растворителя 1 мл/мин (измерение по п.2.7.1) или 100 мкл/мин (измерение по п.2.7.2).
     

2.5.5. Приготовление стандартных растворов

     
     Стандартные растворы азоксистробина (ICIA 5504) и его метаболита (R-230310) с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 0,010 г вещества в ацетонитриле в мерной колбе на 100 мл. Растворы хранятся в холодильнике в течение 6 месяцев.
     
     Для приготовления основных стандартных растворов N 1 и 2, содержащих по 10 и 50 мкг/мл азоксистробина (ICIA 5504) и его метаболита (R-230310), соответственно, в мерную колбу вместимостью 100 мл помещают по 10 (N 1) или по 50 мл (N 2) стандартных растворов веществ с концентрацией 100 мкг/мл и в первом случае доводят смесью ацетонитрил-вода (25:75) до метки. Растворы хранятся в холодильнике в течение 6 месяцев.
     
     Рабочие стандартные растворы с концентрацией 0,01; 0,025; 0,05; 0,1 мкг/мл (измерение по п.2.7.1) готовят из основного стандартного раствора N 1 соответствующим последовательным разбавлением подвижной фазой для растворения образцов (п.2.5.3).
     
     Рабочие стандартные растворы с концентрацией 1,0; 4,0; 20,0 и 30,0 мкг/мл (измерение по п.2.7.2) готовят из основных стандартных растворов N 1 и 2 соответствующим последовательным разбавлением подвижной фазой для растворения образцов (п.2.5.3).
     
     Рабочие растворы хранят в холодильнике не более месяца.
     

2.5.6. Построение градуированного графика

     
     2.5.6.1. Градуировочные графики А1 и В1 (измерение по п.2.7.1).
     
     Для построения градуировочных графиков в инжектор хроматографа вводят по 20 мкл рабочего стандартного раствора смеси Азоксистробина и его метаболита с концентрацией по 0,1; 0,025; 0,05; 0,1 мкг/мл.
     
     2.5.6.2. Градуировочные графики А2 и В2 (измерение по п.2.7.2).
     
     Для построения градуировочных графиков в инжектор хроматографа вводят по 5 мкл рабочего стандартного раствора смеси Азоксистробина и его метаболита с концентрацией по 1,0; 4,0; 10,0; 20,0 и 30,0 мкг/мл.
     
     Осуществляют не менее 5 параллельных измерений. Находят среднее значение высоты хроматографического пика для каждой концентрации. Строят градуировочные графики (А1 и В1 или А2 и В2) зависимости высоты хроматографического пика в мм от концентрации азоксистробина (ICIA 5504) и его метаболита (R-230310) в растворе в мкг/мл.
     

2.6. Описание определения

     
     Фильтр с отобранной пробой переносят в химический стакан вместимостью 100 мл, заливают 10 мл ацетонитрила, оставляют на 5-7 мин, периодически перемешивая. Растворитель сливают, отжимая фильтр стеклянной палочкой. Фильтр еще дважды обрабатывают новыми порциями ацетонитрила объемом 10 мл.
     
     Объединенный экстракт упаривают в грушевидной колбе на ротационном вакуумном испарителе почти досуха, оставшийся растворитель отдувают потоком теплого воздуха, остаток растворяют в 2 мл (измерение по п.2.7.1) или 1 мл (измерение по п.2.7.2) подвижной фазы для растворения образцов (п.2.5.3), фильтруют или центрифугируют для удаления взвеси и хроматографируют.
     

2.7. Условия хроматографирования

2.7.1. Жидкостный хроматограф Waters (США) с ультрафиолетовым детекторам

     
     2.7.1.1. Хроматографическая колонка стальная, длиной 25 см, внутренним диаметром 4,6 мм, содержащая Lichrosorb RP-18, зернением 5 мкм.
     
     Температура колонки: комнатная.
     
     Подвижная фаза: ацетонитрил-вода (50:50, по объему).
     
     Скорость потока элюента: 1 мл/мин.
     
     Рабочая длина волны 255 нм.
     
     Чувствительность 0,0025 ед. абсорбции на шкалу.
     
     Объем вводимой пробы 20 мкл.
     
     Время удерживания Азоксистробина (ICIA 5504) - 6,7-6,9 мин; геометрического изомера R-230310 - 8,7-8,9 мин.
     
     2.7.1.2. Хроматографическая колонка стальная, длиной 25 см, внутренним диаметром 2,1 мм, содержащая Kromasil 100-5C8, зернением 5 мкм.
     
     Температура колонки: 35 °С.
     
     Подвижная фаза: ацетонитрил-вода (40:60, по объему).
     
     Скорость потока элюента: 1 мл/мин.
     
     Рабочая длина волны 255 нм.
     
     Чувствительность 0,0025 ед. абсорбции на шкалу.
     
     Объем вводимой пробы 20 мкл.
     
     Время удерживания Азоксистробина (ICIA 5504) - 6,25-6,53 мин; геометрического изомера R-230310 - 8,65-9,17 мин.
     
     Линейный диапазон детектирования: 0,2-2,0 нг.
     
     Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 0,1 мкг/мл, разбавляют подвижной фазой для растворения образцов (п.2.5.3).
     

2.7.2. Жидкостный хроматограф Милихром (Россия) с ультрафиолетовым детектором

     
     Хроматографическая колонка стальная, длиной 64 мм, внутренним диаметром 2 мм, содержащая Сепарон С 18, зернением 5 мкм.
     
     Температура колонки: комнатная.
     
     Подвижная фаза: ацетонитрил-вода (50:50, по объему).
     
     Скорость потока элюента: 100 мкл/мин.
     
     Рабочая длина волны 254 нм.
     
     Чувствительность 0,2 ед. абсорбции на шкалу.
     
     Объем вводимой пробы 5 мкл.
     
     Время удерживания Азоксистробина (ICIA 5504) - 5,2-5,4 мин; геометрического изомера R-230310 - 6,4-6,7 мин.
     
     Линейный диапазон детектирования: 5-150 нг.
     
     Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 30 мкг/мл, разбавляют подвижной фазой для растворения образцов (п.2.5.3).
     

2.8. Обработка результатов анализа

     
     Содержание Азоксистробина ICIA 5504 или R-230310 рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:
     

, где

     
      - содержание Азоксистробина или R-230310 в пробе воздуха, мг/м;
     
      - концентрация Азоксистробина или R-230310 в хроматографируемом растворе, найденная по калибровочному графику, мкг/мл;
     
      - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл;
     
      - объем пробы воздуха, отобранного для анализа, приведенного к стандартным условиям (давление 760 мм рт. ст., температура 20 °С), дм.
     

3. Требования техники безопасности

     
     Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами.
     

4. Контроль погрешности измерений

     
     Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95 ГСИ "Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа".
     

5. Разработчики

     
     Калинин В.А., профессор, к.с-х.н., Калинина Т.С., к.с-х.н., Довгилевич Е.В., к.биол.н., Устименко Н.В., к.биол.н., Довгилевич А.В., к.х.н.
     
     Московская сельскохозяйственная академия им. К.А.Тимирязева. 127550, Москва, Тимирязевская ул., д.53/1, УНКЦ "Агроэкология пестицидов и агрохимикатов". Телефон/факс: 976-43-26.
     
     
     
Текст документа сверен по:
официальное издание
Определение остаточных количеств пестицидов
в пищевых продуктах, сельскохозяйственном сырье
и объектах окружающей среды:
Сборник методических указаний.
Выпуск 2. Часть 1. -
М.: Федеральный центр госсанэпиднадзора
Минздрава России, 2004