- USD ЦБ 03.12 30.8099 -0.0387
- EUR ЦБ 03.12 41.4824 -0.0244
Краснодар:
|
погода |
МУК 4.1.1026-01
Методические указания
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Определение остаточных количеств Ципродинила в воде, почве, яблоках,
грушах и косточковых методом газожидкостной хроматографии
Дата введения 2003-01-01
УТВЕРЖДЕНЫ Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации Г.Г.Онищенко
1. Вводная часть
Фирма производитель: Новартис (Швейцария).
Торговое название: Хорус, Юникс.
Название действующего вещества по ИСО: Ципродинил.
Название действующего вещества по ИЮПАК: 4-циклопропил-6-метил-N-фенил-пиримидин-2-амин.
СНN |
М. м. 225,3 |
Химически чистый Ципродинил представляет собой кремовое кристаллическое вещество с запахом.
Температура плавления 75,9 °С.
Давление паров при 25 °С 5,1х10 Ра (модификация А) и 4,71х10 Ра (модификация Б).
Растворимость в органических растворителях (25 °С, г/л растворителя): ацетон - 610, этанол - 160, н-гексан - 30, толуол - 460, р-октанол - 160.
Растворимость в воде (мг/л) - 20 (рН 5,5), 13 (рН 7,0), 15 (рН 9,0).
Коэффициент перераспределения октанол/вода =3,9 (рН 5,0), 4,0 (рН 7,0), 4,0 (рН 9,0) при 25 °С.
Величина рК 4,44.
Ципродинил устойчив к гидролизу (период полуразложения больше 1 года при рН 4-9). Фотолитически быстро разрушается в воде (ДТ 0,4-13,5 дней).
Ципродинил является среднестойким соединением, с периодом полуразложения в почве 20-60 дней. В растениях метаболизируется посредством гидроксилирования 6-метильной группы, а также пиримидинового и фенильного ядра.
Краткая токсикологическая характеристика
Ципродинил относится к малоопасным соединениям по острой (ЛД для крыс более 2000 мг/кг) и дермальной токсичности (ЛД для крыс более 2000 мг/кг) и умеренно опасным по ингаляционной (ЛК (4 ч) более 1200 мг/м) токсичности.
Не оказывает раздражающего действия на кожу и глаза кроликов.
В России установлены следующие гигиенические нормативы: ДСД - 0,02 мг/кг/сут.; ОДК в почве - 0,7 мг/кг; ПДК в воде водоемов - 0,1 мг/дм; МДУ в плодовых косточковых и семечковых - 0,4 мг/кг.
Область применения препарата
Ципродинил - системный фунгицид, хорошо проникающий в растение через листья и передвигающийся преимущественно по ксилеме. Эффективно подавляет рост мицелия различных патогенов, в т.ч. устойчивых к фунгицидам из групп триазолов, имидазолов и др. В рекомендуемых дозах не оказывает отрицательного действия на растения.
2. Методика определения остаточных количеств Ципродинила в воде, почве,
яблоках, грушах и косточковых методом газожидкостной хроматографии
2.1. Основные положения
2.1.1. Принцип метода
Методика основана на извлечении Ципродинила из анализируемой пробы органическим растворителем, очистке экстракта путем перераспределения Ципродинила между двумя несмешивающимися растворителями и последующим его определении с помощью газожидкостной хроматографии при использовании термоионного детектора (в азотном режиме), набивных колонок на неподвижной фазе OV-17 или SE-30 или капиллярной колонки с неподвижной фазой SE-54.
Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.
2.1.2. Избирательность метода
В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых для защиты плодовых культур от вредителей и болезней (хлор- и фосфорорганические пестициды, амиды, тио- и дитиокарбаматы, синтетические пиретроиды).
2.1.3. Метрологическая характеристика метода
Метрологическая характеристика метода представлена в табл.1 и 2.
Таблица 1
Метрологическая характеристика метода
Анализируемый объект |
Метрологические параметры, =0,95, =20 | ||||
предел обнаружения Ципродинила, мг/кг (л) |
диапазон определяемых концентраций, мг/кг (л) |
среднее значение определения, % |
стандартное отклонение, S |
доверительный интервал среднего результата, %, ± | |
Вода |
0,005 |
0,005-0,05 |
78,5 |
1,29 |
78,5±2,7 |
Почва |
0,01 |
0,01-0,1 |
82,1 |
1,37 |
82,1±2,9 |
Яблоки, груши, косточковые |
0,02 |
0,02-0,2 |
76,6 |
1,79 |
76,6±3,8 |
Таблица 2
Полнота определения Ципродинила в воде, почве, яблоках и грушах
(5 повторностей для каждой концентрации)
Анализируемый объект |
Добавлено Ципродинила, мг/кг (л) |
Обнаружено Ципродинила, мг/кг (л) |
Доверительный интервал, ± |
Полнота определения, % |
Вода |
0,005 |
0,0041 |
0,0004 |
82,5 |
|
0,01 |
0,0076 |
0,0007 |
76,3 |
|
0,02 |
0,015 |
0,001 |
74,8 |
|
0,05 |
0,040 |
0,003 |
80,2 |
Почва |
0,01 |
0,0086 |
0,0008 |
86,0 |
|
0,02 |
0,0164 |
0,0015 |
82,2 |
|
0,05 |
0,041 |
0,005 |
81,5 |
|
0,1 |
0,078 |
0,0035 |
78,6 |
Яблоки, груши, косточковые |
0,02 |
0,0144 |
0,0024 |
71,8 |
|
0,04 |
0,030 |
0,001 |
74,0 |
|
0,1 |
0,073 |
0,003 |
73,0 |
|
0,2 |
0,175 |
0,003 |
87,5 |
2.2. Реактивы, растворы, материалы и оборудование | |
2.2.1. Реактивы, материалы и растворы | |
Ципродинил с содержанием д.в. 99,0% |
|
Азот, осч |
|
Ацетон, осч |
|
Вода дистиллированная |
ГОСТ 7602-72 |
Натрий хлористый, ч |
|
Гексан, ч |
ТУ 6-09-33-75 |
Гелий, осч |
|
Метилен хлористый, |
|
Натрий сернокислый, безводный, хч |
ГОСТ 4166-76 |
Насадки для набивных колонок: |
|
3% OV-17 на Инертоне-супер (0,16-0,20 мм) |
|
5% SE-30 на Хроматоне-N-AW (0,16-0,20 мм) |
|
Азот, осч |
|
Фильтры бумажные "красная лента" |
ТУ 6-09-1678-86 |
2.2.2. Приборы и оборудование | |
Аппарат для встряхивания АВУ-6С или аналогичный |
ТУ 64-1-2451-78 |
Баня водяная |
ТУ 64-1-2850-76 |
Весы аналитические ВЛА-200 или аналогичные |
ГОСТ 34104-80Е* |
_____________ | |
Воронки химические конические, диаметром 34-37 мм |
|
Испаритель ротационный вакуумный ИР-1М или аналогичный |
ТУ 25-11-917-74 |
Колба круглодонная на шлифе, вместимостью 1 л |
ГОСТ 9737-70 |
Колбы грушевидные со шлифом, вместимостью 50 и 100 мл |
ГОСТ 10394-72 |
Колбы мерные, вместимостью 50 и 100 мл |
|
Колбы плоскодонные, вместимостью 50 и 100 мл |
|
Колонка хроматографическая, капиллярная НР-5, длина 30 м, внутренним диаметром 0,25 мм, неподвижная фаза 5% diphenyl and 95% dimethylpolysiloxane |
|
Колонка хроматографическая, стеклянная, длиной 1 или 3 м, внутренним диаметром 3 мм |
|
Насос водоструйный |
ГОСТ 10696-75 |
Палочки стеклянные |
ГОСТ 10696-75 |
Пипетки, вместимостью 0,1, 1, 5 и 10 мл |
ГОСТ 20292-74Е |
Стаканы химические, вместимостью 100 и 2000 мл |
|
Хроматограф газовый "Цвет-600" или аналогичный, снабженный термоионным детектором с пределом детектирования по азоту (в азобензоле) не менее 1,5х10 г/см |
|
Хроматограф газовый "Кристалл 2000 М", снабженный термоионным детектором с пределом детектирования по азоту (в азобензоле) не менее 1,5х10 г/см и капиллярной колонкой или другой аналогичного типа |
|
Цилиндры мерные, вместимостью 10; 20; 50; 100 и 500 мл |
|
Эксикатор вакуумный |
ГОСТ 9737-70 |
2.3. Подготовка к определению
2.3.1. Подготовка и кондиционирование колонки для газожидкостной хроматографии
Готовую насадку (5% OV-17 на Инертоне-супер или 5% SE-30 на Хроматоне-N-AW-DMCS) засыпают в стеклянную колонку, уплотняют под вакуумом, колонку устанавливают в термостате хроматографа, не подсоединяя к детектору, и стабилизируют в токе азота при температуре 250 или 270 °С в течение 10-12 ч.
Капиллярную колонку стабилизируют в токе гелия согласно прилагаемой к ней инструкции.
2.3.2. Приготовление стандартных растворов
Стандартный основной раствор Ципродинила с концентрацией 100 мкг/мл готовят растворением 0,010 г вещества в гексане в мерной колбе на 100 мл. Раствор хранится в холодильнике в течение двух месяцев.
Методом последовательного разбавления готовят стандартные растворы Ципродинила в гексане с концентрациями 0,1; 0,2; 0,4 и 1,0 мкг/мл для построения калибровочных графиков. Для внесения в образцы при постановке методики готовят из основного стандартного раствора Ципродинила растворы в ацетоне с концентрациями 0,4-1,0 мкг/мл.
2.3.3. Построение градуировочного графика
Для построения градуировочного графика в испаритель хроматографа вводят по 3 мкл рабочих растворов Ципродинила с концентрациями 0,1; 0,2; 0,4 и 1,0 мкг/мл. При работе с капиллярной колонкой объем вводимой пробы - 1 мкл.
Осуществляют не менее 5 параллельных измерений для каждой концентрации. Находят среднее значение высоты хроматографического пика для каждой концентрации.
Строят градуировочный график зависимости высоты (площади) хроматографического пика в мм (мм) от концентрации Ципродинила в растворе, мкг/мл.
2.4. Отбор проб
Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79). Пробы яблок и груш хранятся при температуре 0-4 °С в течение суток. Для длительного хранения пробы замораживаются и хранятся при температуре - 18 °С. Для длительного хранения пробы почвы подсушиваются при комнатной температуре в отсутствии прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут храниться в течение года. Перед анализом сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм, яблоки и груши перед анализом, не размораживая, измельчают на терке.
2.5. Описание определения
2.5.1. Почва
К навеске 50 г воздушно-сухой почвы в конической колбе емкостью 250 мл добавляют 20 мл дистиллированной воды и 100 мл ацетона. Почву экстрагируют в колбе на аппарате для встряхивания в течение 1 ч. Экстракт фильтруют в концентратор методом декантации через фильтр "красная лента". Экстракцию повторяют еще два раза, используя по 50 мл ацетона соответственно, встряхивая колбу каждый раз в течение 30 мин.
Объединенный экстракт упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 35 °С до полного удаления ацетона.
Водную фракцию переносят в делительную воронку объемом 250 мл, обмывая концентратор 10-15 мл воды, добавляют 30 мл хлористого метилена и встряхивают смесь 1-2 мин. После разделения фаз нижний слой сливают через слой безводного сульфата натрия в концентратор и повторяют экстракцию хлористым метиленом еще два раза, используя соответственно 20 и 20 мл. Органические фракции объединяют, а водную фазу отбрасывают.
Растворитель упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 35 °С досуха, остаток растворяют в 5 мл гексана и вводят в хроматограф 3 мкл (1 мкл для капиллярной колонки) пробы.
2.5.2. Вода
В делительную воронку объемом 250 мл помещают 100 мл воды и пробу трижды экстрагируют хлористым метиленом порциями по 30, 20 и 20 мл соответственно. После каждой экстракции собирают нижний слой в концентратор, пропуская хлористый метилен через слой безводного сульфата натрия. После третьей экстракции воду отбрасывают, объединенный экстракт упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 35 °С досуха, остаток растворяют в 5 мл гексана и вводят в хроматограф 3 мкл (1 мкл для капиллярной колонки) пробы.
2.5.3. Яблоки и груши
К навеске 25 г измельченных на терке плодов в конической колбе емкостью 250 мл добавляют 50 мл ацетона, смесь экстрагируют на аппарате для встряхивания в течение 30 мин. Содержимое колбы фильтруют в стакан методом декантации через фильтр "красная лента". Экстракцию повторяют еще 2 раза, используя по 50 мл ацетона каждый раз и встряхивая смесь в течение 30 мин. Объединенный экстракт в стакане помещают в морозильную камеру с температурой -10-12 °С на 1 ч. Раствор вторично фильтруют в концентратор через фильтр "красная лента" и упаривают до полного удаления ацетона на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 35 °С.
Водный остаток переносят в делительную воронку объемом 250 мл, обмывая концентратор 20 мл воды, добавляют в воронку 20 мл хлористого метилена и встряхивают смесь 1-2 мин. После разделения фаз нижний слой сливают в стакан и повторяют экстракцию хлористым метиленом еще два раза, используя по 20 мл растворителя. Органические фракции объединяют, а водную фазу возвращают в воронку, добавляют 50 мл воды и выделившийся хлористый метилен сливают в стакан, объединяя с основной массой органического экстракта. Объединенный органический экстракт переносят в концентратор, фильтруя его через слой безводного сульфата натрия. Растворитель упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 35 °С досуха, остаток растворяют в 5 мл гексана и вводят в хроматограф 3 мкл (1 мкл для капиллярной колонки) пробы.
2.6. Условия хроматографирования и обработка результатов
2.6.1. Условия хроматографирования
Хроматограф "Цвет-600" или аналогичный, снабженный термоионным детектором с пределом детектирования по азоту (в азобензоле) не менее 1,5х10 г/см.
Рабочая шкала электрометра 8х10. Скорость движения ленты самописца 120 мм/ч.
Колонка стеклянная, спиральная, длиной 1 м, внутренний диаметр 3 мм, заполненная 5% OV-17 на Инертоне-супер (0,16-0,20 мм).
Температура испарителя - 290 °С, термостата колонки 220 °С, детектора - 340 °С, переходной камеры - 364 °С.
Газовый режим: азот - 35, водород - 12, воздух - 130 мл/мин.
Абсолютное время удерживания - 1 мин 57 с.
Линейность детектирования сохраняется в пределах 0,3-3,0 нг.
Альтернативная фаза: 5% SE-30 на Хроматоне N-AW-DMCS (0,20-0,25 мм), длина колонки 3 м.
Температура термостата колонки - 230 °С, детектора - 340 °С, испарителя - 290 °С, переходной камеры - 364 °С.
Газовый режим: азот - 35, водород - 12, воздух - 130 мл/мин.
Абсолютное время удерживания - 1 мин 07 с.
Рабочая шкала электрометра 8х10. Скорость движения ленты самописца 120 мм/ч.
Альтернативные условия хроматографирования с использованием капиллярной колонки.
Колонка хроматографическая, капиллярная НР-5, длина 30 м с внутренним диаметром 0,25 мм, неподвижная фаза 5% дифенил- и 95% диметилполисилоксан.
Температура: испарителя 250 °С, колонки 220 °С, детектора 360 °С.
Регулятор расхода гелия: тип регулятора - РРГ-11; режим - нормальный.
Газ 1 - гелий, расход - 0,5 мл/мин, линейная скорость - 16 см/с, давление на входе - 81,48 кПа.
Газ 2 - гелий (продувка испарителя), сброс 1:80, расход - 40 мл/мин.
Газ 3 - азот (поддув в блок детекторов), расход - 40 мл/мин.
Продувка системы после анализа при температуре 240 °С в течение 2 мин: продувка блока детекторов азотом - 40 мл/мин; продувка испарителя гелием - 40 мл/мин.
Расход водорода - 12, воздуха - 200 мл/мин, объем пробы 1 мкл.
Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют среднюю высоту пика.
Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрациями Ципродинила 1,0 мкг/мл, соответственно разбавляют.
2.6.2. Обработка результатов анализов
Содержание Ципродинила в пробах воды, почвы, яблоках, грушах и косточковых рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:
- содержание Ципродинила в пробе, мг/кг;
- высота (площадь) пика образца, мм;
- высота (площадь) пика стандарта, мм;
- концентрация стандартного раствора, мкг/мл;
- объем экстракта, подготовленного для хроматографирования (мл);
- масса или объем анализируемого образца, г или мл.
- содержание Ципродинила в аналитическом стандарте.
3. Требования техники безопасности
Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами.
4. Разработчики
Калинин В.А., проф., к.с-х.н., Довгилевич Е.В., к.биол.н., Калинина Т.С., к.с-х.н., Довгилевич А.В., к.хим.н., Рыбакова О.И., н.с., Устименко Н.В., ст.н.с., к.биол.н.
Московская сельскохозяйственная академия им. К.А.Тимирязева. 127550, Москва, Тимирязевский пр., 2, кафедра химических средств защиты растений. Телефон: 976-02-20. Факс: 976-43-26.
Текст документа сверен по:
официальное издание
Определение остаточных количеств пестицидов
в пищевых продуктах, сельскохозяйственном сырье
и объектах окружающей среды: Сборник методических
указаний. Выпуск 1. - М.: Федеральный центр
госсанэпиднадзора Минздрава России, 2004