МУК 4.1.1140-02  

     
     
Методические указания


4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств Люфенурона в воде, почве, яблоках
и клубнях картофеля методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

     
     
Дата введения 2003-01-01

     
     
     УТВЕРЖДЕНЫ Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации Г.Г.Онищенко
     
     

1. Вводная часть

     
     Фирма производитель: Сингента (Швейцария).
     
     Торговое название: МАТЧ.
     
     Действующее вещество: люфенурон (ЦГА 184699).
     
     (RS)-1-/2,5-дихлор-4-(1,1,2,3,3,3-гексафторпропокси)фенил/-3-(2,6-дифторбензоил)мочевина (ИЮПАК).
          

     
     Бесцветное кристаллическое вещество без запаха.
     
     Температура плавления: 168,7-169,4 °С.
     
     Давление паров при 25 °С: 4х10 Па.
     
     Коэффициент распределения н-октанол-вода: =5,12.
     
     Хорошо растворим в ацетоне (460 г/л), толуоле (72 г/л), этаноле (41 г/л); плохо растворим в гексане (0,13 г/л) и практически не растворим в воде (0,06 мг/л).
     
     Стабильность к гидролизу при 20 °С: DT=160 дней (рН 5), 70 дней (рН 7) и 32 дня (рН 9).
     
     Стабилен на воздухе и на свету.
     
     В биологически активных почвах в аэробных условиях люфенурон быстро разлагается: DT=13-20 дней.
     
     Краткая токсикологическая характеристика
     
     Острая пероральная токсичность (LD) для мышей и крыс - более 2000 мг/кг; острая дермальная токсичность (LD) для крыс - более 2000 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LC) для крыс - более 2,35 мг/л воздуха. Люфенурон не оказывает раздражающего действия на кожу и слизистую оболочку глаз кролика. LC для рыб 30-70 мг/л (96 ч).
     
     Инсектицид нетоксичен для диких животных, птиц, пчел, земляных червей, почвенных микроорганизмов и токсичен для дафний.
     
     Гигиенические нормативы для люфенурона в России: ОДК в почве - 0,1 мг/кг; ПДК в воде водоемов - 0,005 мг/дм; МДУ для яблок и картофеля - 0,04 мг/кг.
     
     Область применения препарата
     
     Люфенурон - инсектоакарицид из группы ингибиторов синтеза хитина, эффективно уничтожает листогрызущие личинки чешуекрылых и жесткокрылых, эриофиидных клещей на хлопчатнике, сое, овощных культурах, винограде, семечковых плодовых, картофеле и кукурузе в течение вегетационного периода.
     
     

2. Методика определения остаточных количеств Люфенурона в воде, почве,
яблоках и клубнях картофеля методом высокоэффективной
жидкостной хроматографии

     
2.1. Основные положения

     
2.1.1. Принцип метода

     
     Метод основан на определении люфенурона с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на обращенной фазе с ультрафиолетовым детектором после экстракции его из воды смесью гексан-диэтиловый эфир (9:1), из почвы водным метанолом, из растительного материала метанолом, очистки экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей, а также на колонке с силикагелем и концентрирующем патроне Диапак.
     
     Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.
     

2.1.2. Избирательность метода

     
     В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых при возделывании яблоневых садов и картофеля.
     

2.1.3. Метрологическая характеристика метода

     
     
Таблица 1

     
Метрологические параметры метода

     
     
2.2. Реактивы, растворы, материалы

2.4. Отбор проб

     
     Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79).
     
     Отобранные пробы почвы, яблок и клубней картофеля хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике не более трех дней. Для длительного хранения пробы почвы доводят до воздушно-сухого состояния и хранят в холодильнике; пробы яблок и клубней хранят до анализа в морозильной камере при температуре -18 °С. Пробы воды хранят при температуре не выше 4 °С в течение 3 дней, при температуре -18 °С в течение месяца.
     
     Перед анализом сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм, а яблоки и клубни измельчают.
     

2.5. Подготовка к определению

     
2.5.1. Подготовка и очистка реактивов и растворителей

     
     Органические растворители перед началом работы сушат и перегоняют в соответствии с типовыми методиками.
     

2.5.2. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ

     
     Отмеряют 600 мл ацетонитрила, переносят в колбу на 1000 мл, добавляют 400 мл бидистиллированной воды, перемешивают и дегазируют.
     

2.5.3. Кондиционирование колонки

     
     Промыть колонку для ВЭЖХ смесью ацетонитрил-вода (6:4, по объему) в течение 30 мин при скорости подачи растворителя 1 мл/мин. Включить детектор и подождать стабилизации базовой линии (5-15 мин).
     

2.5.4. Приготовление стандартных растворов

     
     Основной стандартный раствор люфенурона с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 0,010 г препарата, содержащего 99,7% д.в., в ацетонитриле в мерной колбе на 100 мл. Раствор хранят в холодильнике не более месяца.
     
     Рабочие стандартные растворы с концентрациями 0,05, 0,1, 0,25 и 0,5 мкг/мл готовят из основного стандартного раствора люфенурона соответствующим последовательным разбавлением подвижной фазой для ВЭЖХ (п.2.5.2). Рабочие растворы хранят в холодильнике не более недели.
     

2.5.5. Построение калибровочного графика

     
     Для построения калибровочного графика в инжектор хроматографа вводят по 100 мкл рабочего стандартного раствора люфенурона с концентрацией 0,05, 0,1, 0,25 и 0,5 мкг/мл. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений и находят среднее значение высоты хроматографического пика для каждой концентрации. Строят калибровочный график зависимости высоты хроматографического пика в мм от концентрации люфенурона в растворе в мкг/мл.
     

2.5.6. Подготовка колонки с силикагелем и концентрирующего патрона Диапак С8 для очистки экстрактов

     
     В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 0,8 см вставляют тампон из стекловаты, закрывают кран и приливают 10 мл гексана. Затем в колонку вносят суспензию 5 г силикагеля в 20 мл гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку промывают 20 мл гексана со скоростью 1-2 капли в секунду, после чего она готова к работе.
     
     Концентрирующий патрон Диапак С8 промывают последовательно с помощью медицинского шприца 5 мл ацетонитрила и 5 мл бидистиллированной воды со скоростью 5 мл/мин.
     

2.6. Описание определения

     
2.6.1. Экстракция люфенурона

     
     2.6.1.1. Вода. 250 мл предварительно отфильтрованной воды помещают в делительную воронку емкостью 500 мл. Добавляют 30 мл смеси гексан-диэтиловый эфир (9:1, по объему) и встряхивают 1 минуту. Верхний органический слой отделяют, собирая в коническую колбу емкостью 250 мл. Водный слой экстрагируют смесью гексан-диэтиловый эфир еще дважды порциями по 30 мл. Объединенную органическую фазу пропускают через слой безводного сульфата натрия и упаривают на роторном вакуумном испарителе досуха при температуре 30 °С. Остаток растворяют в 2 мл подвижной фазы для ВЭЖХ (п.2.5.2) и анализируют на содержание люфенурона по п.2.7.
     
     2.6.1.2. Яблоки, клубни картофеля. К навеске (25 г) измельченного материала добавляют 100 мл метанола, гомогенизируют 3 минуты при 10000 об/мин и суспензию перемешивают в течение 20 минут на аппарате для встряхивания. Добавляют 2 г целита и фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу емкостью 500 мл. Остаток на фильтре промывают 20 мл метанола. Растительный материал повторно экстрагируют 60 мл метанола при встряхивании в течение 10 минут, и суспензию фильтруют. К объединенным экстрактам добавляют метанол до объема 200 мл и отбирают аликвоту раствора (40 мл), эквивалентную 5 г растительного материала.
     
     2.6.1.3. Почва. Навеску (20 г) воздушно-сухой почвы помещают в коническую колбу емкостью 250 мл, приливают 20 мл дистиллированной воды и спустя 5 минут 80 мл метанола. Суспензию перемешивают в течение 1 часа на аппарате для встряхивания. Добавляют 2 г целита и фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Осадок на фильтре промывают 20 мл метанола. К объединенному фильтрату добавляют метанол до объема 120 мл и отбирают аликвоту раствора (60 мл), эквивалентную 10 г почвы.
     

2.6.2. Очистка экстракта

     
     Аликвоты растительного (из п.2.6.1.2) и почвенного (из п.2.6.1.3) экстрактов переносят в делительную воронку вместимостью 250 мл, приливают соответственно 40 или 50 мл дистиллированной воды, 20 или 30 мл насыщенного раствора хлорида натрия и 30 мл смеси гексан-диэтиловый эфир (9:1, по объему). Смесь встряхивают в течение 1 минуты и после ее разделения отделяют гексановый слой и пропускают его через стеклянный фильтр, заполненный безводным сульфатом натрия, в грушевидную колбу вместимостью 100 мл. Экстракцию водно-метанольной фракции смесью гексан-диэтиловый эфир повторяют еще два раза (по 20 мл). Объединенный гексановый экстракт упаривают на роторном испарителе досуха при температуре 30 °С.
     

2.6.3. Очистка на колонке с силикагелем

     
     Остаток в колбе, полученный при упаривании очищенных по п.2.6.2 экстрактов растительного материала и почвы, количественно переносят тремя 1-мл порциями смеси гексан-этилацетат (9:1, по объему) в подготовленную хроматографическую колонку (п.2.5.6). Промывают колонку 50 мл смеси гексан-этилацетат (9:1, по объему), которые отбрасывают. Люфенурон элюируют 50 мл смеси гексан-этилацетат (8:2, по объему), собирая элюат в грушевидную колбу емкостью 100 мл. Раствор упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30 °С. Сухие остатки экстрактов почвы и яблок растворяют в 2 мл подвижной фазы для ВЭЖХ (п.2.5.2) и анализируют по п.2.7.
     

2.6.4. Очистка на концентрирующем патроне Диапак

     
     Сухой остаток экстракта клубней картофеля (п.2.6.3) количественно переносят двумя 1-мл порциями смеси ацетонитрил-вода (4:6, по объему) в подготовленный концентрирующий патрон Диапак С8 (п.2.5.6). Патрон промывают 7 мл смеси ацетонитрил-вода (4:6, по объему) со скоростью 5 мл/мин, которые отбрасывают. Люфенурон элюируют 15 мл смеси ацетонитрил-вода (5:5, по объему) со скоростью 5 мл/мин. Элюат упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 40 °С. Сухой остаток растворяют в 2 мл подвижной фазы для ВЭЖХ (п.2.5.2) и анализируют на содержание люфенурона по п.2.7.
     

2.7. Условия хроматографирования

     
     Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором Altex (США)
     

     
2.7.1. Неподвижная фаза: Диасорб 130-С16Т, зернением 7 мкм

     
     Время выхода люфенурона: около 16 минут.
     

2.7.2. Альтернативная неподвижная фаза: Lichrosorb RP-8 (5 мкм)

     
     Время выхода люфенурона               около 13 минут
     
     Линейный диапазон детектирования   5-50 нг
     
     Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 0,5 мкг/мл, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ.
     

2.8. Обработка результатов анализа

     
     Содержание люфенурона рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:
     

, где

     
      - содержание люфенурона в пробе, мг/кг или мг/дм;
     
      - высота пика образца, мм;
     
      - высота пика стандарта, мм;
     
      - концентрация стандартного раствора люфенурона, мкг/мл;
     
      - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл;
     
      - объем анализируемого образца (мл) или масса анализируемой части образца, г.
     
     

3. Требования техники безопасности

     
     Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами.
     
     

4. Разработчики

     
     Дубовая Л.В.; Талалакина Т.Н.; Макеев А.М. к.биол.н; Чкаников Д.И., профессор, д.биол.н.
     
     ВНИИ фитопатологии, 143050, Московская обл., п/о Большие Вяземы.
     
     

Таблица 2

     
Полнота определения Люферона (=5)

     
     
     
Текст документа сверен по:
официальное издание
Определение остаточных количеств пестицидов
в пищевых продуктах, сельскохозяйственном сырье
и объектах окружающей среды: Сборник методических
указаний. Выпуск 1. - М.: Федеральный центр
госсанэпиднадзора Минздрава России, 2004