почта Моя жизнь помощь регистрация вход
Краснодар:
погода
мая
21
вторник,
Вход в систему
Логин:
Пароль: забыли?

Использовать мою учётную запись:

  отправить на печать


МУК 4.2.1776-03

     
     
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

     
     
4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

     
Метод микробиологического измерения концентрации клеток
Aspergillus awamori ВНИИгенетика 120/177 - продуцента глюкоамилазы
в воздухе рабочей зоны

     
     
Дата введения 2003-12-01

     
     
     1. РАЗРАБОТАНЫ: Российским государственным медицинским университетом (к.б.н. Н.И.Шеиной).
     
     2. УТВЕРЖДЕНЫ Первым заместителем министра здравоохранения Российской Федерации - Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко 24 октября 2003 г.
     
     3. ВВЕДЕНЫ В ДЕЙСТВИЕ с 1 декабря 2003 г.
     
     4. ВВЕДЕНЫ ВПЕРВЫЕ.
     
     

1. Общие положения и область применения

     
     Настоящие методические указания устанавливают методику проведения микробиологического количественного анализа концентрации клеток штамма Aspergillus awamori ВНИИгенетика 120/177 - продуцента глюкоамилазы в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 100 до 5000 клеток в 1 м воздуха.
     
     Методические указания разработаны в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 "ССБТ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования" и ГОСТ Р 8.563-96 "Методики выполнения измерений".
     
     Методические указания предназначены для применения в лабораториях предприятий, организаций и учреждений, аккредитованных в установленном порядке на право проведения микробиологических исследований.
     
     Методические указания одобрены и рекомендованы секцией "Гигиенические аспекты биотехнологии и микробного загрязнения окружающей среды" Проблемной комиссии "Научные основы гигиены окружающей среды".
     
     

2. Биологическая характеристика Aspergillus awamori ВНИИгенетика 120/177
и его гигиенический норматив

     
     На 5 день развития на сусло-агаре штамм образует крупные ровные круглые колонии, средний диаметр которых составляет 0,5-1,0 см, а максимальный - 1,5-3,0 см. Край колоний ровный. Колонии гомогенные, гладкие, плоские.
     
     При температуре 38-42 °С штамм-продуцент появляется на сусло-агаре в виде маленьких белых колоний уже на 1-2 дни. На 3-й день в среду выделяется оранжево-желтый пигмент, процесс спорообразования идет интенсивнее. Образование конидиеносцев с конидиями придает колониям глубокий интенсивно-серый цвет. Колонии становятся опущенными и приподнимаются над средой.
     
     Систематическое положение микроорганизма
     

     Класс

Fungi imperfecti  

     Порядок

Hyphomycetales  

     Семейство

Mucedinaceae  

     Секция

Monoverticillata  

     Род

Aspergillus  

     Вид

awamori  

     Штамм

ВНИИгенетика 120/177

     
     Штамм Aspergillus awamori 120/177 получен во ВНИИгенетика как мутант из A.awamori С529Д 466 и депонирован в ЦМПМ института. Штамм является продуцентом глюкоамилазы.
     
     Штамм-продуцент растет на жидких и агаризованных средах. Оптимальная температура роста 27-30 °С, рН среды 5,0-6,0, культивирование 7 суток. Для размножения используется агаризованная среда Чапека, сусло-агар 5-6 °Б, картофельно-сахарозный агар.
     
     Предельно допустимая концентрация (ПДК) в воздухе рабочей зоны - 2000 кл./м, А.
     
     

3. Пределы измерений

     
     Методика обеспечивает выполнение измерений количества клеток плесневого гриба в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 100 до 5000 клеток в 1 м воздуха при доверительной вероятности 0,95.
     
     

4. Метод измерений

     
     Метод основан на аспирации из воздуха клеток плесневого гриба на поверхность среды сусло-агар и подсчета выросших колоний по типичным культурально-морфологическим признакам и яркому оранжево-желтому окрашиванию субстрата на 3 сутки.
     
     

5. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

     
     При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства и материалы.
     

5.1. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы

     

Прибор для бактериологического анализа воздуха, модель 818 (щелевой прибор Кротова)

     ТУ 64-12791-77

Термостаты электрические суховоздушные или водяные

Автоклав электрический

     ГОСТ 9586-75

Бокс, оборудованный бактерицидными лампами

Холодильник бытовой

Весы лабораторные, аналитические типа ВЛА-200

Микроскоп биологический с иммерсионной системой типа "Биолам" Л-211

Лупа с увеличением 10

     ГОСТ 25706-83

Чашки Петри бактериологические плоскодонные, стеклянные, диаметром 100 мм

Пробирки биологические, вместимостью 20 и 35 мл

     ГОСТ 10515-75

Пипетки мерные на 1, 5 и 10 мл

     ГОСТ 10515-75

Пипетки мерные на 1, 5 и 10 мл

     ГОСТ 1770-74

Колбы конические, вместимостью 250 и 500 мл

     ГОСТ 1770-74

Секундомер

     ГОСТ 9586-75

Барометр

     ГОСТ 24696-79

Марля медицинская

     ГОСТ 9412-77

Вата медицинская гигроскопическая

     ГОСТ 25556-81

     
5.2. Реактивы, растворы

Среда сусло-агар: солодовое сусло (значение Баллинга от 5 до 6°) - 98%, агар-агар - 2%, рН среды 5,0-6,0, режим стерилизации: 1,1-1,2 ати, 40 мин

Спирт этиловый ректификат

     ГОСТ 5962-67*

_______________
     * На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 51652-2000. - Примечание .

Молочная кислота, синоним-альфа-оксипропионовая кислота (для подавления посторонней бактериальной флоры)

     ГОСТ 490-79

     
     

6. Требования безопасности

     
     При выполнении измерений концентрации клеток штамма-продуцента в воздухе рабочей зоны соблюдают следующие требования.
     
     6.1. Правила техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.005-88.
     
     6.2. Электробезопасность при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-79 и инструкции по эксплуатации прибора.
     
     6.3. Руководство "Положение об организации работы по технике безопасности в микробиологической промышленности" (1980), "Инструкции по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности" (1977).
     
     6.4. Все виды работ с реактивами проводят только в вытяжном шкафу при работающей вентиляции, работа с биологическим материалом осуществляется в боксе, оборудованном бактерицидными лампами.
     
     

7. Требования к квалификации операторов

     
     К выполнению измерений и обработке их результатов допускают лиц с высшим или средним специальным образованием, прошедших соответствующую подготовку и имеющих навыки работы в области микробиологических исследований.
     
     

8. Условия измерений

     
     Процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха (20±5 °С), атмосферном давлении 630-800 мм рт.ст. и влажности воздуха не более 80%.
     
     

9. Проведение измерения

     
9.1. Условия отбора проб воздуха

     
     Для определения концентрации клеток плесневого гриба воздух аспирируют при помощи аппарата Кротова со скоростью 10 л/мин на поверхность среды сусло-агар. Время аспирации воздуха (1-10 мин) зависит от предполагаемой концентрации клеток штамма-продуцента.
     
     Аппарат Кротова перед каждым отбором пробы воздуха тщательно протирают спиртом. Особенно тщательно обрабатывают поверхность подвижного диска и внутреннюю стенку прибора; наружную и внутреннюю стенку крышки. На подвижной диск устанавливают подготовленную чашку Петри со средой, одновременно снимая с нее крышку. Прибор закрывают. Соприкосновение крышки прибора со средой недопустимо. После отбора пробы воздуха и остановки диска, прибор открывают, быстро снимают чашку Петри и закрывают крышкой от данной чашки. На дне чашки Петри стеклографом отмечают точку контроля, время аспирации и дату отбора пробы.
     

9.2. Выполнение анализа

     
     Метод предполагает учет количества типичных колоний, выросших на 3 сутки после посева проб воздуха по культурально-морфологическим признакам и яркой оранжево-желтой пигментации среды. Прямой метод позволяет учитывать на чашке до 200 колоний продуцента.
     
     Агаризованную среду сусло-агар расплавляют, остужают до 50-60 °С, добавляют молочную кислоту из расчета 2 мл на 0,5 л среды (для подавления посторонней бактериальной микрофлоры), тщательно перемешивают и разливают по 10 мл в стеклянные чашки Петри на горизонтальной поверхности.
     
     Чашки с застывшей средой помещают в термостат на сутки при температуре 37 °С, после чего проросшие чашки бракуют, стерильные чашки используют для контроля воздуха.
     
     После отбора проб воздуха чашки Петри помещают в термостат при температуре 38-42 °С (повышенная температура, способствующая более быстрому росту колоний и плодоношений рода Aspergillus). Через 2-3 суток производят подсчет выросших типичных колоний продуцента. При необходимости культуру подвергают микроскопированию.
     
     

10. Вычисление результатов измерения

     
     Расчет концентрации клеток продуцента в пересчете на 1 м воздуха производят по формуле:
     

,   кл./м,

     
где  - концентрация клеток продуцента в воздухе;
     
      - количество колоний продуцента, выросших на чашке;
     
     1000 - коэффициент пересчета на 1 м воздуха;
     
      - объем воздуха, л (произведение скорости на время аспирации).
     
     

11. Оформление результатов измерений

     
     Результаты измерений оформляют протоколом по форме.
     
     

Протокол N
количественного микробиологического анализа штамма-продуцента
Aspergillus awamori ВНИИгенетика 120/177 в воздухе рабочей зоны

     

1. Дата проведения анализа

2. Место отбора пробы

3. Название лаборатории

4. Юридический адрес организации

     

Результаты микробиологического анализа

     

Шифр или N пробы

Определяемый микроорганизм

Концентрация, кл./м


     
     
     Ответственный исполнитель
     
     Научный руководитель
     
     

Список литературы

     
     1. ГОСТ 12.1.005-88 "ССБТ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования".
     
     2. ГОСТ 8.563-96*. ГСИ "Методики выполнения измерений".
______________
     * Вероятно ошибка оригинала. Следует читать ГОСТ Р 8.563-96. ГСИ "Методики выполнения измерений". - Примечание .     
     
     3. Положение об организации работы по технике безопасности в микробиологической промышленности. - М., 1980. 27 с.
     
     4. Инструкции по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности. - М., 1977. 7 с.
     
     5. Влодавец В.В. К определению плесневых грибов рода Aspergillus в воздухе лечебных учреждений // Гиг. и сан., 1988, N 8, С.93-95.
     
     6. Бабьева И.П., Зенова Г.М. Биология почв. - М., МГУ. 122 с.



Текст документа сверен по:
официальное издание
Методические указания. -
М.: Федеральный центр госсанэпиднадзора
Минздрава России, 2004

  отправить на печать

Личный кабинет:

доступно после авторизации

Календарь налогоплательщика:

ПнВтСрЧтПтСбВс
01 02 03 04 05
06 07 08 09 10 11 12
13 14 15 16 17 18 19
20 21 22 23 24 25 26
27 28 29 30 31

Заказать прокат автомобилей в Краснодаре со скидкой 15% можно через сайт нашего партнера – компанию Автодар. http://www.avtodar.ru/

RuFox.ru - голосования онлайн
добавить голосование