СТ СЭВ 4251-83

Группа Н09

     
     
СТАНДАРТ СЭВ

     
     
ПИЩЕВЫЕ ПРОДУКТЫ

     
Метод определения количества дрожжей и плесневых грибов

     
     УТВЕРЖДЕН Постоянной Комиссией по сотрудничеству в области стандартизации Дрезден, декабрь 1983 г.
     
     Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 26 апреля 1984 г. N 1440 стандарт Совета Экономической Взаимопомощи СТ СЭВ 4251-83 "Пищевые продукты. Метод определения количества дрожжей и плесневых грибов" введен в действие непосредственно в качестве государственного стандарта СССР
     
     в договорно-правовых отношениях по сотрудничеству с 01.07.85
     
     

ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ

     
     1. Автор - Делегация НРБ и ЧССР в Постоянной Комиссии по сотрудничеству в области пищевой промышленности.
     
     2. Темы 20.010.09-81 и 20.010.10-81.
     
     3. Стандарт СЭВ утвержден на 54-м заседании ПКС.
     
     4. Сроки начала применения стандарта СЭВ:
     
     

     
     
     5. Срок проверки - 1988 г.
     
     ВЗАМЕН РС 4869-75 и РС 4870-75
     
     Настоящий стандарт СЭВ является обязательным в рамках Конвенции о применении стандартов СЭВ
     
     

1. СУЩНОСТЬ МЕТОДА

     
     Метод основан на высеве определенного количества продукта или его разведений в селективную агаризованную среду, культивировании посевов при (24±1) °С в течение 5 d, подсчете всех видимых колоний дрожжей и плесневых грибов, типичных по макро- и (или) микроскопической морфологии.
     
     

2. ПРОБЫ

     
     2.1. Пробы отбирают и подготавливают к анализу по СТ СЭВ 3013-81 и СТ СЭВ 3014-81.
     
     2.2. Масса (объем) навески, предназначенной для приготовления разведения, должна составлять не менее (10±1) g (cm), a предназначенной для непосредственного высева в питательные среды - не менее 1 g (cm).
     
     

3. АППАРАТУРА

     
     Для проведения анализа применяют аппаратуру по СТ СЭВ 3014-81 со следующим дополнением:
     
     1) микроскоп;
     
     2) термостат на (24±1) °С;
     
     3) чашки бактериологические с внутренним диаметром (90±2) или (100±2) mm;
     
     4) пипетки вместимостью 1 и 10 cm;
     
     5) стекла предметные;
     
     6) петли бактериологические;
     
     7) фильтры мембранные со средним диаметром пор 0,5-0,8 m;
     
     8) палочки стеклянные с загнутым концом.
     
     

4. РЕАКТИВЫ, РАСТВОРЫ, ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ

     
     4.1. Для проведения анализа применяют:
     
     1) дрожжевой экстракт в порошке сухой;
     
     2) глюкозу;
     
     3) агар;
     
     4) сусло солодовое неохмеленное или виноградное, с массовой долей сухих веществ 7-8%;
     
     5) кислоту лимонную, 20%-ный водный раствор;
     
     6) бенгальскую красную, 0,15%-ный раствор; готовят следующим образом: 0,15 g бенгальской красной растворяют в 100 cm дистиллированной воды и стерилизуют в течение 15 min при температуре (121±1) °С. Стерильный раствор хранят в герметически закрытом сосуде не более двух недель при температуре (4±1) °С;
     
     7) основу для агаризованных питательных сред с антибиотиками; готовят следующим образом: 5 g дрожжевого экстракта, 20 g глюкозы, 20 g агара добавляют к 1000 cm дистиллированной воды. Смесь подогревают, периодически помешивая, до расплавления составных частей, охлаждают до 45-55 °С, устанавливают рН таким образом, чтобы после стерилизации он составлял при 25 °С 6,5±0,1, стерилизуют в течение 15 min при (121±1) °С. Основу среды хранят при температуре (4±1) °С не более 14 d;
     
     8) среду агаризованную с хлортетрациклином и хлорамфениколом; готовят следующим образом: к 950 cm расплавленной и охлажденной до 45-47 °С основы добавляют по 25 cm свежеприготовленных и стерилизованных путем мембранной фильтрации растворов хлорамфеникола и хлортетрациклина;
     
     9) среду агаризованную с окситетрациклином; готовят следующим образом: к 900 cm расплавленной и охлажденной до 45-47 °С основы добавляют 100 cm свежеприготовленного и стерилизованного путем мембранной фильтрации раствора окситетрациклина;
     
     10) среду агаризованную с хлорамфениколом; готовят следующим образом: к 975 cm расплавленной и охлажденной до 45-47 °С основы добавляют 25 cm свежеприготовленного и стерилизованного путем мембранной фильтрации раствора хлорамфеникола (допускается хлорамфеникол стерилизовать вместе с основой в течение 15 min при (121±1) °С);
     
     11) среду агаризованную с окситетрациклином и гентамицином, готовят следующим образом: перед применением к 1000 cm расплавленной и охлажденной до 45-47 °С основы добавляют 100 cm раствора окситетрациклина и 10 cm раствора гентамицина, свежеприготовленных и стерилизованных путем мембранной фильтрации.
     
     Среды с антибиотиками хранению не подлежат. В случае необходимости для ингибирования развития воздушного мицелия плесневых грибов, к среде с антибиотиками добавляют раствор красной бенгальской так, чтобы ее окончательная концентрация была 150 mg на 1000 cm готовой среды;
     
     12) солодовое неохмеленное сусло; готовят следующим образом: к 1000 cm водопроводной воды, подогретой до (50±1) °С, прибавляют 200 g молотого ячменного солода. Смесь тщательно перемешивают в течение 30 min, подогревают на водяной бане со скоростью 1 °С в min до (55±1) °С, выдерживают паузу 15 min, затем вновь с той же скоростью поднимают температуру до 63-65 °С и удерживают ее на этом уровне в течение 1 h. Температуру поднимают со скоростью 1 °С в 1 min до (72±1) °С и выдерживают сусло при этой температуре до полного осахаривания. Степень осахаривания сусла проверяют раствором Люголя. Для этого каплю сусла переносят в фарфоровую чашку и осторожно прибавляют к нему каплю раствора Люголя. Окончательно осахаренное сусло не должно менять окраску в присутствии индикатора. Полученное сусло фильтруют через полотно или фильтровальную бумагу, доливают до 1000 cm и стерилизуют 30 min в автоклаве при 107-110 °С. Затем сусло декантируют. Прозрачное сусло разбавляют водой до получения раствора с массовой долей сухих веществ 7-8%, разливают в стерильную посуду, стерилизуют в течение 20 min при (116±1) °С. Солодовое сусло можно заменить виноградным суслом, доводя массовую долю сухих веществ в растворе до 7-8%;
     
     13) сусло солодовое агаризованное; готовят следующим образом: к 1000 cm солодового неохмеленного или виноградного сусла с массовой долей сухих веществ 7-8% прибавляют 20 g агара. Среду нагревают на водяной бане до полного расплавления агара и фильтруют через гигроскопическую вату или фильтровальную бумагу. Фильтрат разливают в стерильные колбы или пробирки и стерилизуют в течение 15-20 min при (116±1) °С. Охлаждают до (45-55) °С и устанавливают pH 3,6±0,1, добавляя 2-3 cm стерильного 20%-ного раствора лимонной кислоты. Готовую среду хранят в холодильнике при температуре (4±1) °С не более 7 d;
     
     14) гентамицин, 0,5%-ный водный раствор;
     
     15) окситетрациклин, основание или гидрохлорид, 0,1%-ный водный раствор;
     
     16) хлортетрациклин, гидрохлорид, 0,4%-ный водный раствор;
     
     17) хлорамфеникол (левомецитин), 0,4%-ный водный раствор.
     
     4.2. Для приготовления растворов антибиотиков, перечисленных в позициях 14, 15, 16, 17, используют дистиллированную или бидистиллированную воду с рН от 6,8 до 7,0.
     
     4.3. Перед применением растворы антибиотиков, перечисленных в позициях 14, 15, 16, 17, стерилизуют методом мембранной фильтрации.
     
     Стерильные растворы антибиотиков для инъекций допускается использовать без предварительной мембранной фильтрации.
     
     

5. ПРОВЕДЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЙ

     
     5.1. Из навески продукта готовят исходное и ряд десятикратных разведений до такой степени, чтобы можно было определить предполагаемое количество дрожжей и плесневых грибов в 1 g (cm) исследуемого продукта.
     
     5.2. Высевают по 1 cm продукта и (или) его соответствующих разведений параллельно в две стерильные чашки Петри. В каждую чашку Петри, содержащую инокулум, добавляют не позднее чем через 15 min (14±1) cm агаризованной среды, охлажденной до (45±1) °С. Среду немедленно тщательно перемешивают и оставляют для застывания.
     
     5.3. Для ориентировочных исследований пищевых продуктов допускается посев на поверхность плотных питательных сред по СТ СЭВ 3015-81, п.2.4.
     
     5.4. Для пищевых продуктов, в которых предполагают содержание небольшого количества дрожжей, допускается использовать метод мембранной фильтрации по СТ СЭВ 3015-81, п.2.6.
     
     5.5. При разногласии в оценке качества продукта используют агаризованную среду с хлорамфениколом и (или) хлорамфениколом и хлортетрациклином. Инокуляция проводится глубинным методом по п.5.2.
     
     5.6. После застывания сред посевы инкубируют крышкой вверх при (24±1) °С в течение 5 d. Через 3 d инкубирования проводят предварительный учет типичных колоний, а через 5 d - окончательный, наблюдая за ростом дрожжей и плесневых грибов визуально, а при необходимости и микроскопически (методом нативной микроскопии).
     
     

6. ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ

     
     6.1. Результат оценивают по каждой пробе отдельно.
     
     6.2. Для подсчета отбирают чашки с посевами, где выросло от 15 до 150 колоний дрожжей и (или) от 5 до 50 колоний плесневых грибов.
     
     6.3. Результаты обрабатывают, пересчитывают и записывают в соответствии с СТ СЭВ 3015-81 отдельно для дрожжей и плесневых грибов.
     
     
     

Текст документа сверен по:
официальное издание
М.: Издательство стандартов, 1985