МУК 4.1.1404-03  

     
     
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

     
     
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

     
Определение остаточных количеств бета-циперметрина в воде,
семенах рапса,  рапсовом масле, зерне и зеленой массе кукурузы
методом газожидкостной хроматографии

     
     
Дата введения 2003-06-30

     
     
     УТВЕРЖДЕНЫ Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации Г.Г.Онищенко 24 июня 2003 г.
     
     

1. Вводная часть

     
     Торговое наименование: Кинмикс.
     
     Фирма-призводитель: Агро-Кеми КФТ (Венгрия).
     
     Действующее вещество: бета-циперметрин.
     
     Структурная формула:
     
     

     
     RS- циано-3-феноксибензил (IRS)-cis-, trans-3-(2,2-дихлорвинил)-2,2-метилциклопропанкарбоксилат. Соотношение цис-, транс-изомеров - 40:60.
     
     Эмпирическая формула: CHCINO.
     
     Молекулярная масса: 416,3.
     
     Белый порошок без запаха.
     
     Температура плавления 63-64 °С.
     
     Растворимость в воде 93,4 мкг/л (рН 7, 25 °С).
     
     Растворимость в органических растворителях (мг/мл, 20 °С): изопропанол - 11,5; ксилол - 349,8; дихлорметан - 387,8; ацетон - 2102,0; этилацетат - 1427,0; петролейный эфир - 13,1.
     
     Стабильность: стабилен до 150 °С; на воздухе и при солнечном освещении; в нейтральной и слабокислой среде, гидролизуется в сильнощелочной среде.
     
     Гигиенические нормативы: вода - 0,006 мг/л; кукуруза - 0,05 мг/кг; рапс - 0,1 мг/кг.
     
     Область применения: бета-циперметрин - контактно-кишечный инсектицид широкого спектра действия из группы синтетических пиретроидов.
     
     

2. Методика определения бета-циперметрина в воде, семенах рапса,
рапсовом масле, зерне и зеленой массе кукурузы
методом газожидкостной хроматографии

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

     
     Методика основана на определении бета-циперметрина с помощью газожидкостной хроматографии при использовании детектора с постоянной скоростью рекомбинации ионов после экстракции бета-циперметрина органическим растворителем, очистки экстракта перераспределением действующего вещества между несмешивающимися фазами, а также на колонке с оксидом алюминия.
     

2.1.2. Избирательность метода

     
     В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии других пестицидов, применяемых при возделывании зерновых и масличных культур.
     

2.1.3. Метрологическая характеристика метода

     
     Метрологическая характеристика метода представлена в табл.
     
     

Таблица

     
Метрологические и статистические показатели (=0,95, =24, =4)

     
     
2.2. Реактивы, материалы и оборудование

     
2.2.1. Реактивы и материалы

________________
     * Действует ГОСТ 20015-88. - Примечание .
     

2.2.2. Приборы, аппаратура и посуда

     
2.3. Отбор проб

     
     Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов (N 2051-79 от 21.08.79). Отобранные пробы зерна (семян) и соломы подсушивают до стандартной влажности и хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре не выше 4 °С не более 3 месяцев. Перед анализом зерно и солому размалывают на мельнице. Пробы воды хранят при температуре не выше 4 °С в течение 2 дней, при температуре -18 °С в течение месяца.
     

2.4. Подготовка к определению

2.4.1. Подготовка растворителей

     Очистку растворителей осуществляют общепринятыми методами.
     

2.4.2. Приготовление стандартных растворов

     
     Берут точную навеску бета-циперметрина и растворяют в ацетоне таким образом, чтобы получить стандартный раствор с концентрацией 1 мг/мл. Стандартный раствор можно хранить в холодильнике при температуре 0-4 °С в течение 6 месяцев. Из стандартного раствора методом последовательного разбавления по объему готовят рабочие стандартные растворы 0,25; 0,5; 1; 2,5; 5; 10 мкг/мл в ацетоне для внесения в образцы для оценки полноты извлечения бета-циперметрина. Для построения калибровочного графика готовят растворы бета-циперметрина в гексане концентрацией 0,1; 0,25; 0,5; 1; 1,5; 2 мкг/мл. Эти стандартные растворы можно использовать в течение 7 дней при хранении в холодильнике.
     

2.4.3. Кондиционирование колонки хроматографа

     
     Металлическую колонку заполняют насадкой, состоящей на  по объему из неподвижной фазы 5% SE-30 на Gas-Chrom Q и  по объему 3% OV-17 на Inerton-Super. Уплотняют под вакуумом, после чего колонку устанавливают в термостат хроматографа, не подсоединяя к детектору, и кондиционируют в токе азота (20 мл/мин) при температуре 300 °С в течение 8-10 часов.
     

2.4.4. Построение калибровочного графика

     
     Для построения калибровочного графика снимают хроматограммы стандартных растворов, вводя в инжектор хроматографа последовательно 5 раз по 1 мкл растворов бета-циперметрина в гексане концентрацией 0,1; 0,25; 0,5; 1; 1,5; 2 мкг/мл. Измеряют высоты или площади пиков, рассчитывают среднее значение высоты или площади для каждой концентрации и строят график зависимости высоты или площади пика от концентрации бета-циперметрина.
     

2.4.5. Кондиционирование хроматографических колонок для очистки экстрактов образцов

     
     Стеклянную колонку последовательно заполняют силанизированной стеклянной ватой, 10 г оксида алюминия, 1,5 г сульфата натрия.
     
     Колонку устанавливают на алонж с отводом для вакуума, промывают 25 мл гексана. Промывку проводят под вакуумом непосредственно перед очисткой экстрактов образцов со скоростью 1 мл/мин, не допуская высыхания поверхности адсорбента. Элюат отбрасывают.
     

2.4.6. Проверка хроматографического поведения бета-циперметрина на колонке с оксидом алюминия

     
     На кондиционированную колонку наносят 1 мкг бета-циперметрина в 1 мл гексана. Колонку промывают 15 мл гексана, затем 15 мл смеси гексан-ацетон (1:1) и элюат отбрасывают. Затем бета-циперметрин элюируют последовательно десятью 2 мл порциями смеси бензол-этилацетат (6:4). Каждую фракцию упаривают отдельно, после чего сухой остаток растворяют в 1 мл гексана и аликвоту 1 мкл вводят в хроматограф.
     
     Рассчитывают содержание бета-циперметрина в каждой фракции и определяют объем элюента, необходимый для наиболее полного элюирования вещества с колонки. Для данной методики он равен 15 мл смеси бензол-этилацетат (6:4).

2.5. Описание методики

2.5.1. Вода

     
     Пробу воды объемом 250 мл помещают в делительную воронку емкостью 500 мл и трижды экстрагируют хлороформом порциями 50 мл, 50 мл и 40 мл, интенсивно встряхивая воронку в течение 2 мин. После разделения фаз нижний слой собирают в концентратор, пропуская его через безводный сульфат натрия. Затем осушитель обмывают 5 мл хлороформа, которые объединяют с экстрактом. Объединенный экстракт упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре 35 °С. Сухой остаток растворяют в необходимом объеме гексана (2-5 мл) и хроматографируют аликвоту 1 мкл.
     

2.5.2. Семена рапса, зерно и зеленая масса кукурузы

     
     Измельченную пробу растительной продукции массой 10 г помещают в коническую колбу (объемом 250 мл), добавляют 100 мл 80%-го водного раствора ацетонитрила и встряхивают в течение 30 мин. Фильтруют через стеклянный пористый фильтр в концентратор (объемом 500 мл). К остатку в конической колбе приливают 50 мл 80%-го водного ацетонитрила и вновь встряхивают 30 мин. Фильтруют через тот же фильтр, перенеся все количество растительного материала на фильтр. Коническую колбу и осадки споласкивают два раза по 20 мл 80%-го водного ацетонитрила. Объединенный экстракт упаривают на роторном вакуумном испарителе при 35 °С до водного остатка. Водный остаток переносят в делительную воронку (объемом 250 мл). Концентратор обмывают два раза 15 мл 5%-го водного раствора хлорида натрия. Экстракцию бета-циперметрина из водного раствора проводят гексаном последовательно двумя порциями по 30 мл и одной - 20 мл. После полного разделения фаз водный (нижний) слой сливают в тот же концентратор, а верхний собирают в концентратор (объемом 250 мл) через безводный сульфат натрия (5 г помещают в воронку со стеклянным пористым фильтром), который промывают 5 мл гексана. Объединенный гексановый экстракт упаривают досуха на роторном вакуумном испарителе при температуре 35 °С. Сухой остаток растворяют в 4 мл гексана. Аликвоту объемом 2 мл наносят на одну кондиционированную колонку с оксидом алюминия, а оставшуюся часть раствора количественно переносят на вторую колонку с АlО. Колонки промывают 15 мл гексана, затем 15 мл смеси гексан-ацетон (1:1) и элюаты отбрасывают. Затем бета-циперметрин элюируют 15 мл смеси бензол-этилацетат (6:4) со скоростью 1 мл/мин и элюаты из двух колонок объединяют. Параллельное использование двух колонок с оксидом алюминия делает очистку экстрактов более эффективной. Объединенный элюат упаривают досуха на роторном вакуумном испарителе при 35 °С, растворяют в 2 мл гексана и 1 мкл вводят в хроматограф.
     

2.5.3. Рапсовое масло

     
     Навеску масла массой 5 г помещают в делительную воронку объемом 250 мл и растворяют в 50 мл гексана. Затем приливают 50 мл ацетонитрила. Встряхивают в течение 2 мин. Ацетонитрильный экстракт (нижний слой) собирают через безводный сульфат натрия в концентратор (объемом 250 мл). Экстракцию ацетонитрилом повторяют дважды тем же количеством растворителя. Объединенный экстракт упаривают досуха на роторном вакуумном испарителе при 35 °С.
     
     Упаренную пробу растворяют в 4 мл гексана, разделяют ее после растворения пополам и наносят на две параллельные подготовленные колонки с оксидом алюминия. Мешающие вещества элюируют 20 мл гексана, затем 5 мл смеси гексан-этилацетат (9:1). Элюат отбрасывают. Бета-циперметрин элюируют 15 мл смеси гексан-этилацетат (9:1) со скоростью 1 мл/мин. Объединенный элюат упаривают досуха на роторном вакуумном испарителе при 35 °С. Сухой остаток растворяют в 2 мл гексана и аликвоту 1 мкл хроматографируют.
     

2.6. Условия хроматографирования

     
     Хроматограф "Цвет-500М", модель 560 с детектором постоянной скорости рекомбинации (ДПР).
     
     Колонка металлическая 0,65 м  3 мм со смешанной неподвижной фазой 5% SE-30 ( по объему) на носителе Gas-Chrom Q (80-100 меш.) и 3% OV-17 ( по объему) на носителе Inerton-Super (0,16-0,20 мм). Расход газа-носителя (азот, осч) 55 мл/мин.
     

     
     Рабочая шкала электрометра 16х10 или 32х10.
     
     Скорость протяжки ленты самописца 200 мм/ч.
     
     Объем вводимой пробы 1 мкл.
     
     Время удерживания 3,3 мин.
     
     Линейный диапазон детектирования 0,1-2 нг.
     
     Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют среднюю высоту или площадь пика.
     

2.6.1. Возможность использования колонки с альтернативной фазой

     
     Удовлетворительные результаты также дает использование хроматографической набивной колонки длиной 2 м с неподвижной фазой OV-1, 3% на Инертоне-Супер при следующих условиях хроматографирования: температура колонки - 260 °С, детектора - 340 °С, испарителя - 270 °С; расход газа-носителя - 40 мл/мин.
     

2.7. Обработка результатов анализа

     
     Содержание бета-циперметрина рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:
     

     
      - содержание бета-циперметрина в анализируемом объеме (мг/кг, мг/л);
     
      - высота пика образца (мм);
     
      - высота пика стандарта (мм);
     
      - концентрация стандартного раствора бета-циперметрина (мкг/мл);
     
      - объем экстракта (мл);
     
      - масса или объем анализируемого образца (г, мл);
     
      - содержание бета-циперметрина в аналитическом стандарте (%).
     
     

3. Требования техники безопасности

     
     Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами.
     
     

4. Разработчики

     
     В.С.Горбатов, заведующий лабораторией, к. биол. н., Т.А.Бондарева, научн. сотр., Е.И.Андриевский, ст. научн. сотр., к.техн.н.
     
     Всероссийский научно-исследовательский институт фитопатологии. 143050, Московская обл., Одинцовский р-н, п/о Б.Вяземы, ВНИИФ, лаборатория химии окружающей среды. Телефон: (233) 4-31-05.



Текст документа сверен по:
официальное издание
Определение остаточных количеств пестицидов
в пищевых продуктах, сельскохозяйственном
сырье и объектах окружающей среды:
Сборник методических указаний. Выпуск 3. Часть 5. -
М.: Федеральный центр гигиены
и эпидемиологии Роспотребнадзора, 2006