МУК 4.1.815-99

     
     
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

     

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
по измерению концентраций ДИБИОМИЦИНА в воздухе рабочей зоны
методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

     
     
Дата введения: с момента утверждения

     
     
     УТВЕРЖДЕНЫ Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко 30.12.1999 г.
     
     

М.м. 1216,1

     
     В воздухе находится в виде аэрозоля.
     
     Обладает общетоксическим действием.
     
     ПДК в воздухе 0,1 мг/м.
     
     

Характеристика метода

     
     Метод основан на использовании высокоэффективной жидкостной хроматографии с применением УФ-детектора.
     
     Отбор проб производится с концентрированием на фильтр.
     
     Нижний предел измерения дибиомицина в хроматографируемом объеме пробы 0,225 мкг.
     
     Нижний предел измерения в воздухе дибиомицина 0,05 мг/м (при отборе 50 л воздуха).
     
     Диапазон измеряемых концентраций в воздухе дибиомицина от 0,05 до 1 мг/м.
     
     Определению не мешает присутствие доксорубицина и рубомицина.
     
     Суммарная погрешность измерения не превышает ±20%.
     
     Время выполнения измерения, включая отбор пробы, около 30 минут.
     
     

Приборы, аппаратура, посуда

     
     Микроколоночный жидкостной хроматограф "Милихром" или другие модели с УФ-детектором.
     
     Хроматографическая колонка длиной 120 мм, внутренним диаметром 2 мм, заполненная сорбентом "Силасорб СN" с размером зерен 7,0 мкм.
     
     Электроаспиратор ЭА-1, ОСТ 95.10052-84.
     
     Фильтродержатель, ТУ 95-7205-77.
     
     Микроскоп отсчетный типа МПБ-2, ТУ 3.3-824-78.
     
     Стеклянная ректификационная колонна длиной 550 мм и внутренним диаметром 20 мм, флегмовое число 5 (или другая такого же типа).
     
     Колбы мерные, вместимостью 25, 100 мл и 1 л, ГОСТ 1770-74.
     
     Пипетки, вместимостью 10 мл, ГОСТ 20292-74*.
________________
     * Действуют ГОСТ 29169-91, ГОСТ 29227-91-ГОСТ 29229-91, ГОСТ 29251-91-ГОСТ 29253-91. - Примечание изготовителя базы данных.
          
     Пробирки с пришлифованными пробками, вместимостью 10 мл, ГОСТ 10515-75.
     
     

Реактивы, растворы и материалы

     
     Дибиомицин фармакопейный, содержание основного вещества не менее 98%.
     
     Калий марганцовокислый (калий перманганат), ГОСТ 20490-75.
     
     Ацетонитрил очищенный. Ацетонитрил очищенный получают из ацетонитрила, ТУ 6-09-3534-82, ч., путем ректификации с предварительной химической обработкой, которая заключается в кипячении растворителя с обратным холодильником в присутствии перманганата калия из расчета 1 г перманганата калия на 1 л растворителя. Кипячение проводится до полного перехода перманганата калия в двуокись марганца. Перед ректификацией осадок двуокиси марганца отделяют путем фильтрации через фильтр Шотта N 4. Ректификационная колонна длиной 550 мм и внутренним диаметром 20 мм, флегмовое число 5. Насадка - спиральки Левина из нержавеющей стали (2x2x0,2 мм). Основную фракцию отбирают при температуре 81,6 °С (атмосферное давление) в пределах колебаний ±0,1 °С.
     
     Натрий фосфорнокислый двузамещенный 12-водный, NаНРОх12НО (динатрийфосфат), ГОСТ 4172-76.
     
     Калий фосфорнокислый однозамещенный KНРО (калий фосфат), ГОСТ 4198-75.
     
     0,067 М раствор динатрийфосфата готовят растворением 23,986 г натрия фосфорнокислого двузамещенного 12-водного в воде в мерной колбе вместимостью 1 л.
     
     0,067 М раствор калийфосфата готовят растворением 9,078 г калия фосфорнокислого однозамещенного в воде в мерной колбе вместимостью 1 л.
     
     0,067 М фосфатный буфер (рН 7,2) готовят смешивая 720 мл 0,067 М раствора динатрийфосфата и 280 мл 0,067 М раствор калий фосфата.
     
     Фосфатный буфер устойчив при хранении в холодильнике в течение месяца.
     
     Растворитель: 0,067 М фосфатный буфер (рН 7,2).
     
     Элюент: 0,067 М фосфатный буфер (рН 7,2) - ацетонитрил (7:1).
     
     Стандартным раствор N 1 с концентрацией дибиомицина 500 мкг/мл готовят растворением 0,05 г дибиомицина в растворителе в мерной колбе вместимостью 100 мл.
     
     Стандартный раствор N 2 с концентрацией дибиомицина 10 мкг/мл готовят соответствующим разбавлением стандартного раствора N 1 растворителем. Растворы устойчивы в течение суток.
     
     Фильтры АФА-ВП-10, ТУ 85-743-80.
     

Отбор пробы воздуха

     
     Воздух с объемным расходом 5 мл/мин аспирируют через фильтр АФА-ВП-10. Для определения 0,5ПДК достаточно отобрать 50 л воздуха.
     
     Пробы можно хранить в закрытых сосудах в холодильнике в течение месяца.
     
     

Подготовка к измерению

     
     Хроматографическая колонка промышленного изготовления.
     
     Количественный анализ проводят методом абсолютной калибровки с использованием градуировочных растворов, которые готовят с концентрацией от 0,0005 до 0,01 мкг/мкл путем соответствующего разбавления стандартного раствора N 2 растворителем.
     
     Растворы устойчивы в течение суток при хранении в холодильнике в закрытых сосудах.
     
     Инжектируют в хроматограф от 0,225 до 4,5 мкг дибиомицина. Для этого набирают в капилляр микродозатора 100 мкл растворителя, затем 150 мкл градуировочного раствора и наносят набранные 250 мкл на колонку со скоростью 200 мкл/мин. Операцию повторяют 2 раза, после этого наносят еще 150 мкл хроматографируемого раствора и включают подачу элюента.
     
     Условия хромагографирования градуировочных смесей и анализируемых проб:
     

     
     На полученной хроматограмме измеряют площади пиков и строят градуировочный график, выражающий зависимость площади пиков (мм) от содержания дибиомицина в хроматографируемом объеме пробы (мкг).
     
     Построение градуировочных графиков необходимо проводить не менее, чем по 6 точкам, выполняя по 5 параллельных измерений для каждого инжектируемого объема. Проверку градуировочных графиков следует проводить при изменении условий анализа, но не реже 1 раза в месяц.
     
     

Проведение измерения

     
     Фильтр с отобранной пробой помещают в пробирку с пришлифованной пробкой, добавляют 5 мл растворителя и оставляют на 15 минут при комнатной температуре и периодическом перемешивании. Степень десорбции с фильтра дибиомицина не менее 96,5%.
     
     450 мкл анализируемого раствора инжектируют в колонку хроматографа. Для этого набирают в капилляр микродозатора 100 мкл растворителя, затем 150 мкл раствора и наносят набранные 250 мкл на колонку со скоростью 200 мкл/мин. Операцию повторяют 2 раза, после чего наносят еще 150 мкл раствора и включают подачу элюента.
     
     Хроматографирование анализируемого раствора проводят в тех же условиях по отношению к тем же элюентам, что и при построении градуировочных графиков.
     
     Количественное определение содержания дибиомицина в хроматографируемом объеме проводят по соответствующему предварительно построенному градуировочному графику.
     
     

Расчет концентрации

     
     Концентрацию дибиомицина "" в воздухе (мг/м) вычисляют по формуле:
     

,

где  - содержание дибиомицина в хроматографируемом объеме пробы, найденное по градуировочному графику, мкг;
          
      - объем пробы, взятой для анализа, мл;
         
      - общий объем анализируемого раствора, мл;
          
      - объем воздуха, отобранный для анализа и приведенный к стандартным условиям, л (см. Приложение 1).