МУК 4.1.881-99  

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
по измерению концентраций N-ацетил-L-глутаминовой кислоты
в воздухе рабочей зоны методом тонкослойной хроматографии

     
     
Дата введения: с момента утверждения

     УТВЕРЖДЕНЫ Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко 30.12.1999 г.
     
     

          
     N-ацетил-L-глутаминовая кислота (АГК) - белый или почти белый кристаллический порошок без запаха, с температурой плавления 193-198 °С. Растворим в воде, умеренно растворим в спирте 95%, практически нерастворим в эфире.
     
     В воздухе находится в виде аэрозоля.
     
     Обладает общетоксическим действием.
     
     ПДК в воздухе 2,0 мг/м.
     
     

Характеристика метода

     
     Метод основан на хроматографировании вещества в тонком слое на пластинках Силуфол с последующим обнаружением хроматограмм раствором о-толидина и денситометрировании окрашенных зон при длине волны 513 нм.
     
     Отбор проб проводят с концентрированием на фильтр.
     
     Нижний предел измерения содержания вещества в анализируемом объеме 2,0 мкг.
     
     Нижний предел измерения вещества в воздухе 1,0 мг/м (при отборе 20,0 л воздуха).
     
     Диапазон измеряемых концентраций в воздухе от 1,0 до 10,0 мг/м.
     
     Определению не мешают добезилат кальция, анестезин, аммиак.
     
     Суммарная погрешность измерения не превышает ±20%.
     
     Время выполнения измерения 2 часа, включая отбор проб.
     
     

Приборы, аппаратура, посуда

     
     Спектрофотометр Спекорд М-40 с приставкой для измерения отражения с фотометрическим шаром, денситометр БИАН-170.
     
     Аспирационное устройство.
     
     Фильтродержатели.
     
     Хроматографическая камера для ТСХ размером 10x20 см, ГОСТ 23932-79Е.
     
     Пластинки для тонкослойной хроматографии Силуфол УФ 254.
     
     Хроматографическая камера для ТСХ, ГОСТ 23932-79.
     
     Стаканы химические, вместимостью 50 мл, ГОСТ 19908-80.
     
     Вакуумная установка.
     
     Колбы грушевидные, вместимостью 25 мл, ГОСТ 23932-79.
     
     Колбы мерные, вместимостью 25 и 100 мл, ГОСТ 1770-74.
     
     Пипетки, вместимостью 1, 2, 5 и 10 мл, ГОСТ 20292-74*.
________________
     * Действуют ГОСТ 29169-91, ГОСТ 29227-91-ГОСТ 29229-91, ГОСТ 29251-91-ГОСТ 29253-91. - Примечание изготовителя базы данных.
          
     Эксикатор с пришлифованной крышкой, ГОСТ 6371-73.
     
     Сушильный шкаф.

Реактивы, растворы, материалы

     
     N-Ацетил-L-глутаминовая кислота, фармакопейная.
     
     Этиловый спирт, ГОСТ 5963-67*.
_______________
     * Действует ГОСТ Р 51723-2001. - Примечание изготовителя базы данных.
          
     Бутиловый спирт, ГОСТ 6006-78.
     
     Кислота уксусная ледяная, ГОСТ 61-75.
     
     Кислота соляная, х.ч. ГОСТ 3118-77, 10% раствор.
     
     Калий иодистый, ч.д.а., ГОСТ 4232-74
     
     O-толидин, ТУ 6-09-11-788-764
     
     Калий марганцовокислый, ГОСТ 20490-75, х.ч.; 1,5% раствор.
     
     Калий иодистый, ГОСТ 4232-74, ч.д.а.
     
     Подвижный растворитель: н-бутиловый спирт - ледяная уксусная кислота - вода (40:15:10 мл).
          

Проявляющий реактив

     
     1. Получение паров хлора. На дно эксикатора, вместимостью 1,5 л наливают 50 мл 1,5% раствора калия перманганата и 50 мл 10% раствора соляной кислоты и осторожно перемешивают. Внутрь эксикатора кладут фарфоровую вкладку и закрывают пришлифованной крышкой. Смесь готовят за 60 мин до определения. Эксикатор должен находиться в вытяжном шкафу.
     
     2. Раствор о-толидина. 160 мг о-толидина растворяют в 30 мл ледяной уксусной кислоты, доводят объем до 500 мл дистиллированной водой и добавляют 1,0 г иодистого калия. Хранят в посуде темного стекла. Реактив устойчив в течение 2 недель.
     
     Стандартный раствор N 1 с концентрацией 500 мкг/мл готовят растворением 0,0500 г вещества в 40% растворе этанола в мерной колбе вместимостью 100 мл. Раствор устойчив в течение недели при хранении в холодильнике.
     
     Стандартные растворы, с концентрацией 20-40-80-120-200 мкг/мл вещества, готовят соответствующим разбавлением 40% раствором этанола стандартного раствора N 1. Растворы устойчивы в течение недели при хранении в холодильнике.
     
     Фильтры АФА-ВП-10, ТУ 95-743-80.
     
     

Отбор пробы воздуха

     
     Воздух с объемным расходом 10 л/мин аспирируют через фильтр АФА-ВП-10. Для измерения 1/2ПДК следует отобрать 20 л воздуха. Срок хранения проб 7 суток.
     
     

Подготовка к измерению

     
     Фильтр с отобранной пробой переносят в химический стакан, объем доводят 40% этанолом до 6 мл и оставляют на 15 мин, периодически помешивая стеклянной палочкой для лучшего растворения вещества. Степень десорбции с фильтра 95%. Полученный раствор сливают в грушевидную колбу и упаривают досуха под вакуумом при температуре 60-70 °С. Сухой остаток растворяют в 1,0 мл 40% этанола и используют полученный раствор для анализа.
     
     На линию старта пластинки Силуфол (от края 1,5 см) наносят с помощью микропипетки по 0,1 мл растворов пробы и стандартных растворов с концентрацией от 20 до 200 мкг (размер пятна не должен превышать 0,5 см). Пластинку высушивают на воздухе в течение 3 мин, помещают в камеру для хроматографирования с системой растворителей н-бутиловый спирт - ледяная уксусная кислота - вода (40:15:10 мл) и хроматографируют восходящим методом. После того как фронт растворителя пройдет до конца пластинки, ее вынимают из камеры и подсушивают на воздухе 20 мин. Затем пластинку обрабатывают парами воды (держат 2 мин над кипящей водяной баней) и переносят в камеру с парами хлора, где выдерживают 20 мин. Для удаления паров хлора пластинку помещают под фен и обрабатывают теплым воздухом 2 мин, затем орошают раствором о-толидина и высушивают феном (все операции осуществляют только в вытяжном шкафу).
     
     АГК проявляется в виде темно-синего пятна с величиной =0,76±0,02. Окраска пятен устойчива в течение суток.
     
     Количественное измерение содержания АГК в пробе проводят путем измерения пятен проб и стандартов с помощью планиметра или денситометра.
     
     Интенсивность окраски пятен вещества измеряют на спектрофотометре Спекорд М-40 с приставкой для отражения с фотометрическим шаром при длине волны 513 нм по отношению к фону. В качестве фона используется участок исследуемой пластинки без вещества. Для каждой концентрации измеряют отражение () в %. Оптическая плотность () и отражение () связаны между собой соотношением:     

где  - выражено в %, тогда

 или  

     По средним результатам из пяти определений строят градуировочный график: на ось ординат наносят значение оптических плотностей градуировочных хроматограмм, на ось абсцисс - соответствующее им количество вещества в мкг в градуировочном растворе.
     
     При использовании планиметра количество вещества "" (в мкг) в анализируемом объеме пробы находят по формуле:
               

,

где  - содержание вещества на пятне стандарта, мкг;
                     
      - площадь пятна пробы, мм.
            
      - площадь пятна стандарта, мм.
     
     При использовании денситометра содержание вещества в анализируемом объеме находят по градуировочному графику.
     
     

Расчет концентрации

     
     Концентрацию АГК в воздухе "" (мг/м) вычисляют по формуле:
     

,

где - содержание вещества, найденное по градуировочному графику, мкг;
                    
      - общий объем раствора пробы, мл;
                   
      - объем раствора пробы, используемый для анализа, мл;
                  
      - объем воздуха, отобранный для анализа и приведенный к стандартным условиям, л (см. Приложение 1).