МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
HА ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЗООКУМАРИНА В ВОЗДУХЕ

     
     
     УТВЕРЖДЕНЫ Заместителем Главного государственного санитарного врача СССР А.И.Заиченко 18 марта 1981 г. N 2319-81
     
     

     
     
     3-(-Ацетонилбензил)-4-оксикумарин представляет собой желтовато-сероватый порошок с едва уловимым характерным запахом с т.пл. 161 °C. Растворяется в ацетоне, диоксане, в 5% растворе едкого натра, трудно растворим в 95% спирте, эфире. Не растворяется в бензоле, в воде стоек.
     
     

I. Общая часть

     
     1. Определение основано на хроматографировании зоокумарина в тонком слое силикагеля КСК и образовании окрашенного продукта взаимодествия зоокумарина с диазотированной сульфаниловой кислотой.
     
     2. Предел обнаружения - 10 мкг в анализируемом объеме раствора.
     
     3. Предел обнаружения в воздухе - 0,05 мг/м (расчетный).
     
     4. Погрешность определения ±14%.
     
     5. Диапазон измеряемых концентраций 0,05-0,4 мг/м.
     
     6. Определению не мешают неокумарин и дикумарин.
     
     7. Предельно допустимая концентрация зоокумарина в воздухе 0,1 мг/м.
     
     

II. Реактивы и аппаратура

     
     8. Применяемые реактивы и растворы
     
     Зоокумарин 92%, х.ч.
     
     Стандартный раствор зоокумарина N 1 с содержанием 1000 мкг/мл готовят растворением 100 мг зоокумарина в ацетоне в мерной колбе емкостью 100 мл.
     
     Стандартный раствор N 2, содержащий 100 мкг/мл зоокумарина, готовят соответствующим разбавлением ацетоном стандартного раствора N 1.
     
     Эфир диэтиловый, ГОСТ 6265-52.
     
     Бензол, х.ч., ГОСТ 5955-75.
     
     Спирт этиловый, ГОСТ 5963-67*.
______________
     * На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 51723-2001. - Примечание .
     
     Ацетон перегнанный, ч.д.а., ГОСТ 2603-71.
     
     Натрий азотистокислый, х.ч., ГОСТ 4197-66, 10%-ный раствор.
     
     Натрий углекислый, х.ч., ГОСТ 84-69, 10%-ный раствор.
     
     Кали едкое, х.ч., ГОСТ 4203-65, 10%-ный раствор.
     
     Гипс медицинский, ГОСТ 4766-49.
     
     Кальций хлористый безводный, х.ч., ГОСТ 4234-69.
     
     Соляная кислота, х.ч., ГОСТ 4118-67.
     
     Сульфаниловая кислота, х.ч., ГОСТ 5821-69.
     
     Подвижная фаза: смесь ацетона и бензола в соотношении 2:1 по объему.
     
     Проявляющий реактив - диазотированная сульфаниловая кислота. 25 г сульфаниловой кислоты растворяют в 1?5* мл раствора едкого калия. После охлаждения добавляют 100 мл 10%-ного раствора азотисто-кислого натрия. Затем полученный раствор прибавляют по каплям к охлажденной льдом соляной кислоте (40 мл HCI уд. вес 1,19 в 20 мл воды) так, чтобы температура раствора не поднималась выше 8 °С. Полученную диазотированную сульфаниловую кислоту отфильтровывают, промывают ледяной водой, этанолом, эфиром и сушат на воздухе. Для проявления хроматограммы 0,1 г диазотированной сульфаниловой кислоты растворяют в 20 мл раствора углекислого натрия.
_______________
     * Брак оригинала. - Примечание .
     
     9. Применяемые посуда и приборы.
     
     Аспирационное устройство.
     
     Фильтродержатели.
     
     Фильтры беззольные (синяя лента).
     
     Колбы мерные, ГОСТ 1770-74, емкостью 50-100 мл.
     
     Микропипетки, ГОСТ 20292-74, емкостью 0,1-0,2 мл с оттянутыми концами.
     

     Цилиндры мерные, ГОСТ 1770-74, емкостью 25, 50, 100 мл.
     

     Стаканы химические, емкостью 50-100 мл.
     

     Палочки стеклянные.
     
     Воронки химические диаметром 5-7 см.
     
     Чашки выпарительные фарфоровые, диаметром 4-5 см.
     
     Камера хроматографическая - сосуд цилиндрический, высотой 22 см и диаметром 14,5 см с пришлифованной крышкой.
     
     Пульверизаторы стеклянные.
     
     Сита металлические с диаметром 0,05 мм.
     
     Эксикатор.
     
     Термометр до 100 °С.
     
     Пластинки для хроматографии. Стеклянные пластинки (размер 9x12), промытые содой, хромовой смесью и дистиллированной водой, сушат, протирают спиртом или эфиром и покрывают сорбционной массой.
     
     Для получения сорбционной массы силикагель марки КСК предварительно очищают от примесей. Для этого его заливают на 18-20 часов соляной кислотой (1:1), затем кислоту сливают, силикагель промывают водой и кипятят в течение 2-3 часов с разбавленной азотной кислотой (1:1). Обработанный таким образом силикагель промывают проточной водой, затем дистиллированной до нейтральной реакции промывных вод, сушат в сушильном шкафу при температуре 130 °С в течение 6 часов.
     
     Очищенный силикагель измельчают в ступке и отбирают фракцию 0,05 мм.
     
     10 г просеянного силикагеля и 0,5 г гипса хорошо растирают в фарфоровой ступке, помещают в колбу с притертой пробкой, добавляют 30 мл дистиллированной воды, встряхивают в течение 10-15 минут до образования однородной массы. Полученную массу равномерным слоем наносят на 6 пластинок, которые сушат на воздухе при комнатной температуре в течение 24 часов, а затем активируют нагреванием в сушильном шкафу в течение 3 часов при температуре 100 °С.
     
     

III. Отбор проб воздуха

     
     10. Воздух со скоростью 20 л/мин протягивают через беззольный фильтр, помещенный в фильтродержатель. Для определения 1/2 предельно допустимой концентрации следует отобрать 400 литров воздуха. Срок хранения отобранных проб неограничен.
     
     

IV. Описание определения

     
     11. Фильтр с пробой помещают в стакан, заливают 6 мл ацетона и оставляют на 30 минут, периодически перемешивая их содержимое. По истечении этого времени, фильтр тщательно отжимают стеклянной палочкой. Раствор переносят в выпарительную чашку, ацетон упаривают на воздухе под тягой. Сухой остаток в выпарительной чашке растворяют в 0,2 мл ацетона. Проводят контрольные опыты с чистым фильтром, их обрабатывают так же, как исследуемые образцы. На стартовую линию хроматографической пластинки наносят 0,1 мл ацетонового раствора пробы и 0,1, 0,2, 0,3 мл стандартного раствора зоокумарина, содержащих 10, 20, 30 мкг препарата. Пластинку сушат при комнатной температуре и помещают в камеру для хроматографирования, в которую за 30 минут до хроматографирования наливают подвижный растворитель (ацетон:бензол в отношении 2:1 в таком количестве, чтобы пластинка погружалась в растворитель не более чем на 0,5 см. Сверху камеру закрывают стеклянной крышкой. После того, как растворитель поднимается на 10 см, пластинку вынимают из камеры, отмечают линию фронта и оставляют на несколько минут на воздухе для испарения растворителя. Затем пластинку опрыскивают проявляющим реагентом. Анализируемый препарат проявляется на пластинке в виде желтооранжевых пятен с величиной =0,76±0,1. Окраска пятен устойчива в течение 1 часа.
     
     Количественное определение зоокумарина проводят путем сравнения интенсивности окраски пятен пробы с окраской пятен стандартного раствора.
     
     Концентрацию зоокумарина в мг/м воздуха () вычисляют по формуле:
     

,

где  - количество зоокумарина, найденное в анализируемом объеме пробы, мкг;

     
      - объем ацетона, взятый для растворения сухого остатка, мл;
     
      - объем пробы, взятый для хроматографирования, мл;
     
      - объем воздуха в л, взятый для анализа и приведенный к стандартным условиям по формуле (см. приложение 1).
     
     
     
Текст документа сверен по:
/ Министерство здравоохранения СССР.
Методические указания по определению
вредных веществ в воздухе. Выпуск XVII. - М., 1981