МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОМУ ИЗМЕРЕНИЮ СОДЕРЖАНИЯ
ГЕПТИЛОВОГО И АМИЛОВОГО СПИРТОВ НА КОЖЕ

     
     
     УТВЕРЖДЕНЫ заместителем Главного государственного санитарного врача СССР В.И.Чибураевым 28 сентября 1989 г. N 5111-89
     
     

           
     Амиловый спирт - бесцветная жидкость. Т.кип. 138 °С, Т.пл. (-78,5°). Растворимость в воде 2,7%, хорошо растворим в этаноле, эфире, ацетоне и некоторых других органических растворителях.
          

     Гептиловый спирт - бесцветная жидкость. Т.кип. 174-176°, Т.пл. -34,1°.
     
     Растворим в этаноле, эфире, ацетоне и некоторых других органических растворителях.
     
     

1. Характеристика методики

     
     Определение основано на переведении спиртов в соответствующие нелетучие производные - 3,5-динитробензонаты, которые разделяют в тонком слое силикагеля, пропитанного родамином 6ж. Количественное определение проводят после извлечения бензоатов по реакции Яновского.
     
     В качестве смывающей жидкости используется ацетон.
     
     Диапазон измеряемого содержания 0,12-1,2 мг/см.
     
     Определению не мешает метиловый спирт.
     
     Граница суммарной погрешности измерения ±25%.
     
     ПДУ гептилового и амилового спирта на коже 0,2 мг/см.
     
     

2. Реактивы и растворы

     
     Спирты: амиловый и гептиловый, х.ч., перегнанные при температуре кипения.
     
     Бензол, ГОСТ 5955-75, осушенный над хлористым кальцием.
     
     3,5-динитробензоилхлорид, раствор с содержанием 50 мг в 30 мл бензола.
     
     Пиридин, ГОСТ 13647-78, 10%-ный раствор в бензоле.
     
     Ацетон, ГОСТ 2603-71.
     
     Натрия гидроксид, ГОСТ 4328-77, 40%-ный раствор.
     
     Родамин 6ж, 0,05%-ный раствор в этаноле.
     
     Диэтиловый эфир для наркоза.
     
     Пластинки хроматографические "Silufol".
     
     Основной стандартный раствор готовят для каждого спирта отдельно. Для чего в мерную колбу на 25 мл вносят 10-15 мл бензола и взвешивают. Добавляют 0,1-0,2 мл спирта и вновь взвешивают. По разности в весе определяют количество спирта. Объем доводят до метки бензолом и вычисляют содержание спирта в 1 мл. Раствор устойчив в течение месяца.
     
     Стандартный раствор N 1, содержащий 2 мг/мл, готовят соответствующим разбавлением основного раствора.
     
     

3. Приборы и посуда

     
     Теплоэлектровентилятор.
     
     Пробирки с притертыми пробками высотой 120 мм, внутренним диаметром 15 мм.
     
     Камера хроматографическая размером 22х25х12 см.
     
     Кювета эмалированная размером 22х27 см.
     
     Колбы мерные вместимостью 25х50 мл.
     
     Микропипетки, ГОСТ 20292-74*, вместимостью 0,1-0,2 мл.
_______________
     * Действуют ГОСТ 29169-91, ГОСТ 29227-91-ГОСТ 29229-91, ГОСТ 29251-91-ГОСТ 29253-91. - Примечание изготовителя базы данных.     

     
     Пипетки, ГОСТ 20222-74, вместимостью 1, 2, 5 и 10 мл.
     
     Баня водяная.
     
     Термометр на 100 °С.
     
     Пинцет медицинский.
     
     Скальпель.
     
     Воронки стеклянные 3,0-3,5 см.
     
     

4. Проведение измерения  

Условия проведения смыва

     
     Смыв с кожных покровов проводится способом обмыва. Для этого в фарфоровую чашку наливают 30 мл ацетона. Ватным тампоном (0,3 г), смоченным в смывающей жидкости, обмывают участок кожного покрова (100 см) сверху вниз. При этом тампон несколько раз обмакивают в жидкость. Смыв переносят в склянку. Одновременно проводят контрольный смыв у рабочих, не контактирующих с амиловым и гептиловым спиртами.
     

Условия анализа

     
     Вату извлекают из смыва пинцетом, помещают в воронку, тщательно отжимают и вновь промывают 5 мл ацетона. Жидкость присоединяют к основному смыву, фильтруют и измеряют объем. Для анализа берут 1 мл пробы, добавляют 2 мл бензола, 0,4 мл раствора 3,5-динитробензоилхлорида и 2 капли раствора пиридина.
     
     Одновременно с пробами готовят бензоаты спиртов для построения стандартной шкалы ("свидетели").
     
     С этой целью берут по 0,5 мл стандартного раствора каждого спирта с содержанием - 2 мг/мл, переносят в колориметрическую пробирку, добавляют 0,4 мл раствора 3,5-динитробензоилхлорида, 2 капли раствора пиридина, 1 мл ацетона и объем доводят до 3 мл бензолом.
     
     И стандарт, и пробу помещают на водяную баню, постепенно доводят температуру до 90-95 °С и пробу выпаривают до сухого остатка.
     
     Сухой остаток пробы растворяют в 30 мл бензола; 0,05-0,1 мл этого раствора используют для последующего хроматографического определения.
     
     Стандарт растворяют в 1 мл бензола, при этом получают раствор 3,5-динитробензоатов спиртов, соответствующих содержанию 1 мг каждого спирта в 1 мл.
     
     Хроматографическое разделение:
     
     Пластинку "Silufol" размером 15х15 см пропитывают родамином 6ж. С этой целью в эмалированную кювету наливают 0,05%-ный этанольный раствор родамина и наносят его на пластинку путем быстрого погружения ее в раствор.
     
     Пластинку сушат в вытяжном шкафу при комнатной температуре в течение 4-5 мин и затем 30 мин в сушильном шкафу при температуре 100-110 °С. На обработанной таким образом пластинке проводят линию старта в 1,5 см от края, на которой намечают 6 точек на расстоянии 2 см друг от друга. В камеру можно помещать сразу две пластинки, т.е. одновременно определять несколько проб. При этом микропипеткой в часть точек каждой пластинки наносят пробы, в остальные - растворы "свидетелей", соответствующие 20-40-80-100-140-180-200 мкг каждого спирта.
     
     После нанесения проб и "свидетелей" пластинку помещают в хроматографическую камеру, на дно которой предварительно (за 1,5-2 ч до начала анализа) наливают бензол (подвижная фаза).
     
     Пластинку извлекают из камеры, когда подвижный растворитель поднимется на 13,5-14 см, сушат в вытяжном шкафу при комнатной температуре и вторично помещают в камеру.
     
     Когда растворитель пройдет то же расстояние, что и при первом разделении, пластинку извлекают и сушат в тех же условиях. Пятна бензоатов спиртов при этом проявляются в виде малиновых пятен на слабо розовом фоне.
     
     При слабой окраске пятен наблюдение за разделением можно вести в фильтрованном ультрафиолетовом свете (320-380 нм). При этом видны коричневые пятна бензоатов на желтом фоне.
     
     Путем сравнения на хроматограмме пятен проб с пятнами стандартных растворов "свидетелей" делают вывод о наличии в пробе спирта. Производные одного и того же спирта располагаются на одинаковом расстоянии от линии старта. Ближе к старту находится амиловый спирт  амилового спирта 0,65; гептилового 0,83.
     
     Для количественного определения спиртов в пробах бензоаты пятен проб и "свидетелей" элюируют эфиром.
     
     С этой целью скальпелем осторожно переносят силикагель пятна в пробирку с притертой пробкой, заливают 2 мл эфира, при взбалтывании в течение 3-4 мин извлекают бензоаты. Частицам силикагеля дают осесть на дно пробирки, а раствор переносят в сухую пробирку.
     
     Силикагель промывают 1 мл эфира и присоединяют к первой порции элюата. Ацетоном доводят содержимое до 5 мл.
     
     После извлечения бензоатов проб и "свидетелей" во все пробирки добавляют по 1 мл раствора едкого натра, осторожно перемешивают и устанавливают количество спирта путем сравнения интенсивности фиолетовой окраски проб с окраской "свидетелей" стандартной шкалы.
     
     Содержание спирта  (мг/см) вычисляют по формуле:
     

,

     
где  - количество искомого вещества во всей пробе, мг;

     
      - площадь исследуемой части тела, см.