МУК 4.1.1679-03

     

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Спектрофотометрическое измерение массовых концентраций 33-[(3-амино-3,6-дидеокси--D-маннопиранозил)окси]-1,3,4,7,9,11,17,37-октагидрокси- 15,16,18-триметил-13-оксо-14,39-диоксабицикло-[33,3,1]нонатриаконта-19,21,25,27,29,31-
гексаен-36-карбоновой кислоты (нистатин) в воздухе рабочей зоны

     
     
Дата введения: с момента утверждения

     
     
     РАЗРАБОТАНЫ Государственным унитарным предприятием "Всероссийский научный центр по безопасности биологически активных веществ" (ГУП "ВНЦ БАВ"): В.П.Жестков, А.П.Крымов, В.Ф.Алещенко, Л.И.Крымова.
     
     УТВЕРЖДЕНЫ Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации Г.Г.Онищенко 29 июня 2003 г.
     
     

1. Область применения

     
     Настоящие методические указания устанавливают количественный спектрофотометрический анализ воздуха рабочей зоны на содержание нистатина в диапазоне массовых концентраций 0,5-20,0 мг/м.
     
     

2. Характеристика вещества

     
     2.1. Структурная формула (нистатин А)     
     

     
     2.2. Эмпирическая формула CHNO
     
     2.3. Молекулярная масса 926,1.
     
     2.4. Регистрационный номер CAS 1400-61-9.
     
     2.5. Физико-химические свойства.
     
     Нистатин является смесью стереоизомеров: нистатин А, нистатин А и др. Нистатин - светло-желтый кристаллический порошок со слабым специфическим запахом и горьким вкусом. Практически не растворим в воде, эфире, хлороформе, очень мало растворим в 95%-ном этиловом спирте, мало растворим в метаноле, бутаноле, хорошо растворим в диметилформамиде, ледяной уксусной кислоте, пиридине. Чувствителен к действию света, высоких температур и кислороду воздуха. Легко разрушается в кислой и щелочной среде и при действии окислителей. Гигроскопичен.
     
     Агрегатное состояние в воздухе - аэрозоль.
     
     2.6. Токсикологическая характеристика.
     
     Нистатин - антибиотик полиеновой группы, оказывает противогрибковое действие, малотоксичен при поступлении внутрь, обладает слабым раздражающим действием при нанесении на кожу, оказывает общетоксическое действие.
     
     Предельно допустимая концентрация (ПДК) в воздухе рабочей зоны 1,0 мг/м; 2 класс опасности.
     
     

3. Погрешность измерений

     
     Методика обеспечивает выполнение измерений массовых концентраций нистатина с погрешностью, не превышающей ±16%, при доверительной вероятности 0,95.
     
     

4. Метод измерений

     
     Измерения массовых концентраций нистатина выполняют методом спектрофотометрии.
     
     Метод определения основан на способности растворов нистатина в смеси этилового спирта с 1 н водным раствором ледяной уксусной кислоты в соотношении (1:1) по объему поглощать УФ-излучение.
     
     Измерение проводят при длине волны 305 нм.
     
     Отбор проб проводят с концентрированием на фильтр.
     
     Нижний предел измерения содержания нистатина в анализируемом объеме пробы - 5 мкг.
     
     Нижний предел измерения массовой концентрации нистатина в воздухе рабочей зоны - 0,5 мг/м (при отборе 10 дм воздуха).
     
     Субстанция поступает в производство готовой. Метод специфичен в условиях производства таблеток нистатина. Определению не мешают крахмал, лактоза, стеариновая кислота, тальк, желатин.
     
     

5. Средства измерений, вспомогательные устройства,
материалы, реактивы, растворы

     
     При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы и растворы.
     
     5.1. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы
     

     
     Допускается применение иных средств измерений, вспомогательных устройств, реактивов и материалов с техническими, метрологическими характеристиками и квалификацией не хуже приведенных в данном разделе.
     
     

6. Требования безопасности

     
     6.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005-88.
     
     6.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ должны соблюдаться меры противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91.
     
     6.3. При выполнении измерений с использованием спектрофотометра соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.
     
     

7. Требования к квалификации операторов

     
     К выполнению измерений и обработке их результатов допускают лиц с высшим или средним специальным образованием, прошедших обучение и имеющих навыки работы на спектрофотометре.
     
     

8. Условия измерений

     
     8.1. Процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха (20±5) °С, атмосферном давлении 84-106 кПа и относительной влажности воздуха не более 80%.
     
     8.2. Выполнение измерений на спектрофотометре проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
     
     

9. Подготовка к выполнению измерений

     
     Перед выполнением измерений проводят следующие работы: приготовление растворов, подготовку спектрофотометра, установление градуировочной характеристики, отбор проб.
     

9.1. Приготовление растворов

     
     9.1.1. Основной стандартный раствор нистатина с концентрацией 500 мкг/см готовят растворением 0,0500 г вещества в смеси этилового спирта с 1 н водным раствором ледяной уксусной кислоты в соотношении (1:1) по объему в мерной колбе, вместимостью 100 см. Раствор используют свежеприготовленным.
     
     9.1.2. Стандартный раствор нистатина N 1 с концентрацией 100 мкг/см готовят разбавлением 20 см основного стандартного раствора смесью этилового спирта с 1 н водным раствором ледяной уксусной кислоты в соотношении (1:1) по объему в мерной колбе вместимостью 100 см. Раствор используют свежеприготовленным.
     
     9.1.3. Стандартный раствор нистатина N 2 с массовой концентрацией 10 мкг/см готовят разбавлением 10 см стандартного раствора N 1 смесью этилового спирта с 1 н водным раствором ледяной уксусной кислоты в соотношении (1:1) по объему в мерной колбе вместимостью 100 см. Раствор используют свежеприготовленным.
     
     9.1.4. Приготовление 1 н водного раствора ледяной уксусной кислоты. В мерную колбу вместимостью 1000 см, приливают 800 см дистиллированной воды, добавляют 58 см концентрированной кислоты ледяной уксусной (плотность 1,05), доводят объем раствора дистиллированной водой до метки и перемешивают. Раствор устойчив в течение 30 сут.
     
     9.1.5. Смесь: 250 см 1 н водного раствора ледяной уксусной кислоты наливают в мерную колбу вместимостью 500 см, и доводят до метки спиртом этиловым. Смесь тщательно перемешивают и оставляют на 10-15 мин. Затем снова добавляют до метки спирт этиловый и перемешивают содержимое колбы. Полученную смесь используют для приготовления стандартных градуировочных растворов нистатина и растворения отобранных проб.
     

9.2. Подготовка прибора

     
     Подготовку спектрофотометра проводят в соответствии с руководством по его эксплуатации.
     

9.3. Установление градуировочной характеристики

     
     Градуировочную характеристику, выражающую зависимость оптической плотности раствора от массы нистатина, устанавливают по шести сериям растворов из пяти параллельных определений в каждой серии согласно табл.1.
     
     

Таблица 1

     
Растворы для установления градуировочной характеристики при определении нистатина

     
     
     Градуировочные растворы используют свежеприготовленными.
     
     Подготовленные градуировочные растворы перемешивают и через 10 мин измеряют оптические плотности растворов в кювете с толщиной поглощающего слоя 10 мм при длине волны 305 нм по отношению к раствору сравнения, не содержащему определяемого вещества.
     
     Строят градуировочный график: на ось ординат наносят значения оптических плотностей градуировочных растворов, на ось абсцисс - соответствующие им содержания нистатина в мкг.
     
     Проверка градуировочного графика проводится 1 раз в квартал или в случае использования новой партии реактивов, оборудования, прибора, в других случаях изменения условий измерения.
     

9.4. Отбор проб воздуха

     
     Воздух с объемным расходом 1 дм/мин аспирируют через фильтр АФА-ХП-10, помещенный в фильтродержатель. Для измерения ПДК следует отобрать 10 дм воздуха. Пробы хранят в бюксах с пришлифованными крышками в холодильнике в течение 3 сут.
     
     

10. Выполнение измерения

     
     Фильтр с отобранной пробой переносят в химический бюкс с пришлифованной крышкой, вместимостью 25 см, приливают 5 см смеси этилового спирта с 1 н водным раствором ледяной уксусной кислоты в соотношении (1:1) по объему и оставляют на 15 мин, периодически помешивая стеклянной палочкой для лучшего растворения вещества. Затем фильтр тщательно отжимают и повторно обрабатывают 5 см смеси этилового спирта с 1 н водным раствором ледяной уксусной кислоты в соотношении (1:1) по объему. Фильтр снова тщательно отжимают и удаляют. Оба раствора последовательно фильтруют на химической воронке через бумажный фильтр "белая лента" в мерную пробирку с пришлифованной пробкой, вместимостью 10 см, и доводят смесью до метки. Степень десорбции вещества с фильтра 97%.
     
     Оптическую плотность получаемых анализируемых растворов измеряют в кювете с толщиной поглощающего слоя 10 мм при длине волны 305 нм по отношению к раствору сравнения, который готовят одновременно и аналогично пробам, используя чистый фильтр.
     
     Количественное определение содержания нистатина проводят по предварительно построенному градуировочному графику.
     
     Примечание: фильтрование растворов анализируемых проб проводится для удаления не растворимых в смеси этилового спирта с 1 н водным раствором ледяной уксусной кислоты в соотношении (1:1) по объему вспомогательных веществ, входящих в состав таблеток нистатина.
     
     

11. Вычисление результатов измерений

     
     Массовую концентрацию нистатина (, мг/м) в воздухе рабочей зоны вычисляют по формуле:
     

,

     
где  - количество вещества, найденное в анализируемом объеме раствора по градуировочному графику, мкг;
     
      - объем воздуха, отобранного для анализа (дм) и приведенного к стандартным условиям (прилож.1).
     
     

12. Оформление результатов анализа

     
     Результат количественного анализа представляют в виде:
     

 мг/м, 0,95

     
     Значение 0,0059+0,16, мг/м,
     

где  - характеристика погрешности.

     
     
13. Контроль погрешности методики КХА

     
Таблица 2

     
Значения характеристики погрешности, норматива оперативного контроля погрешности
и норматива оперативного контроля воспроизводимости

     
     
     Метрологические характеристики приведены в виде зависимости от значения массовой концентрации анализируемого компонента в пробе - .
     

13.1. Оперативный контроль погрешности

     
     Оперативный контроль погрешности выполняют в одной серии с КХА рабочих проб.
     
     Образцами для контроля являются реальные пробы воздуха рабочей зоны. Объем отобранной для контроля пробы должен соответствовать удвоенному объему, необходимому для проведения анализа по методике. После отбора пробы экстракт с фильтра делят на две равные части, первую из которых анализируют в точном соответствии с прописью методики и получают результат анализа исходной рабочей пробы - . Вторую часть разбавляют соответствующим растворителем в два раза и снова делят на две равные части, первую из которых анализируют в точном соответствии с прописью методики, получая результат анализа рабочей пробы, разбавленной в два раза - . Во вторую часть делают добавку анализируемого компонента  до концентрации исходной рабочей пробы  (общая концентрация не должна превышать верхнюю границу диапазона измерения) и анализируют в точном соответствии с прописью методики, получая результат анализа рабочей пробы, разбавленной в два раза, с добавкой - . Результаты анализа исходной рабочей пробы - , рабочей пробы, разбавленной в два раза - , и рабочей пробы, разбавленной в два раза с добавкой - , получают по возможности в одинаковых условиях, т.е. их получает один аналитик с использованием одного набора мерной посуды, одной партии реактивов и т.д.
     
     Решение об удовлетворительной погрешности принимают при выполнении условия:
     

,

     
где  - результат анализа рабочей пробы;

     
      - результат анализа рабочей пробы, разбавленной в два раза;
     
      - результат анализа рабочей пробы, разбавленной в два раза, с добавкой анализируемого компонента;
     
      - величина добавки анализируемого компонента;
     
      - норматив оперативного контроля погрешности.
     

0,0058+0,18 (мг/м)

     
13.2. Оперативный контроль воспроизводимости

     
     Образцами для контроля являются реальные пробы воздуха рабочей зоны. Объем отобранной для контроля пробы должен соответствовать удвоенному объему, необходимому для проведения анализа по методике. После отбора пробы экстракт с фильтра делят на две равные части и анализируют в точном соответствии с прописью методики, максимально варьируя условия проведения анализа, т.е. получают два результата анализа в разных лабораториях или в одной, используя при этом разные наборы мерной посуды, разные партии реактивов. Два результата анализа не должны отличаться друг от друга на величину допускаемых расхождений между результатами анализа:
     

,

     
где  - результат анализа рабочей пробы;

     
      - результат анализа этой же пробы, полученный в другой лаборатории или в этой же, но другим аналитиком и с использованием другого набора мерной посуды и других партий реактивов;
     
      - допустимые расхождения между результатами анализа одной и той же пробы.
     

0,049+0,21 (мг/м)

     
     При превышении норматива оперативного контроля воспроизводимости эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива , выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, и устраняют их.
     
     

14. Нормы затрат времени на анализ

     
     Для проведения серии анализов из 6 проб требуется 2 ч 30 мин.