главная сделать стартовой в избранное

почта Моя жизнь помощь

регистрация вход

Законы

Социальная сеть новости законы работа видео фото блоги астрология

Краснодар:

погода

февраля

среда,

Курсы

USD ЦБ 03.12 30.8099 -0.0387
EUR ЦБ 03.12 41.4824 -0.0244

Индексы

DJIA 03.12 12019.4 -0.01
NASD 03.12 2626.93 0.03
RTS 03.12 1545.57 -0.07

отправить на печать

МУК 4.2.1054-01

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

3.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Измерение концентраций микроорганизмов-продуцентов,
бактериальных препаратов и их компонентов
в атмосферном воздухе населенных мест

Дата введения 2001-10-01

    1. ПОДГОТОВЛЕНЫ: д.м.н. М.В.Далин (Российский Университет дружбы народов), к.м.н. Н.П.Сергеюк (Научно-исследовательский центр "ЭКОС") на основании материалов секции "Гигиенические аспекты биотехнологии микробного загрязнения окружающей среды" Проблемной Комиссии "Научные основы гигиены окружающей среды"

    2. РЕКОМЕНДОВАНЫ К УТВЕРЖДЕНИЮ Комиссией по госсанэпиднормированию Минздрава России (прот. N 7 от 28.04.01)

    3. УТВЕРЖДЕНЫ Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации - Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации Г.Г.Онищенко 6 июня 2001 г.

    4. ВВЕДЕНЫ ВПЕРВЫЕ

1. Общие положения и область применения

    Настоящие методические указания устанавливают методику проведения микробиологического количественного анализа концентраций промышленных микроорганизмов и бактериальных препаратов в атмосферном воздухе населенных мест в диапазоне от 100 до 5000 клеток в 1 м воздуха.

    Методические указания разработаны с целью обеспечения микробиологического контроля концентрации промышленных микроорганизмов и бактериальных препаратов в атмосферном воздухе населенных мест и оценки соответствия уровня их содержания гигиеническим нормативам на основе учета требований ГОСТов 17.2.4.02-81 "Охрана природы. Атмосфера. Общие требования к методам определения загрязняющих веществ" и 8.653-96. ГСИ "Методики выполнения измерений".

    Методические указания предназначены для центров госсанэпиднадзора, санитарных лабораторий биотехнологических предприятий, микробиологических лабораторий, научно-исследовательских институтов, работающих в области гигиены окружающей среды и аккредитованных в установленном порядке на право проведения микробиологических исследований.

2. Характеристика штамма микроорганизма

    2.1. Таксономическое положение штамма

    2.2. Морфология колоний и клеток. (Данные по каждому штамму для п.п.2.1, 2.2 представлены в табл.)

3. Пределы измерений

    Методика обеспечивает выполнение измерений количества клеток микроорганизма в воздушной среде в диапазоне концентраций от 10 до 5000 клеток в 1 м воздуха при доверительной вероятности 0,95.

4. Метод измерений

    Метод основан на аспирации из воздуха клеток микроорганизма на поверхность плотной питательной среды и подсчете выросших колоний по типичным морфологическим признакам.

5. Средства измерений, оборудование, вспомогательные устройства, материалы

    При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства и материалы.

5.1. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы

	Прибор для бактериологического анализа воздуха, модель 818 (щелевой прибор Кротова)	ТУ 64-12791-77
	Импактор микробиологический ИМБ-15
	Прибор для бактериологического анализа воздуха "Флора-100"
	Термостаты электрические суховоздушные или водяные
	Автоклав электрический	ГОСТ 9586-75
	Бокс, оборудованный бактерицидными лампами
	Холодильник бытовой
	Весы лабораторные, аналитические типа ВЛА-200
	Микроскоп биологический с иммерсионной системой типа "Биолам" Л-211
	Лупа с увеличением 10 х	ГОСТ 25706-83
	Чашки Петри бактериологические плоскодонные стеклянные, диаметром 100 мм
	Пробирки биологические, вместимостью 20 и 35 мл	ГОСТ 10515-75
	Пипетки мерные на 1, 5 и 10 мл	ГОСТ 10515-75
	Колбы конические, вместимостью 250 и 500 мл	ГОСТ 1770-74
	Секундомер	ГОСТ 9586-75
	Барометр	ГОСТ 24696-79
	Марля медицинская	ГОСТ 9412-77
	Вата медицинская гигроскопическая	ГОСТ 25556-81

5.2. Питательные среды

	Агар микробиологический	ГОСТ 17206-96
	Селективная среда (среда для каждого штамма микроорганизмов представлена в табл.).

6. Требования безопасности

    При выполнении измерений концентрации клеток в воздушной среде соблюдают следующие требования.

    Правила техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТу 12.1.005-88.

    Электробезопасность при работе с электроустановками по ГОСТу 12.1.019-79 и инструкции по эксплуатации прибора.

    Руководство "Положение об организации работы по технике безопасности в микробиологической промышленности" (1980), "Инструкции по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности" (1977).

    Все виды работ с реактивами проводят только в вытяжном шкафу при работающей вентиляции, работа с биологическим материалом осуществляется в боксе, оборудованном бактерицидными лампами.

7. Требования к квалификации операторов

    К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются лица с высшим или средним специальным образованием, прошедшие соответствующую подготовку и имеющие навыки работы в области микробиологических исследований.

8. Проведение измерения

8.1. Условия отбора проб воздуха

    Для определения концентрации микроорганизма производят отбор проб воздуха при помощи аппарата Кротова со скоростью 10 л/мин на поверхность плотной питательной среды. Время отбора пробы воздуха 20 мин. Аппарат Кротова перед каждым отбором пробы воздуха тщательно протирают спиртом. Особенно тщательно обрабатывают поверхность подвижного диска и внутреннюю стенку прибора; наружную и внутреннюю стенку крышки. На подвижной диск устанавливают подготовленную чашку Петри со средой, одновременно снимая с нее крышку. Прибор закрывают. Соприкосновение крышки прибора со средой недопустимо. После отбора пробы воздуха и остановки диска прибор открывают, быстро снимают чашку Петри и закрывают крышкой от данной чашки. На дне чашки Петри стеклографом отмечают точку контроля, время аспирации и дату отбора пробы. В том случае, если определяется концентрация микроорганизмов, имеющих обильный воздушный мицелий, отбор производят в жидкостные поглотители с последующим разведением и посевом на плотную питательную среду.

8.2. Выполнение анализа

    Метод предполагает учет количества типичных по морфологическим признакам колоний, выросших на 3-4 сутки после посева воздуха. Прямой метод позволяет учитывать на чашке до 200 колоний.

    Селективную среду тщательно перемешивают и разливают по 20 мл в стеклянные чашки Петри на горизонтальной поверхности. При необходимости в селективную среду добавляют компоненты, подавляющие рост посторонней микрофлоры. Чашки с застывшей средой помещают в термостат на сутки при температуре 37 °С, после чего проросшие чашки бракуют, стерильные чашки используют для контроля воздуха.

    После отбора проб воздуха чашки Петри инкубируют в термостате и производят подсчет выросших типичных колоний. При необходимости культуру подвергают микроскопированию.

9. Вычисление результатов измерения

    Расчет концентрации клеток в перерасчете на 1 м воздуха производят по формуле:

кл/м, где

     - концентрация клеток в воздухе;

     - количество колоний, выросших на чашке;

    1000 - коэффициент перерасчета на 1 м воздуха;

     - объем воздуха, л (произведение скорости на время аспирации).

    Для консорциумов микроорганизмов используют следующую методику подсчета:

, где

     - концентрация консорциума (КОЕ/м);

     - концентрация контрольного микроорганизма (КОЕ/м);

     - содержание контрольного микроорганизма в консорциуме (%).

    Контрольные микроорганизмы, входящие в состав консорциумов (препаратов, созданных на основе живых микроорганизмов и включающих в себя два и более штаммов), представлены в табл. с пометкой КМ, там же приведены торговые названия препаратов.

Используемые сокращения и условные обозначения

    АС - Агаризованная среда

    МПА - Мясо-пептонный агар

    МСЭА - Агар с экстрактом мозга и сердца

    РНСП - Роды с неясным систематическим положением

    САС - Синтетическая агаризованная среда

    ВЗ - Выброс запрещен

Пояснение к таблице

    Микроорганизмы, сведения о которых представлены в табл., разделены на группы, не являющиеся формальными таксономическими категориями, но подразделяющие штаммы на легко определяемые фенотипические единицы.

    Таксономическое положение каждого штамма определено до уровня семейства за исключением т.н. "Родов с неясным систематическим положением" согласно "Определителю бактерий Берджи" (М., "Мир", 1997).

    Для каждого из штаммов микроорганизмов представлена селективная твердая питательная среда и специальные добавки в среду, необходимые для подавления посторонней микрофлоры.

    Колонка "Примечания" содержит сведения об особенностях штамма как упрощающих его идентификацию (способность к образованию какого-либо пигмента, специфическая ферментативная активность и т.д.), так и создающих возможность экспресс-диагностики.

Таблица

Идентификация микроорганизмов и условия их культивирования

N п/п

ПДК aтм., кл/м

Таксономическое положение

Питательная среда (базовая)

Добавки в питательную среду для подавления посторонней микрофлоры

Условия культиви- рования (время инкубации
и t °C)

Морфологические признаки колоний

Примечания

Грамотрицательные аэробные/микроаэрофильные палочки и кокки

Семейство: Neisseriaceae. Род: Аcinetobacter Вид: oleovorum
s/paraffinicum
шт. ВСБ 712

МПА

Спирт этиловый рект. 2 мл/100 мл среды

1 сутки
38 °C

Круглые с ровным краем, блестящие, бесцветные,
d - 3-4 мм

300

Вид species
шт. ВСБ 644

МПА

Спирт этиловый рект. 2 мл/100 мл среды

3 суток
37 °C

Округлые, гладкие, слабо выпуклые, с ровным краем, светлые, d - З мм

500

Семейство: Azotobacteriaceae Род: Azotobacter
Вид: Vinelandii (Lipman) шт. Ф.ч-1

Мясная вода/МПА-1/1, пептон 10,0, натрий хлористый 5,0, глюкоза 10,0, агар 2,0, рН 7,2-7,4

Амфотерицин
10 мкг/мл, стрептомицина сульфат 250 мкг/мл

2-3 суток 28 °C

Мелкие, выпуклые, плотные, маслянисто- блестящие, вросшие в агар

Синтезирует водорастворимый пигмент, флуоресцирующий в УФ-лучах

200

Семейство: Pseudomonaceae Род: Pseudomonas Вид: fluorescens
шт. К3б

МПА

Нафталин
2 мл/100 мл среды

2 суток
28 °C

Полупрозрачные, глянцевые, слегка опалесцирующие,
в центре небольшое уплотнение в виде точки, d - 1,4-2,2

При добавлении нафталина -
темно-коричневая окраска

2000

шт. ST

МПА

Фенол, ацетон, стирол (2 мл/100 мл среды)

2 суток
28 °C

Глянцевые, опалесцирующие
d - 2 мм

Вид: stutzeri
шт. 367-1

Картофельный агар

Низкомолекулярные спирты (кроме метанола)
2 мл/100 мл среды

2 суток
32 °C

Светло-серые, круглые, в центральной части угристые, бежевые, край волнистый прозрачный

КМ, препарат "Деваройл"

1000

РНСП
Род: Acetobacter
Вид: methylicum
шт. ВСБ-924

САС
с метанолом

Метанол
2 мл/100 мл среды (pН 4,5)

3 суток 30-35 °C

Выпуклые, гладкие, серовато-белые, слизистой консистенции

Грамположительные палочки и кокки, образующие эндоспоры

200

Семейство: Bacillaceae Род: Bacillus
Вид: polymixa шт.-

Различные агаризованные среды (белково- витаминный агар, кукурузо- пептонный агар)

Амфотерицин В
(10 мкг/1 мл среды) либо Полимиксин М

1 сутки 30-37 °C

Круглые, в центре выпуклые, шероховатые, с лопастным краем, желтовато- сероватого цвета,

200

шт. F-12

d - 2-2,5 мм

1000

Bид: Subtilis
шт. 265-76

Грамположительные неспорообразующие палочки правильной формы

2000

Семейство: Lactobacillaceae
Род: Lactobacillus Вид: cazei шт. 21

Среда Рогози МПА

Желчь

7-8 суток 30 °C

Мелкие, круглые колонии. Глубинные колонии с выростими

КМ препарата "Байкал"

Факультативные анаэробные грамотрицательные палочки

ВЗ

Семейство: Enterobacteriaceae Род: Esherihia
Вид: соli. шт. 1864

Среда Эндо

Ампициллин
200 мкг/1 мл среды

1 сутки
27 °C

Выпуклые, с блестящей поверхностью, ровными краями, легко эмульгирующие в солевом растворе, не пигментированные

ГИЖ

ВЗ

шт. 472-Т23

ВЗ

шт. ТДГ-6

ВЗ

шт. 436

Актиномицеты и родственные микроорганизмы. Группа коринеформных бактерий

Грамположительные неспорообразующие палочки неправильной формы

100

Семейство: Actinomycetaceae Род: Actinomyces Вид: rozeolus
шт. Z-219

Кровяной агар МСЭА, среда Гаррода

7-14 суток

"Паукообразная" колония с многочисленными ветвящимися нитями

Отбор в жидкостный поглотитель

3000

Семейство: Corynebacteriaceae Pод: Corynebacterium Вид: glutamicum
шт. ВКПМ-B5115

МПА

Грамицидин
10 мкг/мл среды

3 суток
32 °C

Желтоватого цвета с ровным краем, d не более 5 мм

1000

шт. ВСБ206-L

МПА

Грамицидин 50 мкг/мл

3 суток
32 °C

Желтоватые или желтые с ровным краем, d - 5мм

5000

Семейство: Brevibacteriaceae Род: Brevibacterium Вид: flavum
шт. ВНИИ Генетика 50-72(ВКПМ-B37-57)

Агар Хоттингера

3 суток
32 °С

Серовато-белые или кремовые, круглые, выпуклые, с ровным краем, влажно блестящие, d - Змм

Для роста нуждаются в тиамине

ВЗ

Вид: lactofermentum шт. НИТИА-89

Агар Хоттингера

3 суток 29-31 °C

Твердые, крупные, кремового цвета

Нокардиоформные актиномицеты

200

Семейство: Nocardiaceae
Род: Nocardia
Вид: mediterranii

САС (Красильникова, Гаузе1) и органические АС

Амфотерицин В
5 мкг/мл

8-12 суток 28 °C

Крупные, чашевидные или плоские складчатые, крошащиеся. Воздушный мицелий отсутствует. Растворимый пигмент на разных средах от зеленовато-бурого до ржавого или красновато- коричневого

Ускоренный метод основан на способности выделять рифамицин, который образует зоны задержки роста тест-культуры (St. Aureus 209 3)

5000

РНСП Род: Rhodoсoсcus
Вид: eritropolis
шт. 367-2, 367-6

АС Раймонда

Нефть или нефтепродукты
2 мл/100 мл среды

4 суток
30-32 °C

Оранжевые или ярко-оранжевые, круглые, выпуклые с ровным краем, блестящие

КМ препарата "Деваройл"

5000

Вид: maris шт. 367-5

Картофельный агар

Нефть или нефтепродукты
2 мл/100 мл среды

4 суток
30-32 °C

Ярко-оранжевые, круглые, выпуклые с ровным краем, блестящие

КМ препарата "Деваройл"

5000

Вид: ruber шт.1418 (ВКМ Ас 1513 D)33

Картофельный агар

4 суток
30 °C

Красные, круглые, выпуклые, слизистые

Актинопланы

Семейство: Micromonosporaceae Род: Micromonospora Вид: atratavinosa
Sp. Nov. 1573
шт. 184 R

САС Гаузе1

Амфотерицин В
20 мкг/1 мл среды сизомицин
2000 мкг/мл среды

10-12 суток
37 °C

Черные, выпуклые, со складчатой поверхностью,
d - 3-5 мм, воздушного мицелия не образуют

Черный или темно- коричневый пигмент

500

Вид: purpurea Var Violaceae

САС Гаузе1

Амфотерицин В
10 мкг/мл среды

10 суток 35 °С

Поднимаются круто от поверхности среды, хорошо развит септированный мицелий

Розовый или розоватый пигмент

Стрептомицеты и близкие к ним роды

500

Семейство: Streptomycetaceae Род: Streptomyces Вид: aureofaciens
шт. 0,19 (8)

Среда Хоттингера

Амфотерицин В
20 мкг/мл среды

10-12 сут
28 °C

Обильный воздушный мицелий серого цвета. Колонии плоские, слабо складчатые, с кратером в центре

Отбор в жидкостный поглотитель

500

шт. STR 2255

Округлые, выпуклые, серого цвета, с хорошо развитым воздушным мицелием, выделяют в среду темный пигмент

Отбор в жидкостный поглотитель. Ускоренный метод - учет зон задержки роста тест-культуры Bac. Subtilis на агаре Хоттингера

300

Вид: cinnamonensis шт. НИЦБ 109

ISP на основе агара Difco

Олеандомицин или линкомицин
15 мкг/мл среды

3-4 сут
28 °C

Серо-белые, округлые, радиально-
складчатые, с фестончатым краем и выпуклым более темным центром

Отбор в жидкостный поглотитель

300

Вид: eritreus шт. 851

Среда ЭР-1

Эритромицина основание (фосфат) 250-500 мкг/мл среды

10-14 сут
32 °C

Колонии с обильным воздушным мицелием, труднофрагмен-
тируемым. Вегетативные гифы 0,5-2,0 мкм в диаметре

Отбор в жидкостный поглотитель. Ускоренный метод основан на способности продуцировать антибиотик, который определяется по задержке зон роста тест-культуры (Bac. Subtilis 6633)

500

Вид: kanamyceticus

Среда Гаузе1

Амфотерицин В
10 мкг/мл среды

12 сут
28 °C

Округлые, плоские, d - 6 мм. Воздушный мицелий белый, обильный, субстратный - светло-коричневый

Отбор в жидкостный поглотитель. Ускоренный метод основан на способности продуцировать антибиотик, который определяется по задержке зон роста тест-культуры Bac. Subtilis ATCC 6633 (споры)

500

Вид: noursei шт.153/55

Крахмально- аммиачная среда

Амфотерицин В
10 мкг/мл среды

5 сут
27 °C

Белые с раздельной складчатостью, приподнятым центром, плоским волнистым краем. Воздушный мицелий серого цвета

Отбор в жидкостные поглотители

300

Вид: rimosus
шт. 1-43

АС с кукурузным экстрактом и картофельным крахмалом

Амфотерицин В
20 мкг/мл среды

8-12 сут
27 °C

Радиально складчатые, в центре - кратер, субстратный мицелий - коричневый, воздушный - светло-серый,
хорошо развит

Отбор в жидкостный поглотитель. Ускоренный метод основан на выделении в среду антибиотика и задержке зон роста тест-культуры (Bac. Subtilis вар. L2)

ВЗ

Род: Streptoverticillium
Вид: griseocameum

САС

Неомицин, лизоцим

8 сут
25-30 °C

Небольшие обособленные, дымка воздушного мицелия бархатная или хлопьевидная, розовато-бежевого цвета с сиреневым оттенком

Отбор в жидкостные поглотители. Розовато-
бежевый пигмент

Микобактерии

2000

Семейство: Mycobacteriасeае Род: Mycobacterium Вид: species
шт. В 3805

Кукурузно- мучной глицериновый агар

7 сут 35-40 °C

Воздушного мицелия не образует

Возможно образование пигмента

Грибы и дейтеромицеты

500

Род: Acrimonium
Вид: chrizogenum
шт. 298-А

АС/обрат, 1/1

Стрептомицин
500 мкг/мл среды

9-11 суток 28 °C

Выпуклые, правильно-
складчатые, белого цвета, с зубчатыми краями

Ускоренный метод основан на способности выделять протеазу, которую выявляют по образованию зон просветления среды вокруг колоний

200

Род: Candida
Вид: Famata
шт. ВСБ-641

Сусло-агар

Дрожжевой гидролизат. Стрептомицин
50 ЕД/1 мл среды

2-3 суток 32-34 °C

Однородные, гладкие, белые, с ровным краем

При посеве по трубочкам Эйнгорна с дрожжевой водой и глюкозой брожения нет

Вид: lipolitica шт. 367-3

Картофельный агар, МПА, сусло-агар, минеральная среда Раймонда

Нефтепродукты
2 мл/100 мл среды

2 суток 30-32 °C

Беловатые, матовые, плоские, край волнистый, образует псевдомицелий

Отбор в жидкостные поглотители, КМ препарата "Деваройл"

100

Вид: tropicalis
шт. ВСБ-928

Картофельный агар САС

З суток
30 °C

Круглые, беловатые, на 3-4 день псевдомицелий

Отбор в жидкостные поглотители

100

Вид: Utilis
шт. ВСБ-651

Картофельный агар, сусло-агар

2 суток
30 °C

Белые, матовые, образует псевдомицелий

Отбор в жидкостные поглотители

500

Род: Fuzidium
Вид: coccineum
шт. 108

Сусло-агар, среда N 9 (ГФ Х)

Амфотерицин В 10 мкг/мл среды

9-14 суток 24 °C

Круглые, складчатые, серовато-розовые с белым, слегка фестончатым краем, мицелий выражен слабо

Ускоренный метод основан на выделении фузидиевой кислоты, подавляющей рост тест-культуры (Вас, Мyсоides HB2)

500

Род: Penicilium
Вид: chrisogenum

Агаризованная среда Чапека, Райстрика

Канамицин
25-50 мкг/мл среды (неомицин, сизомицин)

9-10 суток 24 °C

Бежевые, складчатые, центр приподнят, края неровные, обратная сторона светло-коричневая

Ускоренный метод основан на выделении бензилпенициллина, подавляющего рост тест-культуры (St. Aureus 209 P)

500

Семейство: Entomophtorасеае Род: Entomophtorа

Сабуро- декстрозный агар

Карбенициллин
150 мкг/мл среды, амфотерицин -
10 мкг, полимиксин М 250 мкг

4-5 суток 25 °С

Округлые, складчатые, приподнятые к центру, серовато-
кремового цвета

200

Род: Рichia
Вид: membrana faciens

Кукурузный агар

3 суток 30-34 °C

Кремовато-серого цвета, бархатистые, край лопастной, поверхность мучнистая, хорошо развитый ветвящийся псевдомицелий

Отбор в жидкостные поглотители

500

Род: Trichoderma
Вид: reesei
шт. NIBT 18.2-33

Сусло-агар

Карбенициллин 150 мкг/мл среды

4-5 суток 28-30 °С

Круглые, с гладкой подошвой, слегка приподнятые над поверхностью среды, край волнистый, образует мицелий

Отбор в жидкостные поглотители. Выделяет ярко-желтый пигмент

    Текст документа сверен по:
    официальное издание
    М.: Федеральный центр госсанэпиднадзора
    Минздрава России, 2001

отправить на печать

Личный кабинет:

доступно после авторизации

Календарь налогоплательщика:

Заказать прокат автомобилей в Краснодаре со скидкой 15% можно через сайт нашего партнера – компанию Автодар. http://www.avtodar.ru/

Над Краснодарским краем за ночь сбито 83 беспилотника

Создайте свой интернет-магазин на новой платформе ReadyScript

Хостинг, домены, VPS/VDS, размещение серверов

Что это?

RuFox.ru - голосования онлайн

добавить голосование

наверх

Пн	Вт	Ср	Чт	Пт	Сб	Вс
					01	02
03	04	05	06	07	08	09
10	11	12	13	14	15	16
17	18	19	20	21	22	23
24	25	26	27	28