МУК 4.1.1217-03

     
     
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ  

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Определение остаточных количеств дифлубензурона в воде, почве,
пастбищных травах и люцерне методом высокоэффективной
жидкостной хроматографии

     
     
Дата введения 2003-07-01

     
     
     УТВЕРЖДЕНЫ Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации Г.Г.Онищенко 16 марта 2003 г.
     
     

1. Вводная часть

     
     Фирма производитель: Uniroyal Chemical Ltd (Великобритания).
     
     Торговое наименование: Димилин.
     
     Действующее вещество: дифлубензурон.
     
     1 -(4-хлорфенил)-3-(2,6-дифторбензоил)мочевина (IUPAC).
     
     N- {[(4-хлорфенил)амино]карбонил}-2,6-дифторбензамид (С.А.).
     
     Структурная формула:     
     

          
     Эмпирическая формула: CHClFNO.
     
     Мол. масса: 310,7.
     
     Бесцветное кристаллическое вещество (технический - кристаллы от белых до желтых).
     
     Температура плавления: 228 °С (техн.: 210-230 °С).
     
     Давление паров при 25 °С: 1,2·10 мПа.
     
     Коэффициент распределения н-октанол/вода: 3,89.
     
     Растворимость (г/л) при 20 °С: н-гексан - 0,063, толуол - 0,29, дихлорметан -1,8, метанол -1,1, вода - 0,08 мг/л (при рН 7 и 25 °С).
     
     Вещество стабильно в кислых средах (20 °С, рН 5-7, DT150 дней), разлагается в щелочных растворах (при рН 9 DT 42 дня).
     
     Гигиенические нормативы:
     
     ОДК в почве - 0,2 мг/кг;
     
     ПДК в воде водоемов - 0,01 мг/дм.
     
     Область применения препарата. Дифлубензурон используется для уничтожения широкого диапазона насекомых-вредителей, питающихся листьями лесных и плодовых деревьев, а также плодами.
     
     Уничтожает некоторых главных вредителей хлопка, бобов, сои, цитрусовых, чая, овощных культур и грибов. Также позволяет уничтожать личинки летающих насекомых, в т.ч. москитов, кузнечиков и миграционной саранчи. Эффективен против яблоневой плодожорки, американской белой бабочки, листоверток и др.
     
     

2. Методика определения дифлубензурона в воде, почве, пастбищных травах
и люцерне методом ВЭЖХ

2.1. Основные положения

     
2.1.1. Принцип метода

     
     Методика основана на определении дифлубензурона методом ВЭЖХ с использованием УФ-детектора после его извлечения из образцов водно-ацетоновой смесью и очистке путем перераспределения между двумя жидкими фазами, а также на колонке с силикагелем.
     

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

     
     Метрологическая характеристика метода представлена в табл.1, 2.
     
     

Таблица 1

     
Метрологическая характеристика метода

     
     
Таблица 2

     
Полнота определения дифлубензурона в воде, почве, пастбищных травах и люцерне
(6 для каждой концентрации)

     
     
2.1.3. Избирательность метода

     
     Присутствие других пестицидов, близких по химическому строению и области применения, определению не мешает.
     
     

2.2. Реактивы и материалы

2.3. Приборы и посуда

2.4. Отбор проб

     
     Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79). Пробы растительных материалов хранятся до анализа в морозильной камере при температуре -18 °С. Для длительного хранения пробы почвы подсушиваются при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут храниться в течение года. Перед анализом сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм, пробы пастбищных трав и люцерны измельчают на лабораторной мельнице. Пробы воды хранят при температуре не выше 4 °С в течение 3 суток, при температуре -18 °С - в течение месяца.
     
     

2.5. Подготовка к определению

     
2.5.1. Подготовка и очистка реактивов и растворителей

     
     Органические растворители перед началом работы очищают, сушат и перегоняют в соответствии с типовыми методиками. Гексан и хлористый метилен встряхивают с небольшими порциями концентрированной серной кислоты до прекращения окрашивания свежей порции кислоты, затем промывают водой, 2%-ным раствором гидроксида натрия и снова водой, после чего их сушат над гидроксидом натрия и перегоняют.
     
     Диэтиловый эфир (1 л) предварительно встряхивают с 20 мл свежеприготовленного раствора железного купороса (30 г сульфата железа в 55 мл воды с добавлением 1,5 г концентрированной серной кислоты).
     
     Затем диэтиловый эфир последовательно промывают 0,5%-ным раствором перманганата калия, 5%-ным раствором гидроксида натрия и водой, после чего сушат над хлористым кальцием и перегоняют.
     
     Ацетон перегоняют над перманганатом калия и поташем (на 1 л ацетона 10 г KMnO и 2 г KCO).
     
     Ацетонитрил сушат над пентоксидом фосфора и перегоняют; отогнанный растворитель повторно перегоняют над углекислым калием.
     

2.5.2. Кондиционирование колонки

     
     Перед началом анализа колонку Symmetry-C18 кондиционируют в потоке подвижной фазы (1 мл/мин) до стабилизации нулевой линии в течение 1-2 ч.
     

2.5.3. Приготовление растворов

     
     Для приготовления 0,02М раствора ортофосфорной кислоты 2 г 98%-ной (или 2,25 г 87%-ной) кристаллической НРО помещают в мерную колбу объемом 1 л, растворяют в 600 мл дистиллированной воды и доводят объем до метки дистиллированной водой. Для приготовления 0,1М раствора NaHCO 9,3 г кристаллического бикарбоната натрия помещают в мерную колбу на 1 л, растворяют при перемешивании в 600 мл дистиллированной воды и доводят объем раствора до метки. Для получения 50%-ного водного ацетона в колбе емкостью 1 л смешивают 500 мл ацетона с 500 мл дистиллированной воды, используя мерные цилиндры. Для приготовления подвижной фазы смешивают 560 мл ацетонитрила с 440 мл бидистиллированной воды в колбе на 1000 мл, смесь фильтруют, при необходимости дегазируют. Для приготовления элюента N 1 в колбе на 1000 мл смешивают 800 мл н-гексана и 200 мл диэтилового эфира. Для приготовления элюента N 2 в колбе на 1000 мл смешивают 550 мл н-гексана и 450 мл диэтилового эфира. Для приготовления 20%-ного раствора хлористого натрия 20 г кристаллического NaCl помещают в мерную колбу на 1 л, растворяют при перемешивании в 800 мл дистиллированной воды и доводят объем раствора до метки.
     

2.5.4. Приготовление стандартного и градуировочных растворов

     
     Берут точную навеску дифлубензурона (50 мг), переносят в мерную колбу на 50 мл, растворяют навеску в ацетонитриле и доводят до метки (стандартный раствор с концентрацией 1,0 мг/мл). Градуировочные растворы с концентрациями 0,05; 0,1; 0,2; 0,5; 1,0 и 2,0 мкг/мл готовят методом последовательного разбавления по объему, используя раствор подвижной фазы (смесь ацетонитрил - бидистиллированная вода, 56:44, по объему). Стандартный раствор можно хранить в холодильнике при температуре 0-4 °С в течение 1 месяца, градуировочные растворы - в течение суток.
     

2.5.5. Построение градуировочного графика

     
     Для построения градуировочного графика (площадь пика - концентрация дифлубензурона в растворе) в хроматограф вводят по 20 мкл градуировочных растворов (не менее 3-х параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4-х точек по диапазону измеряемых концентраций), измеряют площади пиков и строят график зависимости среднего значения площади пика от концентрации дифлубензурона в градуировочном растворе (мкг/мл).
     

2.5.6. Подготовка колонки с силикагелем для очистки экстракта

     
     В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 1 см помещают тампон из стекловаты, закрывают кран и вносят суспензию 5 г силикагеля в 20 мл смеси гексан - диэтиловый эфир (80:20, по объему). Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой флорисила высотой 1 см. Колонку последовательно промывают 50 мл смеси гексан - диэтиловый эфир (55:45, по объему) и 30 мл смеси гексан - диэтиловый эфир (80:20, по объему) со скоростью 1-2 капли в секунду, после чего она готова к работе.
     

2.5.7. Проверка хроматографического поведения дифлубензурона на колонке с силикагелем

     
     В круглодонную колбу емкостью 10 мл отбирают 0,1 мл стандартного раствора дифлубензурона с концентрацией 10 мкг/мл. Отдувают растворитель током теплого воздуха, остаток растворяют в 5 мл элюента N 1 и наносят на колонку. Колбу обмывают еще 5 мл элюента N 1 и также наносят на колонку. Промывают колонку 50 мл элюента N 1, затем 40 мл элюента N 2 со скоростью 1-2 капли в секунду. Отбирают фракции по 10 мл каждая, упаривают, остаток растворяют в 2 мл подвижной фазы для ВЭЖХ (п.2.5.3) и анализируют на содержание дифлубензурона по п.2.6.5.
     
     Фракции, содержащие дифлубензурон, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 2 мл подвижной фазы для ВЭЖХ и вновь анализируют по п.2.6.5. Рассчитывают содержание дифлубензурона в элюате, определяя полноту вымывания вещества из колонки и необходимый для очистки экстракта объем элюента.
     
     Примечание: профиль вымывания дифлубензурона может меняться при использовании новой партии сорбента и растворителей.
     
     

2.5.8. Подготовка приборов и средств измерения

     
     Установка и подготовка всех приборов и средств измерения проводится в соответствии с требованиями стандартов и технической документации.
     
     

2.6. Проведение определения

     
2.6.1. Определение дифлубензурона в воде

     
     К образцу предварительно отфильтрованной воды объемом 100 мл добавляют 10 г NaCl и перемешивают до растворения соли. Полученный раствор переносят в делительную воронку емкостью 250 мл и экстрагируют дифлубензурон гексаном трижды порциями по 30 мл, встряхивая каждый раз в течение 2-3 мин. Объединенный экстракт фильтруют через слой безводного сульфата натрия (2 г), осушитель промывают 10-15 мл гексана. После этого экстракт упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре не выше 40 °С.
     
     Сухой остаток растворяют в 1 мл подвижной фазы для ВЭЖХ и 20 мкл раствора вводят в жидкостный хроматограф.
     

2.6.2. Определение дифлубензурона в почве

     
     Образец воздушно-сухой почвы массой 10 г помещают в коническую колбу емкостью 250 мл с притертой пробкой, добавляют 40 мл 50%-ного водного ацетона и экстрагируют в течение 15 мин на ультразвуковой бане. Суспензию фильтруют на стеклянной воронке через бумажный фильтр "красная лента". Экстракцию повторяют дважды с 30 мл 50%-ного водного ацетона. Объединенные экстракты упаривают до водного остатка (50-55 мл) на роторном испарителе при температуре не выше 40 °С.
     
     Водный остаток переносят в делительную воронку объемом 250 мл, добавляют 50 мл 20%-ного раствора NaCl и дифлубензурон экстрагируют гексаном трижды по 30 мл, встряхивая делительную воронку каждый раз по 2-3 мин. Объединенный экстракт фильтруют через слой безводного сульфата натрия (2 г), осушитель промывают 10-15 мл гексана. Полученный раствор упаривают на роторном испарителе при температуре не выше 40 °С. Дальнейшую очистку экстракта проводят по пункту 2.6.4.
     
     Сухой остаток растворяют в 2 мл подвижной фазы для ВЭЖХ и 20 мкл раствора вводят в жидкостный хроматограф.
     

2.6.3. Определение дифлубензурона в пастбищных травах и люцерне

     
     Навеску массой 10 г измельченных на ножевой мельнице пастбищных трав или люцерны помещают в коническую колбу емкостью 100 мл и экстрагируют дифлубензурон 40 мл водного ацетона на ультразвуковой установке в течение 15 мин. Суспензию фильтруют через бумажный фильтр "красная лента". Экстракцию повторяют дважды порциями по 30 мл. Объединенный экстракт концентрируют на роторном испарителе при температуре 40 °С до объема 50-55 мл.
     
     Дифлубензурон переэкстрагируют трижды хлористым метиленом, порциями по 30 мл, встряхивая делительную воронку в течение 2-3 мин. Верхний водный слой отбрасывают. Объединенный экстракт промывают в делительной воронке трижды 0,1 М раствором бикарбоната натрия порциями по 30 мл и один раз 50 мл 0,02 М раствора ортофосфорной кислоты, встряхивая воронку в течение 2-3 мин (при всех промывках верхний водный слой отбрасывают). Органическую фазу фильтруют через слой безводного сульфата натрия (2 г), осушитель промывают 10-15 мл хлористого метилена. Полученный раствор упаривают досуха на роторном испарителе при температуре не выше 40 °С. Дальнейшую очистку экстракта проводят по пункту 2.6.4.
     
     Примечание. Для высушенных растительных проб целесообразно проводить экстракцию дифлубензурона тремя порциями дихлорметана по 30 мл каждая на ультразвуковой бане (продолжительность каждой экстракции - 15 мин), минуя стадию переэкстракции из водного раствора.
     

2.6.4. Очистка на колонке с силикагелем

     
     Остаток в колбе, полученный при упаривании очищенных по п.п.2.6.2 и 2.6.3 экстрактов растительного материала или почвы, количественно переносят тремя 3-миллилитровыми порциями смеси гексан - диэтиловый эфир (80:20, по объему) в кондиционированную хроматографическую колонку (п.2.5.6). Промывают колонку 50 мл элюента N 1, который отбрасывают. Дифлубензурон элюируют 40 мл элюента N 2, собирая элюат в грушевидную колбу емкостью 50 мл. Раствор упаривают досуха на роторном испарителе при температуре не выше 40 °С. Сухой остаток растворяют в 2 мл подвижной фазы для ВЭЖХ и 20 мкл раствора вводят в жидкостный хроматограф.
     

2.6.5. Условия хроматографирования

     
     Жидкостный хроматограф "Альянс" фирмы "Waters" с УФ-детектором (Waters 2487), снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки, или другой с аналогичными характеристиками.
     
     Колонка Symmetry - С18 (250х4,6 мм), зернение 5 мкм (Waters, USA) или аналогичная.
     
     Температура колонки 30 °С.
     
     Предколонка Waters Symmetry C18 для защиты аналитической колонки.
     
     Подвижная фаза: ацетонитрил-вода в соотношении 56:44 (по объему).
     
     Скорость потока элюента: 1 мл/мин.
     
     Рабочая длина волны 260 нм.
     
     Объем вводимой пробы 20 мкл. Время удерживания дифлубензурона (11,6±0,1) мин.
     
     Линейный диапазон детектирования 0,05-2,00 мкг/мл.
     

2.6.6. Обработка результатов анализа

     
     Количественное определение проводят методом абсолютной градуировки, содержание дифлубензурона в образце воды, почвы или растений (, мг/кг) вычисляют по формуле:
     

,

где  - площадь пика дифлубензурона в стандартном растворе, мм;
     
      - площадь пика дифлубензурона в анализируемой пробе, мм;
     
      - объем пробы, подготовленной для хроматографического анализа, мл;
     
      - навеска анализируемого образца, г (для воды - объем, мл);
     
      - концентрация стандартного раствора дифлубензурона, мкг/мл.
     
     Содержание остаточных количеств дифлубензурона в анализируемом образце вычисляют как среднее из 3-х параллельных определений.
     
     Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор дифлубензурона 2 мкг/мл, разбавляют.
     
     

3. Требования техники безопасности

     
     При проведении работы необходимо соблюдать требования инструкции "Основные правила безопасной работы в химической лаборатории", общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, а также инструкции по эксплуатации жидкостного хроматографа и электрооборудования до 400 В.
     
     

4. Контроль погрешности измерений

     
     Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95* "ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа".
_______________
     * Действует МИ 2335-2003. - Примечание .
         
     

5. Разработчики

     
     Юзихин О.С., Черменская Т.Д., Цибульская И.А., Долженко В.И. Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений. 196608, Санкт-Петербург, Пушкин, шоссе Подбельского, д.3. Телефон: 470-41-98.
     
     
     
Текст документа сверен по:
официальное издание
Определение остаточных количеств пестицидов
в пищевых продуктах, сельскохозяйственном
сырье и объектах окружающей среды:
Сб. методических указаний.
Выпуск 2. Часть 2. МУК 4.1.1217-4.1.1220-03. -
М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии
Роспотребнадзора, 2005