ГОСТ Р 51485-99

Группа С19

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

СЕМЕНА РАПСА

Определение содержания хлорофилла спектрометрическим методом

Rapeseed. Determination of chlorophyll content by spectrometric method

     
ОКС 67.200.20
ОКСТУ 9109

Дата введения 2001-01-01

Предисловие

     
     1 РАЗРАБОТАН Временным творческим коллективом, образованным в рамках договора N 9842002 Е 4075 между АФНОР и ВНИЦСМВ с участием членов Технического комитета по стандартизации ТК 238 "Масла растительные и продукты их переработки"
     
     ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 238 "Масла растительные и продукты их переработки"
     
     2 ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 22 декабря 1999 г. N 641-ст
     
     3 Настоящий стандарт гармонизирован с международным стандартом ИСО 10519:1997 "Семена рапса. Определение содержания хлорофилла. Спектрометрический метод"
     
     4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
     
     5 ПЕРЕИЗДАНИЕ
     
     

     1 Область применения

     Настоящий стандарт распространяется на семена рапса и устанавливает спектрометрический метод определения содержания хлорофилла.
     
     Метод не применим для определения хлорофилла в маслах.
     
     

     2 Нормативные ссылки

     В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:
     
     ГОСТ 4095-75 Изооктан технический. Технические условия
     
     ГОСТ 10852-86 Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб
     
     ГОСТ 10856-96 Семена масличные. Методы определения влажности
     
     ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия
     
     ГОСТ 24104-88* Весы лабораторные общего назначения и образцовые. Общие технические условия
________________
     * С 1 июля 2002 г. введен в действие ГОСТ 24104-2001.     
     
     ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные
     
     ГОСТ 25828-83 Гептан нормальный эталонный. Технические условия. Типы, основные параметры и размеры
     
     ГОСТ 29142-91 Семена масличных культур. Отбор проб
     
     ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-3-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования
     
     ГОСТ Р 51652-2000 Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия
     
     

     3 Сущность метода

     Сущность метода заключается в экстракции навески продукта в специальном аппарате со специальным растворителем для экстракции и в дальнейшем спектрометрическом определении содержания хлорофилла в экстракте.
     
     

     4 Определение

     В настоящем стандарте используют следующий термин с соответствующим определением:
     
     содержание хлорофилла: Масса фракции веществ в миллиграммах в 1 кг пробы, соответствующая полосе спектра поглощения с длиной волны около 665 нм, полученной в условиях, установленных настоящим стандартом, выраженная как хлорофилл А.
     
     Содержание хлорофилла выражается в миллиграммах на килограмм.
     
     

     5 Отбор проб

     5.1 Отбор проб - по ГОСТ 10852.
     
     При экспортно-импортных поставках - по ГОСТ 29142-91.
     
     

     6 Аппаратура, материалы и реактивы

     6.1 Спектрометр, пригодный для измерения поглощения в диапазоне длин волн от 600 до 700 нм, шириной спектральной полосы 2 нм.
     
     6.2 Кюветы оптические толщиной слоя вещества не менее 1 см.
     
     6.3 Устройства для измельчения зерновых и масличных культур: лабораторные электрические мельницы, бытовые электрокофемолки и другие, обеспечивающие проход через сито.
     
     6.4 Сито с металлотканой сеткой числом отверстий на 1 см 60-70, по [1].
     
     6.5 Микроразмельчитель тканей ножевой (рисунок 1).
     

1 - электродвигатель; 2 - вал с ножами (ножевая мешалка); 3 - сосуд для размельчения тканей; 4 - контейнер;
5 - каплеуловитель; 6 - тумблеры для включения прибора и изменения числа оборотов;
7 - корпус предохранителя

Рисунок 1 - Микроразмельчитель тканей ножевой

     6.6 Микроразмельчитель шариковый (рисунок 2).
     
     

1 - неопреновая или фторсиликоновая пробка N 3; 2 - стальная обшивка;
3 - шарики из нержавеющей стали 16 мм

Рисунок 2 - Микроразмельчитель шариковый

     6.7 Весы лабораторные 2-го класса точности наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104.
     
     6.8 Пипетка 1-1а(2)-1(2)-25 по ГОСТ 29227 или автоматический дозатор, позволяющий дозировать 30 см с погрешностью менее 10.
     
     6.9 Пробирки П4-20-14/23 ХС по ГОСТ 25336.
     
     6.10 Фильтровальная бумага ФНС по ГОСТ 12026, фильтр V-образной формы.
     
     6.11 Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ Р 51652 с последующим абсолютированием.
     
     6.12 Изооктан (2,2,4-триметилпентан) по ГОСТ 4095, безводный свежеперегнанный, фракция, перегоняющаяся при температуре 80-120 °С, или
     
     6.13 -гептан по ГОСТ 25828 безводный или
     
     6.14 Петролейный эфир (температурой кипения 90-100 °С) безводный по [2].
     
     Допускается использование другой аппаратуры и реактивов, по качеству и метрологическим характеристикам не уступающих перечисленным.
     
     

     7 Подготовка к определению

     7.1 Подготовка проб
     
     7.1.1 Из средней пробы выделяют семена рапса массой (50±5) г. Выделенные семена очищают от сорной примеси.
     
     7.1.2 Влажность анализируемых семян должна быть не менее 10%. При большей влажности семена подсушивают в сушильном шкафу при температуре 45 °С не более 12 ч.
     
     Перед измельчением проводят определение влажности в семенах по ГОСТ 10856.
     
     7.1.3 Очищенные и подсушенные семена измельчают в измельчающем устройстве до прохода всей массы измельченного материала через сито с металлотканой сеткой числом отверстий 60-70 на 1 см. Измельченные семена тщательно перемешивают и взвешивают две навески массой по (2±0,001) г для параллельных определений содержания хлорофилла.
     
     7.2 Подготовка растворителя для экстракции
     
     Для экстракции готовят растворитель, состоящий из смеси безводного этилового спирта - 1 часть и безводного изооктана (или безводного -гептана, или безводного петролейного эфира температурой кипения 90-100 °С) - 3 части.
     
     

     8 Проведение определения

     8.1 Экстракция с применением ножевого микроразмельчителя тканей (рисунок 1)
     
     8.1.1 Микроразмельчитель тканей ножевой - экстрактор блендерного типа, включающий контейнер, в котором устанавливается сосуд с измельченным растительным продуктом и растворителем для получения экстракта. Экстракция проводится при перемешивании ножевой мешалкой, ножи которой вращаются со скоростью 3000 или 5000 об/мин.
     
     Во избежание разбрызгивания экстрагируемого материала сосуд закрывают эбонитовой крышкой с тефлоновой прокладкой (или прокладкой из других материалов, устойчивых по отношению к растворителям).
     
     8.1.2 Взятую по 7.1.3 навеску измельченных семян (около 2 г) помещают в сосуд микроразмельчителя тканей и приливают с помощью пипетки 30 см растворителя для экстракции (7.2). Проводят экстракцию, включая прибор 3 раза по 5 мин с перерывами 10 мин, затем дают экстракту отстояться 10 мин и декантируют через бумажный фильтр в пробирку для дальнейшего заполнения оптической кюветы. Пробирку закрывают как можно плотнее для предотвращения испарения растворителя.
     
     Примечание - Помутнение или неоднородность раствора указывает на присутствие влаги в растворе.
     
     
     8.2 Экстракция в экстракционном сосуде из нержавеющей стали шарикового микроразмельчителя или в экстракционном сосуде шариковой мельницы (рисунок 2)
     
     8.2.1 Микроразмельчитель шариковый (рисунок 2), состоящий из надежно закрывающихся трубчатых сосудов из нержавеющей стали вместимостью (50±0,5) г с шариками из нержавеющей стали диаметром 16 мм и устройства для встряхивания горизонтально расположенных надежно закрытых сосудов частотой встряхивания 240 мин и горизонтальным смещением 3,5 см; или мельница шариковая с техническими характеристиками, аналогичными мельницам фирмы "Dangoumau".
     
     8.2.2 В сосуд из нержавеющей стали или в экстракционный сосуд шариковой мельницы взвешивают навеску измельченных семян массой 2 г с точностью до 0,001 г.
     
     В сосуд с помощью пипетки приливают 30 см растворителя для экстракции. Если используется трубчатый сосуд из нержавеющей стали, помещают в него три шарика из нержавеющей стали и встряхивают в течение 1 ч. При использовании шариковой мельницы добавляют в сосуд, по крайней мере, четыре стальных шарика среднего размера и проводят экстракцию в течение 20 мин.
     
     8.2.3 Дают экстракту отстояться в течение 10 мин и затем декантируют достаточный объем экстракта через бумажный фильтр в пробирку для заполнения оптической кюветы. Закрывают пробирку как можно плотнее для предотвращения испарения.
     
     8.3 Проведение
     
     Профильтрованный экстракт заливают в кювету спектрометра и измеряют поглощение при длинах волн 665, 705 и 625 нм (значения, полученные при 705 и 625 нм, используют для расчета поправки на линии основания).
     
     

     9 Обработка результатов

     Содержание хлорофилла , мг/кг продукта, рассчитывают по формуле
     

,                                                     (1)

     
где  - скорректированное значение поглощения по линии основания, эквивалентное
           
      - поглощение при 665 нм;
           
      - поглощение при 705 нм;
           
      - поглощение при 625 нм;
           
      - постоянная, равная 13;
           
      - толщина слоя в оптической кювете, см;
           
      - масса навески, г;
           
      - объем растворителя, прилитого в сосуд, см.
     
     Для выражения содержания хлорофилла в пересчете на сухое вещество нужно провести пересчет с учетом влажности семян, определенной по 7.1.2.
     
     

     10 Точность определения

     10.1 Повторяемость
     
     Расхождение между результатами двух независимых единичных определений, выполненных при использовании одного метода, на идентичном материале, в одной лаборатории, одним и тем же оператором, на одном оборудовании, в течение короткого промежутка времени, не должно превышать 10% по отношению к среднеарифметическому значению двух результатов при доверительной вероятности 0,95.
     
     10.2 Воспроизводимость
     
     Расхождение между результатами двух единичных определений, выполненных одним методом на идентичном испытуемом материале, в различных лабораториях, разными операторами, на различном оборудовании, не должно превышать 20% по отношению к среднеарифметическому значению двух результатов при доверительной вероятности 0,95.
     
     

     11 Требования техники безопасности

     11.1 Работы по приготовлению растворителя, проведению экстракции и фильтрации экстракта проводят в вытяжном шкафу с соблюдением правил личной гигиены.
     
     11.2 Необходимо соблюдать правила безопасности работы с размельчителем проб и микроразмельчителем тканей, а также основные правила работы с электроприборами.
     
     11.3 Изооктан горюч, легковоспламеним, токсичен при вдыхании. Помещение должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией.
     
     

     12 Протокол испытания

     Протокол испытания должен содержать следующую информацию:
     
     - ссылку на метод, в соответствии с которым проводился отбор проб, если он известен;
     
     - ссылку на использованный метод;
     
     - полученный(ые) результат(ы) испытания.
     
     Также должны быть указаны все подробности испытания, не отраженные в настоящем стандарте (или необязательные для применения), а также все случайности, которые могут повлиять на результаты.
     
     Протокол испытания должен включать всю информацию, необходимую для полной идентификации пробы.
     
     

ПРИЛОЖЕНИЕ А
(справочное)

Библиография

     [1] ТУ 14-4-1374-86 Сетки проволочные стальные для мукомольной промышленности
     
     [2] ТУ 38-101373-90 Петролейный эфир



Текст документа сверен по:
официальное издание
Семена масличных культур: Сб. ГОСТов. -
М.: ИПК Издательство стандартов, 2004