МУК 4.1.1395-03  

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Измерение концентраций метолахлора в корнеплодах сахарной и столовой свеклы,
зеленой массе растений, семенах масличных культур и растительном
масле методом газожидкостной хроматографии

     
     
Дата введения 2003-06-30

     
     
     УТВЕРЖДЕНЫ Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации Г.Г.Онищенко 24 июня 2003 г.
     
     

1. Вводная часть

     
     Фирма производитель: НОВАРТИС ПРОТЕКШН АГ (Швейцария).
     
     Торговое название: ДУАЛ, ДУАЛ ГОЛД.
     
     Действующее вещество: метолахлор (ISO).
     
     2-хлоро-6'-этил-N-(2-метокси-1-метилэтил)ацет-о-толуидид или хлоро-N-(2-этил-6-метилфенил)-N-(2-метокси-1-метилэтил)ацетамид (IUPAC).
     
     Структурная формула:
     
     

     Вязкая бесцветная жидкость. Плотность 1,12 г/см. Давление паров при 20 °С: 1,7 мПа.
     
     Растворимость в воде - 530 мг/дм. Хорошо растворим в органических растворителях: бензоле, хлористом метилене, гексане, метаноле, октаноле. Коэффициент распределения в системе октанол-вода - 2820.
     
     Метолахлор устойчив к действию света и УФ-излучения, не разлагается до температуры 300 °С. Стабилен в водных растворах с рН 1-9. Период полураспада в почве - 30 дней.
     
     Краткая токсикологическая характеристика: Метолахлор относится к малотоксичным веществам. ЛД для экспериментальных животных 894-4000 мг/кг. Кумулятивные свойства выражены слабо, слегка раздражает слизистые глаз. Малотоксичен для диких животных, птиц и пчел. СК (96 ч, мг/дм) для различных пород рыб 2-15.
     
     Гигиенические нормативы:
     
     ДСД массы тела человека - 0,002 мг/кг;
     
     ОДУ в воде водоемов - 0,02 мг/дм;
     
     ПДК в воздухе рабочей зоны - 1 мг/м;
     
     ПДК в почве - 0,02 мг/кг;
     
     МДУ в продукции:
     
     кукуруза, свекла сахарная, соя (семена), бахчевые, огурцы - 0,05 мг/кг;
     
     подсолнечник (семена), хлопчатник (семена) - 0,1 мг/кг;
     
     свекла столовая, растительное масло - 0,02 мг/кг.
     
     Область применения препарата: Применяется в качестве довсходового гербицида для борьбы с однолетними злаковыми и двудольными сорняками с нормой расхода 1-3 кг/га.
     
     

2. Методика измерения концентраций метолахлора в корнеплодах сахарной
 и столовой свеклы, зеленой массе растений, семенах масличных культур,
растительном масле методом газожидкостной хроматографии

     
2.1. Основные положения

     
2.1.1. Принцип методики

     
     Методика основана на определении метолахлора с помощью газожидкостной хроматографии с использованием термоионного детектора после извлечения препарата из проб органическим растворителем, очистке экстрактов осаждением коэкстрактивных веществ и перераспределением в системе двух несмешивающихся фаз.
     

2.1.2. Избирательность метода

     
     В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых для борьбы с сорной растительностью, защиты овощных и масличных культур от вредителей и болезней (хлор- и фосфорорганические пестициды, амиды, тио- и дитиокарбаматы, синтетические пиретроиды).
     

2.1.3. Метрологическая характеристика метода

     
     Метрологическая характеристика метода представлена в табл.
     
     

Таблица

     
Метрологическая характеристика методики измерения концентраций метолахлора

     
     
     Предел обнаружения в хроматографируемом объеме - 0,5 нг.
     
     Граница суммарной погрешности измерения - 15%.
     

          
2.4. Отбор и подготовка проб

     
     Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21 августа 1979 г. N 2051-79.
     
     Для длительного хранения пробы замораживаются и хранятся при температуре минус 18 °С.
     
     Корнеплоды, не размораживая, измельчают на терке, зеленую массу растений - ножницами.
     
     Семена масличных культур доводят до стандартной влажности при комнатной температуре в отсутствие прямого солнечного света и измельчают на мельнице.
     

2.5. Подготовка к определению

     
2.5.1. Подготовка и кондиционирование колонок для газожидкостной хроматографии

     
     Готовую насадку (3% OV-17 на хромосорбе 750 или 2% SE-30 на хромосорбе G-AW DMCS) засыпают в стеклянную колонку, уплотняют под вакуумом, колонку устанавливают в термостат хроматографа, не подсоединяя к детектору, и выдерживают при температуре 220 °С в течение 8 ч.
     

2.5.2. Подготовка растворителей

     
     Растворители, используемые для анализа, специальной подготовки не требуют.
     
     Рекомендуется проверить чистоту применяемых растворителей. Для этого 100 мл растворителя испаряют с помощью вакуумного ротационного испарителя при температуре 40 °С до объема 1 мл и хроматографируют. При обнаружении примесей, которые могут мешать определению, растворители очищают общепринятыми методами.
     

2.5.3. Приготовление растворов

     
     Коагулирующий раствор готовят растворением в мерной колбе на 500 мл 2,5 г хлористого аммония и 5 мл 85%-ной ортофосфорной кислоты в дистиллированной воде.
     
     0,1 М раствор ортофосфорной кислоты готовят растворением в мерной колбе на 1 л 9,8 г ортофосфорной кислоты в дистиллированной воде.
     
     Смесь ацетонитрила с 0,1 М раствором ортофосфорной кислоты (в соотношении 95:5, по объему) готовят растворением в мерной колбе на 1 л 50 мл 0,1 М раствора ортофосфорной кислоты в ацетонитриле.
     

2.5.4. Приготовление стандартных растворов

     
     Взвешивают 100 мг метолахлора, переносят в мерную колбу объемом 100 мл, доводят объем до метки изооктаном.
     
     Концентрация раствора 1 мг/мл (основной стандартный раствор N 1).
     
     Методом последовательного разбавления из основного стандартного раствора N 1 готовят рабочие стандартные растворы метолахлора в изооктане с концентрациями 0,25, 0,5, 1, 2, 5, 10 мкг/мл для построения калибровочного графика и определения степени извлечения.
     
     Основные и рабочие стандартные растворы гербицида устойчивы при хранении в холодильнике при температуре 4 °С в течение месяца.
     

2.5.5. Построение калибровочного графика

     
     Рабочие растворы метолахлора с концентрациями 0,25, 0,5, 1, 2, 5, 10 мкг/мл хроматографируют, а затем на основании данных хроматографирования рабочих стандартных растворов строят калибровочный график, откладывая на оси ординат площади (высоты) пиков, на оси абсцисс - количество метолахлора.
     
     Осуществляют не менее 5 параллельных измерений для каждой концентрации. Находят среднее значение высоты (площади) пика для каждой концентрации. Строят градуировочный график зависимости высоты в мм (площади в мв·с) хроматографического пика от концентрации метолахлора в растворе, мкг/мл.
     
     Калибровочный коэффициент, представляющий собой тангенс угла наклона полученной прямой к оси абсцисс, вычисляют по методу наименьших квадратов.
     

2.5.6. Подготовка приборов и средств измерения

     
     Установка и подготовка всех приборов и средств измерения производится в соответствии с требованиями стандартов и технической документации.
     

2.6. Описание измерения

     
2.6.1. Корнеплоды свеклы и зеленая масса растений

     
     Навеску растительной пробы 25-50 г помещают в коническую колбу на 250 мл, заливают 100 мл хлороформа и экстрагируют в течение 2 ч на аппарате для встряхивания. Экстракт отфильтровывают через слой безводного сульфата натрия. Колбу и фильтр трижды промывают хлороформом порциями по 10-15 мл. Объединенный экстракт отгоняют досуха на ротационном испарителе. Сухой остаток растворяют в 3 мл охлажденного ацетона и прибавляют 25-30 мл охлажденной коагулирующей смеси. Колбу помещают на 30-40 мин в холодильник, после чего содержимое отфильтровывают через фильтр "синяя лента" в делительную воронку. Из коагулирующего раствора метолахлор экстрагируют трижды н-гексаном порциями по 30 мл. Объединенный гексановый экстракт сушат, пропуская через слой безводного сульфата натрия, и упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре не выше 50 °С.
     
     Сухой остаток растворяют в 1-2 мл изооктана и хроматографируют.
     

2.6.2. Семена масличных культур

     
     Измельченную навеску семян (25 г) помещают в плоскодонную колбу на 250 мл, заливают 150 мл смеси ацетонитрила с 0,1 М раствором ортофосфорной кислоты, экстрагируют в течение 30 мин на электромеханическом встряхивателе и оставляют на ночь в холодильнике при температуре от 0 до -5 °С. Охлажденную пробу фильтруют через фильтр "белая лента" в круглодонную колбу на 500 мл. Осадок на фильтре и колбу трижды промывают охлажденной смесью ацетонитрила с раствором ортофосфорной кислоты порциями по 30 мл.
     
     Объединенный экстракт упаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при температуре бани не выше 45 °С. Сухой остаток растворяют в 3 мл охлажденного ацетона, тщательно обмывая стенки колбы, и прибавляют 25-30 мл охлажденной коагулирующей смеси. Колбу помещают на 30-40 мин в холодильник, после чего содержимое отфильтровывают через фильтр "синяя лента" в делительную воронку. Из коагулирующего раствора метолахлор экстрагируют трижды н-гексаном порциями по 30 мл. Объединенный гексановый экстракт сушат, пропуская через слой безводного сульфата натрия, и упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре не выше 50 °С.
     
     Сухой остаток растворяют в 1-2 мл изооктана и хроматографируют.
     

2.6.3. Растительное масло

     
     Навеску растительного масла (25 г) помещают в плоскодонную колбу на 250 мл, приливают 70 мл смеси ацетонитрила с 0,1 М раствором ортофосфорной кислоты, встряхивают в течение 10 мин на электромеханическом встряхивателе и оставляют на ночь в холодильнике при температуре от -3 до -5 °С. Охлажденный водно-ацетонитрильный слой декантируют в круглодонную колбу на 250 мл, фильтруя через фильтр "синяя лента".
     
     Растворитель упаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при температуре бани не выше 50 °С. Остаток растворяют в 3 мл ацетона, тщательно обмывая стенки колбы, и прибавляют 25-30 мл охлажденной коагулирующей смеси. Колбу помещают на 30-40 мин в холодильник, после чего содержимое отфильтровывают через фильтр "синяя лента" в делительную воронку. Из коагулирующего раствора метолахлор экстрагируют трижды н-гексаном порциями по 30 мл. Объединенный гексановый экстракт сушат, пропуская через слой безводного сульфата натрия, и упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре не выше 50 °С.
     

2.7. Условия хроматографирования

     
     Газовый хроматограф, снабженный термоионным детектором (PYE-UNICAM серии 200, HP-5840, Цвет серии 500 или аналогичные).
     
     Носитель - хромосорб 750 (100-120 меш).
     
     Неподвижная фаза - 3% OV-17.
     
     Колонка стеклянная, длиной 1,8 м и внутренним диаметром 2 мм.
     
     Газ-носитель - азот высокой чистоты или гелий очищенный марки Б.
     

     
Альтернативный вариант:

     
     Носитель - хромосорб N-AW DMCS (80-100 меш).
     
     Неподвижная фаза - 2% SE-30.
     
     Колонка стеклянная, длиной 2,7 м и внутренним диаметром 2 мм.
     

     
     Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и определяют среднюю высоту (площадь пика).
     
     Пробы, дающие пики метолахлора, по величине большие, чем стандартный раствор с концентрацией 10 мкг/мл, разбавляют.
     

2.8. Обработка результатов анализа

     
     Содержание метолахлора в пробах (, мг/кг) вычисляют по формуле:
     

,

где  - концентрация стандартного раствора метолахлора, мкг/мл;

     
      - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл;
     
      - объем раствора анализируемой пробы, вводимого в хроматограф, мкл;
     
      - объем стандартного раствора, вводимого в хроматограф, мкл;
     
      - масса пробы, отобранной для анализа, г;
     
      - площадь (высота) пика метолахлора в пробе, мв·с (мм), мм;
     

      - площадь (высота) пика метолахлора в стандартном растворе, мв·с (мм), мм.

3. Требования техники безопасности

     
     Необходимо соблюдать все требования безопасности при работе в химических лабораториях, в соответствии с "Правилами устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемиологического режима и личной гигиены при работе в лечебных и санитарно-эпидемиологических учреждениях системы МЗ СССР" (N 2455-81 от 20.10.81), а также требования, изложенные в документации на приборы.
     
     

4. Контроль погрешности измерений

     
     Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости результатов измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95. ГСИ "Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа".
     
     

5. Разработчики

     
     Долженко В.И. (Всероссийский НИИ защиты растений, г.Санкт-Петербург-Пушкин), Маслаков С.Е., Басова Ю.Г., Сабуров Г.Г. (Санкт-Петербургский НИИ лесного хозяйства, г.Санкт-Петербург).
          
     
     

Текст документа сверен по:
официальное издание
Сборник методических указаний. Вып.3.
Часть 3. МУК 4.1.1395-4.1.1398-03. -          
М.: Федеральный центр госсанэпиднадзора
Минздрава России, 2004