ГОСТ 26968-86

Группа Н49

     
     
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

     

САХАР

     
Методы микробиологического анализа

     
Sugar. Methods of microbiological analysis

     
     
ОКСТУ 9109

Дата введения 1987-07-01

     
     
     ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 1 августа 1986 г. N 2321
     
     Ограничение срока действия снято по протоколу N 2-92 Межгосударственного Совета по стандартизации, метрологии и сертификации (ИУС 2-93)
     
     ИЗДАНИЕ с Изменением N 1, утвержденным в апреле 1995 г. (ИУС 7-95)
     
     
     Настоящий стандарт распространяется на сахар-песок, сахар-рафинад, рафинированный сахар-песок и жидкий сахар и устанавливает методы определения общего количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов, количества дрожжей и плесневых грибов.
     
     Методы основаны на высеве определенного количества раствора сахара в агаризованную питательную среду, выращивании посевов, подсчете всех выросших видимых колоний, а для дрожжей и плесневых грибов - колоний, типичных по макро- или микроскопической морфологии и определении микроорганизмов в 1 г сахара.
     
     (Измененная редакция, Изм. N 1).
     
     

1. ОТБОР И ПОДГОТОВКА ПРОБ

     
     1.1. Отбор проб сахара для микробиологического анализа проводят по ГОСТ 12569-85 и ГОСТ 26668-85.
     
     Пробы от продуктов отбирают асептическим способом, исключающим микробное загрязнение продукта из окружающей среды.
     
     При отборе проб жидкого сахара из резервуара, оснащенного краном, кран сначала промывают, вытирают ватой, пропитанной этиловым спиртом, и обжигают в пламени. Затем выпускают до 500 см жидкого сахара (в зависимости от вместимости резервуара и диаметра крана) и только после этого отбирают пробы в посуду, заполняя 3/4 ее объема.
     
     Широкогорлую посуду закрывают ватными пробками, сверху пробки накладывают чистую бумагу и плотно прижимают ее к горлу посуды. Банки закрывают крышками, предварительно обработанными этиловым спиртом, маркируют этикетками с указанием номера резервуара и крана, даты отбора проб и доставляют на анализ.
     
     1.2. Пробы отбирают стерильным пробоотборником в стерильную посуду (банки, полиэтиленовые пакеты).
     
     Посуду, инструменты и материалы, соприкасающиеся с продуктами во время отбора проб, предварительно стерилизуют одним из следующих способов:
     
     насыщенным паром в стерилизаторе при температуре (121±2) °С 30 мин;
     
     горячим воздухом в стерилизаторе: с принудительной циркуляцией воздуха при температуре 170-175 °С в течение 60 мин;
     
     без принудительной циркуляции воздуха при температуре 180-185 °С в течение 15 мин, при температуре 165-170 °С в течение 120 мин.
     
     Допускается инструменты обрабатывать погружением в этиловый спирт с последующим обжиганием.
     
     1.3. Отобранные пробы, предназначенные для анализа вне предприятия-изготовителя, пломбируют и опечатывают печатью организации, отвечающей за контролируемую продукцию, и транспортируют в лабораторию. Пробы снабжают актом отбора проб, в котором указывают наименования продукта, предприятия-изготовителя, номер партии, дату отбора проб, цель микробиологического анализа, подписи лиц, отбиравших пробу. Время перевозки до 12 ч с момента отбора проб.
     
     Отбор, транспортирование в лабораторию и вскрытие проб проводят в условиях, исключающих вторичную микробиальную обсеменость сахара, в соответствии с методами, утвержденными в установленном порядке.
     
     1.1-1.3. (Измененная редакция, Изм. N 1).
     
     1.4. Анализ проводят сразу же после доставки сахара в лабораторию.
     
     1.5. Перед вскрытием полиэтиленового пакета с сахаром его перемешивают 10-кратным переворачиванием или круговым движением.
     
     Пробы сахара в полиэтиленовых пакетах вскрывают на столе, предварительно обработанном раствором этилового спирта.
     
     Полиэтиленовые пакеты вскрывают стерильными ножницами, скальпелем или другим инструментом в месте, предварительно обработанном тампоном, смоченным раствором этилового спирта, горлышко банки до и после вскрытия обжигают в пламени спиртовой горелки.
     
     1.6. После вскрытия пакета или банки с сахаром содержимое перемешивают, стерильными ложкой или шпателем отбирают навеску и переносят ее в предварительно взвешенную стерильную посуду.
     
     Навески сахара отбирают немедленно после вскрытия упаковки, в непосредственной близости от огня.
     
     1.5, 1.6. (Измененная редакция, Изм. N 1).
     
     

2. АППАРАТУРА, МАТЕРИАЛЫ, РЕАКТИВЫ

     
     2.1. Для проведения анализа используют следующие аппаратуру, материалы и реактивы:
     
     микроскоп;
     
     термостат;
     
     шкаф сушильный с терморегулятором, обеспечивающим нагрев до 190 °С;
     
     баню водяную;
     
     весы лабораторные 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104-2001;
     
     рефрактометр;
     
     рН-метр;
     
     колбы 2-100-2 по ГОСТ 1770-74 и колбы Кн-2-250-34 ТС и Кн-2-1000-42 ТС по ГОСТ 25336-82;
     
     палочки стеклянные;
     
     пипетки вместимостью 1, 2 или 5 см;
     
     пробирки П1-16-150 ХС по ГОСТ 25336-82;
     
     стекла покровные по ГОСТ 6672-75;
     
     стекла предметные по ГОСТ 9284-75;
     
     термометры стеклянные ртутные от 0 до 50 °С и от 50 до 100 °С по ГОСТ 28498-90 и нормативным документам;
     
     цилиндры 1(3)-100 по ГОСТ 1770-74;
     
     чашки ЦБН-2 (Петри) по ГОСТ 25336-82;
     
     бумагу фильтровальную по ГОСТ 12026-76;
     
     вату медицинскую гигроскопическую по ГОСТ 5556-81;
     
     марлю медицинскую по ГОСТ 9412-93;
     
     лупу складную карманную по ГОСТ 25706-83;
     
     ножи и скальпели медицинские по ГОСТ 21240-89;
     
     пинцеты по ГОСТ 21241-89;
     
     спиртовку по ГОСТ 25336-82 или газовую горелку;
     
     мясо-пептонный бульон (МПБ);
     
     агар микробиологический по ГОСТ 17206-96;
     
     воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72;
     
     спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962-67*;
     
     спирт этиловый ректификованный технический по ГОСТ 18300-87;
     
     сусло солодовое неохмеленное;
     
     кислоту лимонную по ГОСТ 908-79, раствор с массовой долей 20%; готовят следующим образом: 20 г лимонной кислоты переносят в мерную колбу, доводят объем водой до 100 см, разливают в пробирки или колбы и стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 20 мин;
     
     пробоотборник или щуп из нержавеющей стали;
     
     чашка нейзильберовая вместимостью 150 см.
_____________
     * На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 51652-2000.
     
     Допускается применение другой аппаратуры, лабораторной посуды с метрологическими и техническими характеристиками не ниже установленных в настоящем стандарте.
     
     (Измененная редакция, Изм. N 1).
     
     

3. ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ

     
     3.1. Подготовка посуды и материалов
     
     3.1.1. Посуду, предназначенную для микробиологического анализа, моют, а новую - дополнительно кипятят в подкисленной воде (раствор соляной кислоты массовой долей 1-2%) в течение 15 мин, затем ополаскивают дистиллированной водой и стерилизуют.
     
     Посуду стерилизуют в сушильном шкафу при температуре 170 °С в течение 2 ч или в стерилизаторе при температуре (121±2) °С в течение 30 мин с последующим подсушиванием.
     
     Чашки Петри, пипетки стерилизуют завернутыми в бумагу или в металлических пеналах. В конец пипетки предварительно вкладывают кусочек ваты. Резиновые пробки стерилизуют в стерилизаторе, завернутыми в бумагу.
     
     Стерильную посуду хранят в плотно закрывающихся шкафах.
     
     3.1, 3.1.1. (Измененная редакция, Изм. N 1).
     
     3.2. Приготовление питательных сред
     
     3.2.1. Приготовление мясо-пептонного агара
     
     К 1000 см мясо-пептонного бульона прибавляют 20 г агара, нагревают на водяной бане до растворения, фильтруют через вату, разливают в колбы и стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 15 мин.
     
     3.2.2. Приготовление солодового сусла-агара
     
     1000 см неохмеленного солодового сусла, разбавленного питьевой водой до массовой доли сухих веществ 8-10%, фильтруют через вату, прибавляют 20 г агара, нагревают на водяной бане до расплавления агара, затем разливают в стерильные колбочки и стерилизуют 15 мин при температуре (115±1)°С.
     
     Среду охлаждают до (45-55) °С и устанавливают рН 3,6±0,1, добавляя 2-3 см раствора лимонной кислоты с массовой долей 20%. Готовую среду хранят в холодильнике при температуре (4±1) °С не более 7 сут. Если по истечении 7 сут среда остается стерильной, то допускается хранение ее в течение 1 мес.
     
     3.3. Проведение серии десятикратных разведений
     
     В нейзильберовой чашке, предварительно обработанной этиловым спиртом и обожженной над спиртовкой, взвешивают 10 г сахара, записывая результат взвешивания до второго десятичного знака.
     
     Навеску переносят в плоскодонную колбу с 90 см стерильной воды, взбалтывают до полного растворения и получают первое (исходное) разведение.
     
     Второе разведение готовят из одной части первого разведения и девяти частей стерильной воды путем смешивания в стерильной колбе или пробирке.
     
     Разведения готовят до такой степени, чтобы можно было определить предполагаемое количество микроорганизмов в 1 г сахара.
     
     При приготовлении разведений растворы перемешивают стерильной пипеткой путем десятикратного насасывания и выдувания из нее содержимого.
     
     Интервал между приготовлением навесок или их разбавлений и высевом в питательные среды не должен превышать 30 мин.
     
     (Измененная редакция, Изм. N 1).
     
     

4. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

     
     4.1. Метод определения общего количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов
     
     4.1.1. Из разведений, приготовленных по п.3.3, стерильной пипеткой отбирают по 1 или 2 см исследуемого раствора сахара и высевают параллельно в две чашки Петри для каждого разведения. При посеве крышку чашки Петри слегка приоткрывают и посевной материал вносят на дно чашки.
     
     В каждую чашку Петри не позднее чем через 15 мин добавляют 15-20 см питательной среды (мясо-пептонного агара). Чашки осторожно вращают круговыми движениями, чтобы посевной материал равномерно распределился по всей питательной среде, и оставляют в горизонтальном положении до полного застывания. После застывания среды чашки помещают в термостат вверх дном на (72±3) ч при температуре (30±1) °С.
     
     4.2. Метод определения количества дрожжей и плесневых грибов
     
     Из разведений, приготовленных по п.3.3, стерильной пипеткой отбирают по 1 или 2 см исследуемого раствора сахара и высевают параллельно в две чашки Петри для каждого разведения. При посеве крышку чашки Петри слегка приоткрывают и посевной материал вносят на дно чашки. Пробу заливают 15-20 см питательной среды (солодовое сусло-агар). Чашки осторожно вращают круговыми движениями, чтобы посевной материал равномерно распределился по всей питательной среде, и оставляют в горизонтальном положении до полного застывания. После застывания среды чашки помещают в термостат вверх дном на 120 ч при температуре 24-30 °С.
     
     4.3. Бактерии группы кишечных палочек и патогенных микроорганизмов определяют по методам, утвержденным органами государственного санитарно-эпидемиологического надзора.
     
     4.2, 4.3. (Измененная редакция, Изм. N 1).
     
     

5. ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ

     
     5.1. После термостатирования через 24 ч для мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов и через 72 ч для дрожжей и плесневых грибов проводят предварительный подсчет колоний.
     
     5.2. Окончательный подсчет колоний проводят через (72±3) ч для мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов и через 120 ч для дрожжей и плесневых грибов.
     
     При окончательном подсчете дрожжевых колоний допускается их микроскопировать.
     
     Если колоний немного, количество определяют визуально; если много, то подсчет ведут на 1/4 или 1/8 площади чашки при помощи лупы, делая затем пересчет на всю чашку и на количество засеянного сахара.
     
     Колонии микроорганизмов подсчитывают в каждом из параллельных посевов одного разведения. По результатам подсчета вычисляют среднеарифметическое значение количества колоний во всех посевах одного разведения.
     
     Если имеются колонии, выросшие не из одного, а из следующих друг за другом разведений, то подсчитывают количество микроорганизмов в сахаре по результатам подсчета колоний в каждом из этих разведений раздельно и вычисляют среднеарифметическое значение.
     
     Количество микроорганизмов в 1 г сахара () вычисляют по формуле
     

,

     
где  - среднеарифметическое значение количества микроорганизмов в одном разведении;
     
       - степень разведения продукта;
     
      - объем посевного материала, внесенного в чашку, см.
     
     Полученные результаты округляют:
     
     до числа, кратного 5, - если среднеарифметическое значение количества микроорганизмов менее 100 (например, 71 до 75; 83 до 85);
     
     до числа, кратного 20, - если среднеарифметическое значение количества микроорганизмов более 100 и оканчивается цифрой 5 (например, 115 до 120; 125 до 140);
     
     до числа, кратного 10, - если среднеарифметическое значение количества микроорганизмов более 100 и не оканчивается цифрой 5 (например, 116 до 110; 111 до 110; 121 до 120).
     
     Результат вычислений выражают числом - от 1,0 до 9,9, умноженным на 10,
     
где  - соответствующая степень разведения продукта.
     
     Пример: 75-0,75х10; 1110-1,11х10.
     
     
     
Текст документа сверен по:
официальное издание
Сахар. Технические условия. Правила приемки.
Методы анализа: Сб. ГОСТов. -
М.: ИПК Издательство стандартов, 2002