МУК 4.1.1695-03

     
     
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Измерение массовых концентраций 2-(2,6-дихлорфениламино)имидазолина
гидрохлорида (клофелин, клонидин) в воздухе рабочей зоны
методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

     

Дата введения: с момента утверждения

     
     
     РАЗРАБОТАНЫ Государственным унитарным предприятием "Всероссийский научный центр по безопасности биологически активных веществ" (ГУП "ВНЦ БАВ"): В.П.Жестков, А.П.Крымов, В.Ф.Алещенко, Л.И.Крымова.
     
     УТВЕРЖДЕНЫ Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации Г.Г.Онищенко 29 июня 2003 г.
     
     

1. Область применения

     
     Настоящие методические указания устанавливают количественный анализ воздуха рабочей зоны на содержание клофелина методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в диапазоне массовых концентраций 0,0005-0,005 мг/м.
     
     

2. Характеристика вещества

     
     2.1. Структурная формула      
     

     
     2.2. Эмпирическая формула CHClN·НСl.
     
     2.3. Молекулярная масса 266,60.
     
     2.4. Регистрационный номер CAS 4205-91-8.
     
     2.5. Физико-химические свойства.
     
     Клофелин - белый кристаллический порошок. Растворим в воде, этиловом и метиловом спиртах, плохо растворим в хлороформе и эфире.
     
     Агрегатное состояние в воздухе - аэрозоль.
     
     2.6. Токсикологическая характеристика.
     
     Клофелин - производное имидазолина, гипотензивное средство центрального действия с седативным эффектом, оказывает остро направленное действие на ЦНС, обладает общетоксическим, кумулятивным и резко выраженным кожно-резорбтивным действием. Клофелин эффективен в чрезвычайно низких дозах (от 0,0375 мг). При работе с клофелином должен быть исключен его контакт с органами дыхания и кожей.
     
     Предельно допустимая концентрация (ПДК) клофелина в воздухе рабочей зоны 0,001 мг/мг; 1 класс опасности.
     
     

3. Погрешность измерений

     
     Методика обеспечивает выполнение измерений массовых концентраций клофелина с погрешностью, не превышающей ±19%, при доверительной вероятности 0,95.
     
     

4. Метод измерений

     
     Измерения массовой концентрации клофелина выполняют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с применением УФ-детектора.
     
     Измерение проводят при длине волны 210 нм.
     
     Отбор проб проводят с концентрированием на фильтр.
     
     Нижний предел измерения содержания клофелина в хроматографируемом объеме пробы (10 мм) - 0,04 мкг.
     
     Нижний предел измерения массовой концентрации клофелина в воздухе - 0,0005 мг/м (при отборе 8000 дм воздуха).
     
     Метод специфичен в условиях производства таблеток клофелина.
     
     Определению не мешают крахмал картофельный, целлюлоза мелкокристаллическая, лактоза, магний стеариновокислый.
     
     

5. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы,
реактивы и растворы

     
     При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы и растворы.
     

5.1. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы

     
     Допускается применение иных средств измерений, вспомогательных устройств, реактивов и материалов с техническими, метрологическими характеристиками и квалификацией не хуже приведенных в данном разделе.
     
     

6. Требования безопасности

     
     6.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005-88.
     
     6.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ должны соблюдаться меры противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91.
     
     6.3. При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа высокого давления соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.
     
     

7. Требования к квалификации операторов

     
     К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются лица с высшим или средним специальным образованием, прошедшие обучение и имеющие навыки работы на жидкостном хроматографе высокого давления.
     
     

8. Условия измерения

     
     8.1. Процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха (20±5) °С, атмосферном давлении 84-106 кПа и относительной влажности воздуха не более 80%.
     
     8.2. Выполнение измерений на жидкостном хроматографе высокого давления проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
     
     

9. Подготовка к выполнению измерений

     
     Перед выполнением измерений проводят следующие работы: приготовление растворов, элюента, подготовка жидкостного хроматографа высокого давления, установление градуировочной характеристики, отбор проб.
     

9.1. Приготовление растворов

     
     9.1.1. Основной стандартный раствор клофелина с концентрацией 500 мкг/см готовят растворением 0,0500 г вещества в элюенте в мерной колбе вместимостью 100 см. Раствор устойчив в течение 7 суток при хранении в холодильнике.
     
     9.1.2. Стандартный раствор клофелина N 1 с концентрацией 100 мкг/см готовят разбавлением 5 см основного стандартного раствора элюентом в мерной колбе, вместимостью 25 см. Раствор применяют свежеприготовленным.
     
     9.1.3. Стандартный раствор клофелина N 2 с концентрацией 40 мкг/см готовят разбавлением 10 см стандартного раствора N 1 элюентом в мерной колбе вместимостью 25 см. Раствор применяют свежеприготовленным.
     
     9.1.4. 0,01 М водный раствор кислоты ледяной уксусной. В мерную колбу вместимостью 1000 см приливают 800 см дистиллированной воды, добавляют 0,58 см ледяной уксусной кислоты (плотность 1,05 г/см), доводят объем раствора дистиллированной водой до 1000 см и перемешивают. Раствор устойчив в течение 30 суток.
     
     9.1.5. 0,01 М раствор аммония уксусно-кислого с рН 6,6. Растворяют 0,770 г аммония уксусно-кислого в 800 см дистиллированной воды, доводят кислотой уксусной или аммиаком до рН 6,60±0,02, после чего доводят объем раствора водой до 1000 см и перемешивают. Раствор устойчив в течение 30 суток.
     
     9.1.6. Элюент: непосредственно перед измерением в мерную колбу, вместимостью 500 см, помещают 250 см 0,01 М раствора аммония уксусно-кислого с рН 6,60±0,02, прибавляют ацетонитрил до 500 см и перемешивают. Затем раствор фильтруют с помощью фильтров типа "Миллипор" или "Владипор" и дегазируют пропусканием гелия в течение 15 мин.
     

9.2. Подготовка прибора

     
     Подготовку жидкостного хроматографа высокого давления проводят в соответствии с руководством по его эксплуатации.
     

9.3. Установление градуировочной характеристики

     
     Градуировочную характеристику, выражающую зависимость высоты пика (мм) от массы клофелина в хроматографируемом объеме раствора пробы, устанавливают по методу абсолютной калибровки с использованием 6 серий градуировочных растворов из 5 параллельных определений для каждой серии, согласно табл.1.
     

Таблица 1

     
Растворы для установления градуировочной характеристики
при определении клофелина

     
     
     Растворы применяют свежеприготовленными.
     
     Условия хроматографирования градуировочных смесей и анализируемых проб:
     
     Температура термостата колонки 20 °С.
     
     Скорость подачи элюента 100 мкл/мин.
     
     Чувствительность измерения детектора 0,1.
     
     Длина волны УФ-детектора 210 нм.
     
     Скорость движения диаграммной ленты 3 мм/мин. Максимальный объем вводимой пробы 10 мм. Время удерживания клофелина 3 мин 9 с.
     
     Эффективность колонки не менее 1000 т.т.
     
     Проверку градуировочного графика проводят не реже 1 раза в месяц или в случае использования новой партии реактивов или после ремонта прибора.
     

9.4. Отбор пробы воздуха

     
     Воздух с объемным расходом 400 дм/мин аспирируют через фильтр АФА-ВП-20, помещенный в фильтродержатель. Для измерения ПДК клофелина следует отобрать 8000 дм воздуха. Отобранные пробы могут храниться в течение трех суток в бюксах с пришлифованными крышками.
     
     

10. Выполнение измерения

     
     Фильтр с отобранной пробой переносят в химический бюкс с пришлифованной крышкой, вместимостью 25 см, приливают 5 см 95%-ного этилового спирта и оставляют на 15 мин, периодически помешивая стеклянной палочкой для лучшего растворения вещества. Затем фильтр отжимают и повторно обрабатывают 5 см 95 %-го этилового спирта. Фильтр снова тщательно отжимают стеклянной палочкой и удаляют. Оба раствора последовательно фильтруют на химической воронке через бумажный фильтр "белая лента" в мерную пробирку, вместимостью 10 см, и доводят 95%-ным этиловым спиртом до метки. Полученный раствор сливают в грушевидную колбу, вместимостью 25 см, и упаривают под вакуумом при температуре 60-70 °С досуха. Сухой остаток растворяют в 1 см элюента и помещают в ультразвуковую баню на 10 мин. Степень десорбции вещества с фильтра 98%.
     
     Хроматографирование анализируемых растворов проб проводят в тех же условиях, что и при построении градуировочной характеристики.
     
     Количественное определение содержания клофелина (в мкг) в хроматографируемом объеме раствора пробы проводят по предварительно построенному градуировочному графику.
     
     Примечание: фильтрование растворов анализируемых проб проводится для удаления не растворимых в 95%-ном этиловом спирте вспомогательных веществ, входящих в состав таблеток клофелина.
     
     

11. Вычисление результатов измерений

     
     Массовую концентрацию клофелина (, мг/м) в воздухе вычисляют по формуле:
     

,

     
где  - содержание клофелина в хроматографируемом объеме раствора, найденное по градуировочному графику, мкг;
     
      - общий объем раствора пробы, см;
     
      - хроматографируемый объем пробы, см;
     
      - объем воздуха, отобранного для анализа (дм) и приведенного к стандартным условиям (прилож.1).
     
     

12. Оформление результатов анализа

     
     Результат количественного анализа представляют в виде:
     

, мг/м, 0,95

     
     Значение 0,000018+0,19 (мг/м),
     

где  - характеристика погрешности.

     
     
13. Контроль погрешности методики КХА

     
Таблица 2

     
Значения характеристики погрешности, норматива оперативного контроля погрешности
и норматива оперативного контроля воспроизводимости

     
     
     Метрологические характеристики приведены в виде зависимости от значения массовой концентрации анализируемого компонента в пробе - .
     

13.1. Оперативный контроль погрешности

     
     Оперативный контроль погрешности выполняют в одной серии с КХА рабочих проб.
     
     Образцами для контроля являются реальные пробы воздуха рабочей зоны. Объем отобранной для контроля пробы должен соответствовать удвоенному объему, необходимому для проведения анализа по методике. После отбора пробы экстракт с фильтра делят на две равные части, первую из которых анализируют в точном соответствии с прописью методики и получают результат анализа исходной рабочей пробы - . Вторую часть разбавляют соответствующим растворителем в два раза и снова делят на две равные части, первую из которых анализируют в точном соответствии с прописью методики, получая результат анализа рабочей пробы, разбавленной в два раза - . Во вторую часть делают добавку анализируемого компонента  до массовой концентрации исходной рабочей пробы  (общая концентрация не должна превышать верхнюю границу диапазона измерения) и анализируют в точном соответствии с прописью методики, получая результат анализа рабочей пробы, разбавленной в два раза, с добавкой - . Результаты анализа исходной рабочей пробы - , рабочей пробы, разбавленной в два раза - , и рабочей пробы, разбавленной в два раза с добавкой, - , получают по возможности в одинаковых условиях, т.е. их получает один аналитик с использованием одного набора мерной посуды, одной партии реактивов и т.д.
     
     Решение об удовлетворительной погрешности принимают при выполнении условия:
     

,

     
где  - результат анализа рабочей пробы;

     
      - результат анализа рабочей пробы, разбавленной в два раза;
     
      - результат анализа рабочей пробы, разбавленной в два раза, с добавкой анализируемого компонента;
     
      - величина добавки анализируемого компонента;
     
      - норматив оперативного контроля погрешности.
     

0,000025+0,21, (мг/м)

     
13.2. Оперативный контроль воспроизводимости

     
     Образцами для контроля являются реальные пробы воздуха рабочей зоны.
     
     Объем отобранной для контроля пробы должен соответствовать удвоенному объему, необходимому для проведения анализа по методике. После отбора пробы экстракт с фильтра делят на две равные части и анализируют в точном соответствии с прописью методики, максимально варьируя условия проведения анализа, т.е. получают два результата анализа в разных лабораториях или в одной, используя при этом разные наборы мерной посуды, разные партии реактивов. Два результата анализа не должны отличаться друг от друга на величину допускаемых расхождений между результатами анализа:
     

,

     
где  - результат анализа рабочей пробы;

     
      - результат анализа этой же пробы, полученный в другой лаборатории или в этой же, но другим аналитиком с использованием другого набора мерной посуды и других партий реактивов;
     
      - допустимые расхождения между результатами анализа одной и той же пробы.
     

0,000069+0,29, (мг/м)

     
     При превышении норматива оперативного контроля воспроизводимости эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива  выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, и устраняют их.
     
     

14. Нормы затрат времени на анализ

     
     Для проведения серии анализов из 6 проб требуется 5 ч.